【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于细胞工程，具体涉及cd22抗体及其应用。
技术介绍
1、过继性免疫细胞治疗(adoptive cell therapy,act)是指从肿瘤患者分离免疫活性细胞，在体外进行扩增与功能鉴定后，然后再回输给患者，从而直接杀伤肿瘤或激发机体的免疫应答杀伤肿瘤细胞。
2、免疫治疗(immunotherapy)是继手术、放疗、化疗之后的第四种肿瘤治疗方法。嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,car)t细胞技术是新近迅速发展的一种细胞免疫治疗技术，car是一个人工合成的融合受体，在结构上包括胞外抗原结合区、跨膜区、胞内信号转导区与共刺激信号区。胞外区为识别肿瘤相关抗原的单克隆抗体序列(singlechainvariable fragment，scfv)，跨膜区连接胞外区与胞内区，常用的跨膜区分子有cd3、cd4、cd8与cd28等。胞内区具有免疫受体酪氨酸活化基序(itam)，最常用的是t细胞受体tcr/cd3ζ链和免疫球蛋白fc受体fcεriγ，主要负责信号转导功能；人们通过分子克隆方法将上述元件在体外进行重组，形成重组质粒，通过病毒载体、电穿孔等手段将重组质粒转导入t细胞，继之在体外培养扩增，最后回输到病人体内，起到治疗肿瘤的目的，这种经过基因修饰与改造的t细胞即称为car-t细胞。car-t细胞通过scfv段识别并结合肿瘤抗原，再通过cd3ζ链和共刺激信号区激活t细胞，这样改造的car-t细胞识别、杀伤肿瘤细胞就具有了两大特点：①靶向性；②克服了mhc限制性，即不再依赖mhc，因此
3、虽然靶向肿瘤表面抗原cd19的嵌合抗原受体t细胞在治疗急性b细胞白血病方面取得了高达93％的完全缓解(cr)率，但最终复发率也很高，专利cn111320703a中指出虽然靶向肿瘤表面抗原cd19的嵌合抗原受体t细胞在治疗急性b细胞白血病方面取得了高达93％的完全缓解(cr)率，但最终复发率也很高，文献以cd28为共刺激结构域的复发率高达50％，以4-1bb为共刺激结构域的复发率高达33％，所以有必要寻找新的靶点，作为cd19靶点的替代与补充。
4、肿瘤表面抗原cd22是一分子量为140kda的糖蛋白，是唾液酸结合免疫球蛋白样免疫球蛋白样凝集素家族的一员，有几个ig样的胞外区。它限制性表达在b细胞恶性肿瘤与正常b细胞中，60-80％的b细胞恶性肿瘤表达cd22。几乎所有的b前体细胞急性淋巴细胞白血病(b-all)表达cd22，90％以上的弥漫大b细胞淋巴瘤(dlbcl)和滤泡淋巴瘤(fl)表达cd22；慢性淋巴细胞白血病(b-cll)、毛细胞白血病(hcl)也具有高水平的cd22表达。与cd19类似，cd22同样是b细胞限制性表达，实质细胞与造血干细胞皆不表达cd22，因此cd22是car-t治疗恶性b细胞血液肿瘤疗法中，继cd19之外的又一理想靶点，也是目前很多单抗药物的靶抗原，开发一种cd22抗体应用于过继性免疫细胞治疗中也成为一种研究热点。
技术实现思路
1、本专利技术提供一种cd22抗体以及靶向cd22的嵌合抗原受体。
2、具体的，所述cd22抗体为cd22的scfv，所述cd22的scfv包含重链可变区和轻链可变区，所述轻链可变区包含l-cdr1、l-cdr2和l-cdr3，所述重链可变区包含h-cdr1、h-cdr2和h-cdr3；所述l-cdr1、l-cdr2和l-cdr3分别为如下序列：qsvssnl、gas、qqyhswpplt；所述h-cdr1、h-cdr2和h-cdr3分别为如下序列：gytftsyg、isayngnt、ardfqgiavadldy或其突变序列ardfqgiaeadldy。
3、进一步的，所述cd22的scfv包含如sequence no.1、sequence no.2或sequenceno.3所示的氨基酸序列或其功能性变体。
4、本专利技术提供的嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体包含如权利要求1或2所述的cd22的scfv。
5、进一步的，所述嵌合抗原受体包含胞外结构域、铰链区、跨膜区和胞内信号域，所述铰链区为cd8a，所述cd8a的氨基酸序列如sequence no.4或sequence no.5所示或其功能性变体。
6、进一步的，所述跨膜区为cd8a或cd28，所述cd8a的氨基酸序列如sequence no.6所示或其功能性变体，所述cd28的氨基酸序列如sequence no.7所示或其功能性变体。
7、进一步的，所述胞内信号域为cd28和或cd137和或hvem和或cd3，所述cd28的氨基酸序列如sequence no.8所示或其功能性变体，所述cd137的氨基酸序列如sequence no.9所示或其功能性变体，所述hvem的氨基酸序列如sequence no.10所示或其功能性变体，所述cd3ζ氨基酸序列如sequence no.11或sequence no.12所示或其功能性变体。
8、进一步的，所述嵌合抗原受体的氨基酸序列如sequence no.13、sequence no.14、sequence no.15、sequence no.16、sequence no.17、sequence no.18、sequence no.19所示或其功能性变体。
9、进一步的，所述嵌合抗原受体还包括信号肽，所述信号肽为cd8a，所述cd8a的氨基酸序列如sequence no.20所示或其功能性变体。
10、本专利技术还提供一种核酸分子，所述核酸分子编码如上所述任意一项所述的嵌合抗原受体，其核酸序列如sequence no.21、sequence no.22、sequence no.23、sequenceno.24、sequence no.25、sequence no.26、sequence no.27所示。
11、本专利技术还提供一种表达载体，所述表达载体包含如权利要求9所述的核酸分子。
12、进一步的，所述表达载体选自慢病毒表达载体、逆转录病毒表达载体、腺病毒表达载体、dna载体，rna载体、质粒中的任一种。
13、本专利技术还提供一种工程化细胞，所述细胞中转导有如上所述的核酸分子或如上所述的表达载体。
14、进一步的，所述细胞为t细胞、t细胞前体或nk细胞。
15、本专利技术还提供一种细胞制品，所述细胞制品包括如上所述的工程化细胞。
16、如上所述任意一项所述的嵌合抗原受体或如上所述的核酸分子或如上所述的表达载体或如上所述的工程化细胞或如上所述的细胞制品在制备抗肿瘤药物中的应用。
17、进一步的，所述抗肿瘤药物为抗急性淋巴样白血病药物、抗慢性淋巴细胞白血病药物、抗慢性髓性白血病药物、抗非霍奇金淋巴瘤药物、抗霍奇金淋巴瘤药物、抗前列腺癌药物、抗结直肠癌药物、抗乳腺癌药物、抗卵巢癌药物、抗宫颈癌药本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.CD22的scFv，其特征在于：所述CD22的scFv包含重链可变区和轻链可变区，所述轻链可变区包含L-CDR1、L-CDR2和L-CDR3，所述重链可变区包含H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3；所述L-CDR1、L-CDR2和L-CDR3分别为如下序列：QSVSSNL、GAS、QQYHSWPPLT；所述H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3分别为如下序列：GYTFTSYG、ISAYNGNT、ARDFQGIAVADLDY或其突变序列ARDFQGIAEADLDY。
2.如权利要求1所述的CD22的scFv，其特征在于：所述CD22的scFv包含如SequenceNO.1、Sequence NO.2或Sequence NO.3所示的氨基酸序列或其功能性变体。
3.一种嵌合抗原受体，其特征在于：所述嵌合抗原受体包含如权利要求1或2所述的CD22的scFv。
4.如权利要求3所述的嵌合抗原受体，其特征在于：所述嵌合抗原受体包含胞外结构域、铰链区、跨膜区和胞内信号域，所述铰链区为CD8a，所述CD8a的氨基酸序列如SequenceNO.4或S
5.如权利要求4所述的嵌合抗原受体，其特征在于：所述跨膜区为CD8a或CD28，所述CD8a的氨基酸序列如Sequence NO.6所示或其功能性变体，所述CD28的氨基酸序列如Sequence NO.7所示或其功能性变体。
6.如权利要求6所述的嵌合抗原受体，其特征在于：所述胞内信号域为CD28和或CD137和或HVEM和或CD3ζ，所述CD28的氨基酸序列如Sequence NO.8所示或其功能性变体，所述CD137的氨基酸序列如Sequence NO.9所示或其功能性变体，所述HVEM的氨基酸序列如Sequence NO.10所示或其功能性变体，所述CD3氨基酸序列如Sequence NO.11或SequenceNO.12所示或其功能性变体。
7.如权利要求6所述的嵌合抗原受体，其特征在于：所述嵌合抗原受体的氨基酸序列如Sequence NO.13、Sequence NO.14、Sequence NO.15、Sequence NO.16、Sequence NO.17、Sequence NO.18、Sequence NO.19所示或其功能性变体。
8.如权利要求3-7任意一项所述的嵌合抗原受体，其特征在于：所述嵌合抗原受体还包括信号肽，所述信号肽为CD8a，所述CD8a的氨基酸序列如Sequence NO.20所示或其功能性变体。
9.一种核酸分子，其特征在于：编码权利要求3-8任意一项所述的嵌合抗原受体，其核酸序列如Sequence NO.21、Sequence NO.22、Sequence NO.23、Sequence NO.24、SequenceNO.25、Sequence NO.26、Sequence NO.27所示。
10.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体包含如权利要求9所述的核酸分子。
11.如权利要求10所述的表达载体，其特征在于：所述表达载体选自慢病毒表达载体、逆转录病毒表达载体、腺病毒表达载体、DNA载体，RNA载体、质粒中的任一种。
12.一种工程化细胞，其特征在于:所述细胞中转导有权利要求9所述的核酸分子或权利要求10或11所述的表达载体，优选地，所述细胞为T细胞、T细胞前体或NK细胞。
13.一种细胞制品，其特征在于；所述细胞制品包括如权利要求12所述的工程化细胞。
14.权利要求3-8任意一项所述的嵌合抗原受体或权利要求9所述的核酸分子或权利要求10或11所述的表达载体或权利要求12所述的工程化细胞或权利要求13所述的细胞制品在制备抗肿瘤药物中的应用，优选的，所述抗肿瘤药物为抗急性淋巴样白血病药物、抗慢性淋巴细胞白血病药物、抗慢性髓性白血病药物、抗非霍奇金淋巴瘤药物、抗霍奇金淋巴瘤药物、抗前列腺癌药物、抗结直肠癌药物、抗乳腺癌药物、抗卵巢癌药物、抗宫颈癌药物、抗胰腺癌药物、抗肺癌药物、抗肾癌药物、抗肝癌药物、抗脑癌药物或抗皮肤癌药物。
...【技术特征摘要】
1.cd22的scfv，其特征在于：所述cd22的scfv包含重链可变区和轻链可变区，所述轻链可变区包含l-cdr1、l-cdr2和l-cdr3，所述重链可变区包含h-cdr1、h-cdr2和h-cdr3；所述l-cdr1、l-cdr2和l-cdr3分别为如下序列：qsvssnl、gas、qqyhswpplt；所述h-cdr1、h-cdr2和h-cdr3分别为如下序列：gytftsyg、isayngnt、ardfqgiavadldy或其突变序列ardfqgiaeadldy。
2.如权利要求1所述的cd22的scfv，其特征在于：所述cd22的scfv包含如sequenceno.1、sequence no.2或sequence no.3所示的氨基酸序列或其功能性变体。
3.一种嵌合抗原受体，其特征在于：所述嵌合抗原受体包含如权利要求1或2所述的cd22的scfv。
4.如权利要求3所述的嵌合抗原受体，其特征在于：所述嵌合抗原受体包含胞外结构域、铰链区、跨膜区和胞内信号域，所述铰链区为cd8a，所述cd8a的氨基酸序列如sequenceno.4或sequence no.5所示或其功能性变体。
5.如权利要求4所述的嵌合抗原受体，其特征在于：所述跨膜区为cd8a或cd28，所述cd8a的氨基酸序列如sequence no.6所示或其功能性变体，所述cd28的氨基酸序列如sequence no.7所示或其功能性变体。
6.如权利要求6所述的嵌合抗原受体，其特征在于：所述胞内信号域为cd28和或cd137和或hvem和或cd3ζ，所述cd28的氨基酸序列如sequence no.8所示或其功能性变体，所述cd137的氨基酸序列如sequence no.9所示或其功能性变体，所述hvem的氨基酸序列如sequence no.10所示或其功能性变体，所述cd3氨基酸序列如sequence no.11或sequenceno.12所示或其功能性变体。
7.如权利要求6所述的嵌合抗原受体，其特征在于：所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：赵文旭，黄霞，么瑞娜，赵永春，沈俊杰，陈军，洪娟，齐亚男，徐艳敏，
申请(专利权)人：重庆精准生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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