【技术实现步骤摘要】
所属领域本专利技术属于微生物工程领域，涉及一种快速有效地保存并筛选海量宏 基因组克隆的方法，也就是高效保存和筛选宏基因组文库的方法。
技术介绍
宏基因组是指环境中可培养和未可培养的全部微生物的基因组总和， 宏基因组文库技术避开了微生物纯培养的瓶颈，是研究和利用微生物、尤其是未可培养微 生物资源的有效途径。将常规的基因组文库技术用于宏基因组研究中，通过直接提取环境 样品中所有微生物的DNA并克隆到合适的载体，即可获得宏基因组文库。根据插入片段大 小，宏基因组文库可以被分成两类一是克隆于质粒载体或λ噬菌体载体中的小片段文库 (插入片段小于15000碱基对)；另一类是克隆于粘粒及BAC中的大片段文库(插入片段大 于30000碱基对)。为了最大程度地涵盖感兴趣的所有微生物，宏基因组文库的容量通常在 一百万个克隆以上，对于如此海量的宏基因组文库克隆群体，有必要专利技术一种快速有效的 保存和筛选方法。宏基因组文库的传统保存方法包括挑取单个克隆、每8个或更多个单克 隆合并保存，这一方法不仅费时费力，而且需要占用很大的保存空间。此外，基于序列相似 性用探针进行分子杂交常用于宏基因组文库...
【技术保护点】
宏基因组文库的保存和筛选方法，其特征在于所述宏基因组文库的保存是用小量的文库包装颗料感染感受态细胞，保温后将其等分成９６份或９６的整倍数，振荡培养，加入甘油保存；所述宏基因组文库的筛选是用氢氧化钠加十二烷基磺酸钠溶液漂洗杂交膜，去除探针的同时保留膜上的ＤＮＡ模板用于不同探针的多次膜杂交。
【技术特征摘要】
宏基因组文库的保存和筛选方法，其特征在于所述宏基因组文库的保存是用小量的文库包装颗料感染感受态细胞，保温后将其等分成96份或96的整倍数，振荡培养，加入甘油保存；所述宏基因组文库的筛选是用氢氧化钠加十二烷基磺酸钠溶液漂洗杂交膜，去除探针的同时保留膜上的DNA模板用于不同探针的多次膜杂交。2.根据权利要求1所述的宏基因组文库的保存和筛选方法，其特征在于所述宏基因组 文库的保存是取1 100微升的文库包装颗粒与1 10毫升感受态细胞混勻，25 39°C保 温20 60分钟，将该细胞混合物等分成96份或96的整倍数，每份加0. 2~2ml LB培养液， 所述LB培养液为胰蛋白胨10克/升+酵母提取物5克/升+氯化钠5克/升，pH7. 0，在 28 39°C振荡培养12 24小时，加入甘油保存；所述宏基因组文库的筛选是把已进行过 探针杂交的杂交膜放入预热的0. 2M氢氧化钠加以重量/体...
【专利技术属性】
技术研发人员：曾英，付小莉，王浩鑫，
申请(专利权)人：中国科学院昆明植物研究所，
类型：发明
国别省市：53[中国|云南]
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