【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
技术介绍
1、单个细胞中的转录概况与来自相同细胞的蛋白质组概况并不是始终一一对应的。这表明，在转录后水平上存在各种机制来调控蛋白质的产生和降解，包括一些尚未表征的机制。因此，mrna水平是估计蛋白质产生的不完美指标，并且在定义细胞状态方面可能存在偏差。用于直接定量单细胞蛋白质组的额外方法可以提供功能上更相关的基础，以解释细胞类型和细胞类型对环境的特异性应答。细胞中的蛋白质产生的准确确定可用于研究一系列生理状态，甚至可用于治疗各种疾病，而且可用于药物开发。因此，需要额外和更好的用于准确定量单个细胞中的蛋白质产生的系统。
技术实现思路
1、本文描述了用于原位核糖体分析(即，被主动翻译的感兴趣的rna的分析)的方法、组合物、试剂盒和系统。此类系统代表了一项关键技术，其通过定量/分析主动翻译的mrna来缩小细胞的转录组和蛋白质组之间的差距。本文描述了一种基于邻位连接的策略，以原位实现rna翻译状态的特异性和高通量表征，以作为单细胞蛋白质组的估计。本系统利用识别缀合到寡核苷酸探针的核糖体的试剂，所述寡核苷酸探针识别与被核糖体结合的mrna分子退火的相应探针的序列(图1)。简而言之，本系统利用包含独特的分子条形码的探针或探针组来鉴定感兴趣的mrna内的靶序列。随后，核糖体被与所述核糖体的一部分互补的引物的寡核苷酸序列部分结合，或被核糖体特异性一级抗体结合，所述一级抗体被缀合到dna引物的二级抗体结合。将缀合到与核糖体的一部分互补的寡核苷酸序列或缀合到二级抗体(并且因此结合到核糖体)的dna引
2、因此，在一个方面，本公开提供了用于分析细胞中被翻译的rna的方法(参见例如图1、3和6)。在本文公开的方法中，可以使细胞与一个或多个探针对或探针组接触，探针对或探针组在本文中进一步描述并且可以用于扩增(例如，通过滚环扩增)由核糖体主动翻译的rna以产生一个或多个串联扩增子。然后，可以将一个或多个串联扩增子嵌入在聚合物基质中并测序以确定转录物的身份及其在聚合物基质内的位置(例如，通过如本文所进一步描述的sedal测序(通过动态退火和连接进行的误差减小的测序))。使用感兴趣的转录物的位置，可以对细胞中被翻译的rna进行分析并获得时空信息，以提升本领域对翻译位置和时机如何影响健康和疾病中的细胞功能的理解。所述方法可用于比较例如来自病变和健康组织样品的一个细胞(或多个细胞)中的rna翻译；或可用于比较例如用试剂处理的细胞和未处理的细胞中的rna翻译。
3、重要地，本文描述的方法可以包括两个探针或三个探针，以用于在翻译期间分析mrna分子。每种方法都可用于在翻译期间分析mrna分子，但三探针方法已经被证明能产生更好的信号噪声比。
4、在一些实施方案中，本公开提供了一种用于分析细胞中被翻译的rna的二探针方法，所述方法包括以下步骤：
5、a)使所述细胞与一个或多个探针对接触，其中每个探针对包含第一探针和第二探针，其中
6、i)所述第一探针包含与所述第二探针互补的寡核苷酸部分、与感兴趣的rna互补的寡核苷酸部分和寡核苷酸条形码序列；并且
7、ii)所述第二探针包含识别核糖体的部分和与所述第一探针的一部分互补的寡核苷酸部分；
8、b)将所述第一探针的5’端和3’端连接在一起以产生环状寡核苷酸；
9、c)使用所述第二探针作为引物进行滚环扩增以扩增所述环状寡核苷酸，以产生一个或多个串联扩增子；
10、d)将所述一个或多个串联扩增子嵌入在聚合物基质中；以及
11、e)对嵌入在所述聚合物基质中的所述串联扩增子进行测序，以确定所述细胞中每个感兴趣的rna的身份和位置。
12、在一些实施方案中，本公开提供了一种用于分析细胞中被翻译的rna的三探针方法，所述方法包括以下步骤：
13、a)使所述细胞与一个或多个探针组接触，其中每个探针组包含第一探针、第二探针和第三探针，其中
14、i)所述第一探针包含与所述第二探针互补的寡核苷酸部分、第一寡核苷酸条形码序列、与所述第三探针的一部分互补的寡核苷酸部分、与感兴趣的rna互补的寡核苷酸部分和第二寡核苷酸条形码序列；
15、ii)所述第二探针包含识别核糖体的部分和与所述第一探针的一部分互补的寡核苷酸部分；并且
16、iii)所述第三探针包含与所述感兴趣的rna互补的寡核苷酸部分、与所述第一探针的一部分互补的寡核苷酸部分和寡核苷酸条形码序列，其中所述第三探针的寡核苷酸条形码序列与所述第一探针的第一寡核苷酸条形码序列互补；
17、b)将所述第一探针的5’端和3’端连接在一起以产生环状寡核苷酸；
18、c)使用所述第三探针作为引物进行滚环扩增以扩增所述环状寡核苷酸，以产生一个或多个串联扩增子；
19、d)将所述一个或多个串联扩增子嵌入在聚合物基质中；以及
20、e)对嵌入在所述聚合物基质中的所述串联扩增子进行测序，以确定所述细胞中每个感兴趣的rna的身份和位置。
21、本文描述的方法、组合物和系统可用于研究组织(例如，正在发育的组织、正常组织、病变组织)中的rna翻译，可用于诊断和治疗各种疾病，可用于研究目的，以及可用于药物发现。因此，在一个方面，本公开提供了用于在受试者中诊断疾病或病症(例如，癌症)的方法。例如，本文描述的用于分析被翻译的rna的方法可以在取自受试者(例如，被认为患有疾病或病症的受试者或处于患有疾病或病症的风险中的受试者，或健康的受试者或被认为健康的受试者)的一个细胞上或多个细胞上进行。然后，可以将细胞中各种感兴趣的rna的表达与非病变细胞或来自非病变组织样品的细胞(例如，来自健康个体的一个细胞或来自健康个体群体的多个细胞)中相同的感兴趣的rna的表达进行比较。细胞的rna翻译概况(包括单个感兴趣的rna或多个感兴趣的rna，例如特异性疾病特征)相对于一个或多个非病变细胞的任何差异都可以指示受试者患有疾病或病症。作为对照实验，可以将一个或多个非病变细胞(例如，正常细胞)中的rna翻译与病变细胞中的表达一起进行分析。先前也可能已经对一个或多个非病变细胞(例如，正常细胞)中的rna翻译进行了分析，并且可以将病变细胞中的表达与非病变细胞的该参考数据进行比较。
22、在另一方面，本公开提供了用于筛选能够调节一种或多种感兴趣的rna的翻译的试剂的方法。例如，可以在存在一种或多种候选试剂的情况下，在细胞中进行本文描述的用于分析被翻译的rna的方法。然后，可以将细胞(例如，正常细胞或病变细胞)中被翻译的各种感本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.用于分析细胞中被翻译的RNA的方法，所述方法包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述第二探针的识别核糖体的部分包含结合抗体或抗体变体或片段的试剂。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述第二探针的识别核糖体的部分包含抗体或抗体变体或片段。
4.根据权利要求3所述的方法，其中所述抗体是二级抗体。
5.根据权利要求4所述的方法，所述方法进一步包括使所述细胞与一级抗体接触，所述一级抗体识别核糖体并且能够被所述第二探针的二级抗体结合。
6.根据权利要求5所述的方法，其中所述一级抗体是抗40S核糖体蛋白S3(RPS3)抗体或抗60S核糖体蛋白L4(RPL4)抗体。
7.根据权利要求1所述的方法，其中所述第二探针的识别核糖体的部分包含与所述核糖体内的rRNA的一部分互补的寡核苷酸。
8.根据权利要求7所述的方法，其中所述第二探针的识别核糖体的部分包含与18SrRNA的一部分互补的寡核苷酸。
9.根据权利要求7或8所述的方法，其中所述与rRNA的一部分互补的寡核苷酸的长度为5、6、7、
10.根据权利要求7至9中任一项所述的方法，其中所述与rRNA的一部分互补的寡核苷酸的长度为约25个核苷酸。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其中所述第二探针进一步包含聚合阻断剂。
12.根据权利要求11所述的方法，其中所述聚合阻断剂位于第二探针的3’端。
13.根据权利要求11或12所述的方法，其中所述聚合阻断剂包含反向核酸残基。
14.根据权利要求13所述的方法，其中所述反向核酸残基是反向胸腺嘧啶残基。
15.根据权利要求1至14中任一项所述的方法，其中所述寡核苷酸条形码序列的长度为5-15、6-14、7-13、8-12或9-11个核苷酸。
16.根据权利要求1至15中任一项所述的方法，其中所述寡核苷酸条形码序列的长度为5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个核苷酸。
17.根据权利要求1至16中任一项所述的方法，其中所述第一寡核苷酸探针和所述第三寡核苷酸探针与所述感兴趣的RNA的不同部分互补。
18.根据权利要求1至17中任一项所述的方法，其中所述第一探针包含以下结构：
19.根据权利要求1至18中任一项所述的方法，其中所述第一探针的与所述第二探针的一部分互补的部分的长度为4-20、5-19、6-18、7-17、8-16、9-15、10-14或11-13个核苷酸。
20.根据权利要求1至19中任一项所述的方法，其中所述第一探针的与所述第二探针的一部分互补的部分的长度为4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个核苷酸。
21.根据权利要求1至20中任一项所述的方法，其中所述第一探针的与所述第二探针的一部分互补的部分在所述第一探针的5’端和3’端之间分开。
22.根据权利要求1至21中任一项所述的方法，其中所述第一探针的与所述第三探针的一部分互补的部分的长度为5-15、6-14、7-13、8-12或9-11个核苷酸。
23.根据权利要求1至22中任一项所述的方法，其中所述第一探针的与所述第三探针的一部分互补的部分的长度为5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个核苷酸。
24.根据权利要求1至23中任一项所述的方法，其中所述第一探针的与所述感兴趣的RNA互补的部分的长度为10-30、11-29、12-28、13-27、14-26、15-25、16-24、17-23、18-22或19-21个核苷酸。
25.根据权利要求1至24中任一项所述的方法，其中所述第一探针的与所述感兴趣的RNA互补的部分的长度为10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个核苷酸。
26.根据权利要求1至25中任一项所述的方法，其中所述第二探针包含以下结构：
27.根据权利要求1至26中任一项所述的方法，其中所述第二探针的与所述第一探针的一部分互补的部分的长度为4-20、5-19、6-18、7-17、8-16、9-15、10-14或11-13个核苷酸。
28.根据权利要求1至27中任一项所述的方法，其中所述第二探针的与所述第一探...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.用于分析细胞中被翻译的rna的方法，所述方法包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述第二探针的识别核糖体的部分包含结合抗体或抗体变体或片段的试剂。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述第二探针的识别核糖体的部分包含抗体或抗体变体或片段。
4.根据权利要求3所述的方法，其中所述抗体是二级抗体。
5.根据权利要求4所述的方法，所述方法进一步包括使所述细胞与一级抗体接触，所述一级抗体识别核糖体并且能够被所述第二探针的二级抗体结合。
6.根据权利要求5所述的方法，其中所述一级抗体是抗40s核糖体蛋白s3(rps3)抗体或抗60s核糖体蛋白l4(rpl4)抗体。
7.根据权利要求1所述的方法，其中所述第二探针的识别核糖体的部分包含与所述核糖体内的rrna的一部分互补的寡核苷酸。
8.根据权利要求7所述的方法，其中所述第二探针的识别核糖体的部分包含与18srrna的一部分互补的寡核苷酸。
9.根据权利要求7或8所述的方法，其中所述与rrna的一部分互补的寡核苷酸的长度为5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30个或超过30个核苷酸。
10.根据权利要求7至9中任一项所述的方法，其中所述与rrna的一部分互补的寡核苷酸的长度为约25个核苷酸。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其中所述第二探针进一步包含聚合阻断剂。
12.根据权利要求11所述的方法，其中所述聚合阻断剂位于第二探针的3’端。
13.根据权利要求11或12所述的方法，其中所述聚合阻断剂包含反向核酸残基。
14.根据权利要求13所述的方法，其中所述反向核酸残基是反向胸腺嘧啶残基。
15.根据权利要求1至14中任一项所述的方法，其中所述寡核苷酸条形码序列的长度为5-15、6-14、7-13、8-12或9-11个核苷酸。
16.根据权利要求1至15中任一项所述的方法，其中所述寡核苷酸条形码序列的长度为5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个核苷酸。
17.根据权利要求1至16中任一项所述的方法，其中所述第一寡核苷酸探针和所述第三寡核苷酸探针与所述感兴趣的rna的不同部分互补。
18.根据权利要求1至17中任一项所述的方法，其中所述第一探针包含以下结构：
19.根据权利要求1至18中任一项所述的方法，其中所述第一探针的与所述第二探针的一部分互补的部分的长度为4-20、5-19、6-18、7-17、8-16、9-15、10-14或11-13个核苷酸。
20.根据权利要求1至19中任一项所述的方法，其中所述第一探针的与所述第二探针的一部分互补的部分的长度为4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个核苷酸。
21.根据权利要求1至20中任一项所述的方法，其中所述第一探针的与所述第二探针的一部分互补的部分在所述第一探针的5’端和3’端之间分开。
22.根据权利要求1至21中任一项所述的方法，其中所述第一探针的与所述第三探针的一部分互补的部分的长度为5-15、6-14、7-13、8-12或9-11个核苷酸。
23.根据权利要求1至22中任一项所述的方法，其中所述第一探针的与所述第三探针的一部分互补的部分的长度为5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个核苷酸。
24.根据权利要求1至23中任一项所述的方法，其中所述第一探针的与所述感兴趣的rna互补的部分的长度为10-30、11-29、12-28、13-27、14-26、15-25、16-24、17-23、18-22或19-21个核苷酸。
25.根据权利要求1至24中任一项所述的方法，其中所述第一探针的与所述感兴趣的rna互补的部分的长度为10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个核苷酸。
26.根据权利要求1至25中任一项所述的方法，其中所述第二探针包含以下结构：
27.根据权利要求1至26中任一项所述的方法，其中所述第二探针的与所述第一探针的一部分互补的部分的长度为4-20、5-19、6-18、7-17、8-16、9-15、10-14或11-13个核苷酸。
28.根据权利要求1至27中任一项所述的方法，其中所述第二探针的与所述第一探针的一部分互补的部分的长度为4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个核苷酸。
29.根据权利要求1至28中任一项所述的方法，其中所述第二探针的识别核糖体的部分和所述第二探针的与所述第一探针的一部分互补的部分通过聚-a核苷酸接头接合。
30.根据权利要求29所述的方法，其中所述聚-a核苷酸接头的长度为20-80、30-70或40-60个核苷酸。
31.根据权利要求29或30所述的方法，其中所述聚-a核苷酸接头的长度为约50个核苷酸。
32.根据权利要求1至31中任一项所述的方法，其中所述第三探针包含以下结构：
33.根据权利要求1至32中任一项所述的方法，其中所述第三探针的与所述感兴趣的rna互补的部分的长度为10-30、11-29、12-28、13-27、14-26、15-25、16-24、17-23、18-22或19-21个核苷酸。
34.根据权利要求1至33中任一项所述的方法，其中所述第三探针的与所述感兴趣的rna互补的部分的长度为10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个核苷酸。
35.根据权利要求1至34中任一项所述的方法，其中所述第三探针的与所述第一探针的一部分互补的部分的长度为5-15、6-14、7-13、8-12或9-11个核苷酸。
36.根据权利要求1至35中任一项所述的方法，其中所述第三探针的与所述第一探针的一部分互补的部分的长度为5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个核苷酸。
37.根据权利要求1至36中任一项所述的方法，其中同时在多个细胞中对被翻译的rna进行分析。
38.根据权利要求37所述的方法，其中同时在超过100个细胞、超过200个细胞、超过300个细胞、超过400个细胞、超过500个细胞、超过1000个细胞、超过10,000个细胞、超过20,000个细胞、超过30,000个细胞、超过40,000个细胞或超过50,000个细胞中对被翻译的rna进行分析。
39.根据权利要求37或38所述的方法，其中所述细胞包含多种细胞类型。
40.根据权利要求39所述的方法，其中所述细胞类型选自由干细胞、祖细胞、神经元细胞、星形胶质细胞、树突状细胞、内皮细胞、小神经胶质细胞、少突胶质细胞、肌肉细胞、心肌细胞、间充质细胞、上皮细胞、免疫细胞、肝细胞、平滑肌细胞和骨骼肌细胞、造血细胞、淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞、巨噬细胞、自然杀伤细胞、肥大细胞、脂肪细胞和神经元组成的组。
41.根据权利要求1至40中任一项所述的方法，其中所述细胞存在于完整的组织内。
42.根据权利要求41所述的方法，其中所述完整的组织是固定的组织样品。
43.根据权利要求41或42所述的方法，其中所述组织是脑组织。
44.根据权利要求1至43中任一项所述的方法，其中同时对超过1个、超过2个、超过3个、超过4个、超过5个、超过10个、超过20个、超过30个、超过40个、超过50个、超过100个、超过200个、超过500个、超过1000个、超过2000个、超过3000个rna、超过4000个rna或超过5000个rna的翻译进行分析。
45.根据权利要求1至44中任一项所述的方法，其中所述第一探针的所述第二寡核苷酸条形码序列是用于鉴定感兴趣的rna的基因特异性序列。
46.根据权利要求1至45中任一项所述的方法，其中所述测序的步骤包括通过动态退火和连接(sedal)进行的误差减小的测序。
47.根据权利要求46所述的方法，其中进行两次、三次、四次、五次或超过五次sedal。
48.根据权利要求1至47中任一项所述的方法，其中所述聚合物基质是水凝胶。
49.根据权利要求48所述的方法，其中所述水凝胶是聚乙烯醇水凝胶、聚乙二醇水凝胶、聚丙烯酸钠水凝胶、丙烯酸酯水凝胶或聚丙烯酰胺水凝胶。
50.根据权利要求1至49中任一项所述的方法，其中所述进行滚环扩增的步骤进一步包括提供胺修饰的核苷酸，其中将所述胺修饰的核苷酸并入到所述一个或多个串联扩增子中。
51.根据权利要求50所述的方法，其中所述将所述一个或多个串联扩增子嵌入在聚合物基质中的步骤包含使所述一个或多个扩增子的胺修饰的核苷酸与丙烯酸n-羟基琥珀酰亚胺酯反应，以及将所述一个或多个串联扩增子和所述聚合物基质共聚合。
52.根据权利要求1至51中任一项所述的方法，所述方法进一步包括分析所述细胞内的额外的分子。
53.根据权利要求52所述的方法，其中所述额外的分子是非翻译rna、其他亚细胞位置中的rna、蛋白质、脂质或小分子。
54.根据权利要求1至53中任一项所述的方法，所述方法进一步包括通过将一个或多个细胞的rna翻译概况与包含各种细胞类型的细胞的rna翻译概况的参考数据进行比较来确定被分析的细胞的细胞类型或多个被分析的细胞的细胞类型。
55.根据权利要求1至54中任一项所述的方法，所述方法进一步包括通过将一个或多个细胞的rna翻译概况与包含各种细胞状态的细胞的rna翻译概况的参考数据进行比较来确定被分析的细胞的细胞状态或多个被分析的细胞的细胞状态。
56.根据权利要求1至55中任一项所述的方法，所述方法进一步包括在所述细胞中过表达或敲除一个或多个基因以确定所述一个或多个基因是否参与调控所述感兴趣的rna的翻译。
57.根据权利要求1至56中任一项所述的方法，其中所述方法不扰乱亚细胞结构、细胞形态和/或组织结构的空间信息。
58.用于分析细胞中被翻译的rna的方法，所述方法包括：
59.根据权利要求58所述的方法，其中所述第二探针的识别核糖体的部分包含结合抗体或抗体变体或片段的试剂。
60.根据权利要求58或59所述的方法，其中所述第二探针的识别核糖体的部分包含抗体或抗体变体或片段。
61.根据权利要求60所述的方法，其中所述抗体是二级抗体。
62.根据权利要求61所述的方法，所述方法进一步包括使所述细胞与一级抗体接触，所述一级抗体识别核糖体并且被所述第二探针的二级抗体识别。
63.根据权利要求62所述的方法，其中所述一级抗体是抗40s核糖体蛋白s3(rps3)抗体或抗60s核糖体蛋白l4(rpl4)抗体。
64.根据权利要求58所述的方法，其中所述第二探针的识别核糖体的部分包含与所述核糖体内的核糖体rna(rrna)的一部分互补的寡核苷酸。
65.根据权利要求64所述的方法，其中所述第二探针的识别核糖体的部分包含与18srrna的一部分互补的寡核苷酸。
66.根据权利要求64或65所述的方法，其中所述与rrna的一部分互补的寡核苷酸的长度为5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30个或超过30个核苷酸。
67.根据权利要求64至66中任一项所述的方法，其中所述与rrna的一部分互补的寡核苷酸的长度为约25个核苷酸。
68.根据权利要求58至67中任一项所述的方法，其中所述第一探针的寡核苷酸条形码序列的长度为5-15、6-14、7-13、8-12或9-11个核苷酸。
69.根据权利要求58至68中任一项所述的方法，其中所述第一探针的寡核苷酸条形码序列的长度为5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个核苷酸。
70.根据权利要求58至69中任一项所述的方法，其中所述第一探针包含以下结构：
71.根据权利要求58至70中任一项所述的方法，其中所述第二探针包含以下结构：
72.根据权利要求58至71中任一项所述的方法，其中所述第一探针的寡核苷酸条形码序列是用于鉴定感兴趣的rna的基因特异性序列。
73.用于在受试者中诊断疾病或病症的方法，所述方法包括：
74.用于在受试者中诊断疾病或病症的方法，所述方法包括：
75.根据权利要求73或74所述的方法，其中作为对照实验，将一个或多个非病变细胞中被翻译的rna与取自所述受试者的细胞一起进行分析。
76.根据权利要求73或74所述的方法，其中一个或多个非病变细胞中被翻译的rna的概况包含参考数据。
77.根据权利要求73至76中任一项所述的方法，其中所述疾病或病症是遗传性疾病、增殖性疾病、炎性疾病、自身免疫性疾病、肝疾病、脾疾病、肺疾病、血液疾病、神经系统疾病、精神疾病、胃肠道(gi)疾病、泌尿生殖系统疾病、感染性疾病、肌肉骨骼疾病、内分泌疾病、代谢性病症、免疫病症、中枢神经系统(cns)病症或心血管疾病。
78.根据权利要求73至77中任一项所述的方法，其中所述细胞存在于组织中。
79.根据权利要求78所述的方法，其中所述组织是上皮组织、结缔组织、肌肉组织或神经组织。
80.根据权利要求78或79所述的方法，其中所述组织是脑组织。
81.根据权利要求78至80中任一项所述的方法，其中所述组织是取自受试者的组织样品。
82.根据权利要求81所述的方法，其中所述受试者是非人实验动物。
83.根据权利要求82所述的方法，其中所述非人实验动物是小鼠、大鼠、狗、猪或非人灵长类动物。
84.根据权利要求81所述的方法，其中所述受试者是人。
85.用于筛选能够调节一种或多种rna的翻译的试剂的方法，所述方法包括：
86.用于筛选能够调节一种或多种rna的翻译的试剂的方法，所述方法包括：
87.根据权利要求85或86所述的方法，其中所述候选试剂是小分子、蛋白质、肽、核酸、脂质或碳水化合物。
88.根据权利要求85至87中任一项所述的方法，其中所述候选试剂是已知的药物或fda批准的药物。
89.根据权利要求87或88所述的方法，其中所述蛋白质是抗体或抗体变体或片段。
90.根据权利要求87或88所述的方法，其中所述核酸是mrna、反义rna、mirna、sirna、rna适体、双链rna(dsrna)、短发夹rna(shrna)或反义寡核苷酸(aso)。
91.根据权利要求85至90中任一项所述的方法，其中调节rna翻译与减少、缓解或消除疾病或病症的症状相关。
92.根据权利要求91所述的方法，其中所述疾病或病症是遗传性疾病、增殖性疾病、炎性疾病、自身免疫性疾病、肝疾病、脾疾病、肺疾病、血液疾病、神经系统疾病、精神疾病、胃肠道(gi)疾病、泌尿生殖系统疾病、感染性疾病、肌肉骨骼疾病、内分泌疾病、代谢性病症、免疫病症、中枢神经系统(cns)病症或心血管疾病。
93.用于在受试者中治疗疾病或病症的方法，所述方法包括：
94.用于在受试者中治疗疾病或病症的方法，所述方法包括：
95.根据权利要求93或94所述的方法，其中作为对照实验，同时对一个或多个非病变细胞中一种或多种rna的翻译进行分析。
96.根据权利要求93或94所述的方法，其中一个或多个非病变细胞中一种或多种rna的翻译的概况包含参考数据。
97.根据权利要求93至96中任一项所述的方法，其中所述治疗包括施用治疗剂、手术或放射疗法。
98.根据权利要求93至97中任一项所述的方法，其中所述治疗剂是小分子、蛋白质、肽、核酸、脂质或碳水化合物。
99.根据权利要求93至98中任一项所述的方法，其中所述治疗剂是已知的药物或fda批准的药物。
100.根据权利要求98或99所述的方法，其中所述蛋白质是抗体或抗体变体或片段。
101.根据权利要求98或99所述的方法，其中所述核酸是mrna、反义rna、mirna、sirna、rna适体、双链rna(dsrna)、短发夹rna(shrna)或反义寡核苷酸(aso)。
102.根据权利要求93至101中任一项所述的方法，其中所述疾病或病症是遗传性疾病、增殖性疾病、炎性疾病、自身免疫性疾病、肝疾病、脾疾病、肺疾病、血液疾病、神经系统疾病、精神疾病、胃肠道(gi)疾病、泌尿生殖系统疾病、感染性疾病、肌肉骨骼疾病、内分泌疾病、代谢性病症、免疫病症、中枢神经系统(cns)病症或心血管疾病。
103.探针对，其包含第一探针和第二探针，其中：
104.根据权利要求103所述的探针对，其中所述第二探针的识别核糖体的部分包含结合抗体或抗体变体或片段的试剂。
105.根据权利要求103或104所述的探针对，其中所述第二探针的识别核糖体的部分包含抗体或抗体变体或片段。
106.根据权利要求105所述的探针对，其中所述抗体是二级抗体。
107.根据权利要求106所述的探针对，其中所述二级抗体与一级抗体结合，所述一级抗体识别并结合所述核糖体。
108.根据权利要求107所述的探针对，其中所述一级抗体是抗40s核糖体蛋白s3(rps3)抗体或抗60s核糖体蛋白l4(rpl4)抗体。
109.根据权利要求103所述的探针对，其中所述第二探针的识别核糖体的部分包含与所述核糖体内的rrna的一部分互补的寡核苷酸。
110.根据权...
【专利技术属性】
技术研发人员：王潇，H·曾，J·任，
申请(专利权)人：布罗德研究所股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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