【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及单克隆抗体制备及免疫学检测，具体涉及针对雌二醇(e2)的单克隆抗体、基于其的检测试剂及其应用。
技术介绍
1、雌二醇(英文简称e2)是一种类固醇激素，主要由卵巢滤泡、黄体及妊娠时的胎盘分泌，其分子量约为272da。雌酮(英文简称e1)，雌二醇(英文简称e2)和雌三醇(英文简称e3)都是体内雌激素的主要形式，e2是雌激素中含量最高、生物活性最强的激素，其主要作用是促进子宫内膜转变为增殖期以及促进女性第二性征的发育，在评价卵巢功能方面具有重要的临床意义。此外，e2对内分泌系统、心血管系统、人体的代谢、骨骼的生长等方面也均有明显影响。
2、e1与e2之间可以相互转化，e3为e2的代谢产物，三者在结构上极其相似，因此对抗体特异性要求较高。目前市面上的e2抗体大都存在交叉反应问题，尤其针对e1有较强的干扰。现有的e2免疫测定方法主要包括化学发光法、免疫层析法，而这些免疫检测方法主要采用竞争法的原理，试剂在特异性和灵敏度方面都有所欠缺，而且线性范围较窄，导致临床样本低值端和高值端区分度较小，从而对检测结果造成误判。
3、鉴于现有技术中存在的上述问题，目前急需开发针对e2的高特异性、高亲和力的单克隆抗体以满足免疫学检测的需求，特别是开发高性能的配对抗体，以突破传统竞争法的局限，实现双抗体夹心法检测e2尤为重要。
技术实现思路
1、专利技术目的
2、针对现有技术中存在的问题或需求，本专利技术的目的在于提供针对雌二醇(英文简称e2)的高特异性、高亲和
3、解决方案
4、为了实现上述目的，本专利技术经过大量的筛选获得了高特异性、高亲和力的针对雌二醇(英文简称e2)的单克隆抗体或其抗原结合片段，其相关核酸及细胞产品，其制备方法和应用，以及基于其的免疫检测试剂，从而为e2的高特异性、高灵敏度免疫检测提供了基础。
5、具体地，本专利技术提供了如下技术方案：
6、第一方面，本专利技术提供了针对雌二醇的单克隆抗体或其抗原结合片段，所述单克隆抗体或其抗原结合片段包含：
7、(1)重链可变区，其具有氨基酸序列分别如seq id no:1、seq id no:2和seq idno:3所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3；和轻链可变区，其具有氨基酸序列分别如seq id no:6、aas和seq id no:7所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3；或，
8、(2)重链可变区，其具有氨基酸序列分别如seq id no:10、seq id no:11和seq idno:12所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3；和轻链可变区，其具有氨基酸序列分别如seq id no:15、gat和seq id no:16所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3；或，
9、(3)重链可变区，其具有氨基酸序列分别如seq id no:19、seq id no:20和seq idno:21所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3；和轻链可变区，其具有氨基酸序列分别如seq id no:24、las和seq id no:25所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3；或，
10、(4)重链可变区，其具有氨基酸序列分别如seq id no:28、seq id no:29和seq idno:30所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3；和轻链可变区，其具有氨基酸序列分别如seq id no:33、sas和seq id no:34所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3；或，
11、(5)重链可变区，其具有氨基酸序列分别如seq id no:37、seq id no:38和seq idno:39所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3；和轻链可变区，其具有氨基酸序列分别如seq id no:42、sas和seq id no:43所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3；或，
12、(6)重链可变区，其具有氨基酸序列分别如seq id no:46、seq id no:47和seq idno:48所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3；和轻链可变区，其具有氨基酸序列分别如seq id no:51、ats和seq id no:52所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3；或，
13、(7)重链可变区，其具有氨基酸序列分别如seq id no:55、seq id no:56和seq idno:57所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3；和轻链可变区，其具有氨基酸序列分别如seq id no:60、nak和seq id no:61所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3；或，
14、(8)重链可变区，其具有氨基酸序列分别如seq id no:64、seq id no:65和seq idno:66所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3；和轻链可变区，其具有氨基酸序列分别如seq id no:69、aas和seq id no:70所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3；或，
15、(9)重链可变区，其具有氨基酸序列分别如seq id no:73、seq id no:74和seq idno:75所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3；和轻链可变区，其具有氨基酸序列分别如seq id no:78、qms和seq id no:79所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3；
16、(10)重链可变区，其具有氨基酸序列分别如seq id no:82、seq id no:83和seqid no:84所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3；和轻链可变区，其具有氨基酸序列分别如seq idno:87、aas和seq id no:88所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3。
17、优选地，所述单克隆抗体或其抗原结合片段包含：
18、(1)重链可变区，其具有如seq id no:4所示的氨基酸序列；和轻链可变区，其具有如seq id no:8所示的氨基酸序列；或，
19、(2)重链可变区，其具有如seq id no:13所示的氨基酸序列；和轻链可变区，其具有如seq id no:17所示的氨基酸序列；或，
20、(3)重链可变区，其具有如seq id no:22所示的氨基酸序列；和轻链可变区，其具有如seq id no:26所示的氨基酸序列；或，
21、(4)重链可变区，其具有如seq id no:31所示的氨基酸序列；和轻链可变区，其具有如seq id no:35所示的氨基酸序列；或，
22、(5)重链可变区，其具有如seq id no:40所示的氨基酸序列；和轻链可变区，其具有如seq id no:44所示的氨基酸序列；或，
23、(6)重链可变区，其具有如seq id no:49所示的氨基酸序列；和轻链可变区，其具有如seq i本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.针对雌二醇的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述单克隆抗体或其抗原结合片段包含：
2.根据权利要求1所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述单克隆抗体或其抗原结合片段包含：
3.根据权利要求2所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述单克隆抗体或其抗原结合片段包含：
4.根据权利要求1-3中任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗原结合片段选自Fab、Fab'、F(ab')2、Fd、Fv、dAb、互补决定区片段、单链抗体、人抗体、嵌合抗体或双特异或多特异抗体。
5.多核苷酸，其编码如权利要求1-4任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段。
6.核酸构建体，其包含如权利要求5所述的多核苷酸，以及，任选地，与所述多核苷酸可操作地连接的至少一个表达调控元件。
7.一种重组载体，其包含如权利要求5所述的多核苷酸，或者如权利要求6所述的核酸构建体。
8.一种转化的宿主细胞，其包含如权利要求5所述的多核苷酸、如权利要求6所述的核酸构建体或如权利要求7所述的重组载体
9.如权利要求1-4任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段、如权利要求5所述的多核苷酸、如权利要求6所述的核酸构建体、如权利要求7所述的重组载体和/或如权利要求8所述的转化的宿主细胞在制备用于检测雌二醇的检测试剂或试剂盒中的应用。
10.选自如权利要求1-4任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段中的任意两种单克隆抗体或其抗原结合片段在制备用于检测雌二醇的检测试剂或试剂盒中的应用。
11.根据权利要求10所述的应用，其特征在于，所述两种单克隆抗体或其抗原结合片段选自：
12.一种用于检测雌二醇的检测试剂，其包含如权利要求1-4任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段、如权利要求5所述的多核苷酸、如权利要求6所述的核酸构建体、如权利要求7所述的重组载体和/或如权利要求8所述的转化的宿主细胞。
13.根据权利要求12所述的检测试剂，其特征在于，所述检测试剂为双抗体夹心免疫检测试剂盒，其包含选自如权利要求1-4任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段中的任意两种单克隆抗体或其抗原结合片段。
14.根据权利要求13所述的检测试剂，其特征在于，所述两种单克隆抗体或其抗原结合片段选自：
15.根据根据权利要求14所述的检测试剂，其特征在于，所述双抗体夹心免疫检测试剂盒包括双抗体夹心免疫层析试纸条，所述双抗体夹心免疫层析试纸条中：
16.一种制备如权利要求1-4任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段的方法，所述方法包括：在适合于所述单克隆抗体或其抗原结合片段表达的条件下，使权利要求8所述的转化的宿主细胞表达所述单克隆抗体或其抗原结合片段，并从所述宿主细胞的培养物中回收所表达的单克隆抗体或其抗原结合片段。
...【技术特征摘要】
1.针对雌二醇的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述单克隆抗体或其抗原结合片段包含：
2.根据权利要求1所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述单克隆抗体或其抗原结合片段包含：
3.根据权利要求2所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述单克隆抗体或其抗原结合片段包含：
4.根据权利要求1-3中任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗原结合片段选自fab、fab'、f(ab')2、fd、fv、dab、互补决定区片段、单链抗体、人抗体、嵌合抗体或双特异或多特异抗体。
5.多核苷酸，其编码如权利要求1-4任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段。
6.核酸构建体，其包含如权利要求5所述的多核苷酸，以及，任选地，与所述多核苷酸可操作地连接的至少一个表达调控元件。
7.一种重组载体，其包含如权利要求5所述的多核苷酸，或者如权利要求6所述的核酸构建体。
8.一种转化的宿主细胞，其包含如权利要求5所述的多核苷酸、如权利要求6所述的核酸构建体或如权利要求7所述的重组载体。
9.如权利要求1-4任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段、如权利要求5所述的多核苷酸、如权利要求6所述的核酸构建体、如权利要求7所述的重组载体和/或如权利要求8所述的转化的宿主细胞在制备用于检测雌二醇的检测试剂或试剂盒中的应用。
<...【专利技术属性】
技术研发人员：戴瞻，董万春，陶言梦，高歌，胡斌，宋丹，
申请(专利权)人：南京欧凯生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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