基于改进的Ficoll密度梯度离心提高免疫细胞存活率的方法技术

技术编号:40609839 阅读:19 留言:0更新日期:2024-03-12 22:17
本发明专利技术属于细胞生物学、分子生物学以及药物研发技术领域,具体涉及提高免疫细胞存活率的方法,所述的方法为用Ficoll密度梯度离心法进行分离。将改进后的Ficoll密度梯度离心法用于免疫细胞生产过程中,得以提高免疫细胞存活率;该方法为提高细胞的存活率提供了一种新思路。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于细胞生物学、分子生物学以及药物研发,具体涉及提高免疫细胞存活率的方法。


技术介绍

1、免疫细胞(包括t细胞、γδt细胞、nk细胞或dc细胞)或体外基因修饰后的car-t/car-nk细胞等在体外激活以及培养过程中,特别是经过多轮化疗治疗后的受试者,其淋巴细胞中终末分化的细胞或者处于耗竭或凋亡状态的细胞会死亡,导致体外激活或扩增过程中的细胞活率较低,从而使得细胞制剂产品的活率偏低或慢病毒转染细胞时无效细胞较多,导致慢病毒的用量较高。免疫细胞生产过程中,如何提高免疫细胞的存活率是细胞免疫疗法亟待解决的难题。

2、在免疫细胞生产过程中,经常使用ficoll密度梯度离心法,ficoll密度梯度离心法常用于分离和纯化外周血单个核细胞(pbmc),主要成分为1.077±0.001的聚蔗糖(ficoll)-泛影葡胺(urografin)(f/h)分层液。根据外周血中不同类型的细胞,比重和沉降系数的差异,在1.077±0.001的样本密度分离液上达到分离人外周血单个核细胞的目的。红细胞、粒细胞比重大,离心后沉于管底;淋巴细胞和单核细胞的比重小于或本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种提高细胞存活率的方法,其特征在于,所述的方法为用Ficoll密度梯度离心法进行分离。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述的方法具体包括:

3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,步骤1)中所述梯度离心后的细胞液中从下至上分别为死细胞层、密度梯度液层、目的细胞层、Buffer层。

4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,步骤1)中所述细胞悬液的密度为2×106-5×107个/ml。

5.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,步骤1)中所述梯度离心具体为:600g的条件下离心15-20min。

6.根据权利要...

【技术特征摘要】

1.一种提高细胞存活率的方法,其特征在于,所述的方法为用ficoll密度梯度离心法进行分离。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述的方法具体包括:

3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,步骤1)中所述梯度离心后的细胞液中从下至上分别为死细胞层、密度梯度液层、目的细胞层、buffer层。

4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,步骤1)中所述细胞悬液的密度为2×106-5×107个/ml。

5.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,步骤1)中所述梯度离心具体为:600g的条件下离心15-20...

【专利技术属性】
技术研发人员:李运燕杨智廖丽王琳玲王青张茜真王美玲
申请(专利权)人:重庆精准生物技术有限公司
类型:发明
国别省市:

网友询问留言 已有0条评论
  • 还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。

1