【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
技术介绍
技术实现思路
【技术保护点】
1.用于通过引导编辑来编辑核酸分子的方法，所述方法包括：使核酸分子与引导编辑器、pegRNA和DNA错配修复途径的抑制剂接触，从而在靶位点处安装对所述核酸分子的一个或多个修饰。
2.用于编辑双链靶DNA序列的方法，所述方法包括：使所述双链靶DNA与(i)引导编辑器、(ii)引导编辑向导RNA(pegRNA)和(iii)DNA错配修复途径的抑制剂接触，
3.权利要求2的方法，其中所述PBS包含与所述靶DNA序列的非靶链中切口位点上游的区域互补的区域，其中所述切口位点是所述napDNAbp的特征。
4.权利要求1的方法，其中所述方法进一步包括使所述核酸分子与第二链切口产生gRNA接触。
5.权利要求1的方法，其中相较于在不存在所述DNA错配修复途径的抑制剂的情况下使用所述引导编辑器和所述pegRNA的引导编辑效率，在存在所述DNA错配修复途径的抑制剂的情况下，所述引导编辑效率增加至少1.5倍、至少2.0倍、至少2.5倍、至少3.0倍、至少3.5倍、至少4.0倍、至少4.5倍、至少5.0倍、至少5.5倍、至少6.0倍、至少6.5倍、至少7
6.权利要求1的方法，其中相较于在不存在所述DNA错配修复途径的抑制剂的情况下使用所述引导编辑器和所述pegRNA的插入缺失形成频率，在存在所述DNA错配修复途径的抑制剂的情况下，所述插入缺失形成频率减少至少1.5倍、至少2.0倍、至少2.5倍、至少3.0倍、至少3.5倍、至少4.0倍、至少4.5倍、至少5.0倍、至少5.5倍、至少6.0倍、至少6.5倍、至少7.0倍、至少7.5倍、至少8.0倍、至少8.5倍、至少9.0倍、至少9.5倍、至少10.0倍、至少11倍、至少12倍、至少13倍、至少14倍、至少15倍、至少16倍、至少17倍、至少18倍、至少19倍、至少20倍、至少21倍、至少22倍、至少23倍、至少24倍、至少25倍、至少26倍、至少27倍、至少28倍、至少29倍、至少30倍、至少31倍、至少32倍、至少33倍、至少34倍、至少35倍、至少36倍、至少37倍、至少38倍、至少39倍、至少40倍、至少41倍、至少42倍、至少43倍、至少44倍、至少45倍、至少46倍、至少47倍、至少48倍、至少49倍、至少50倍、至少51倍、至少52倍、至少53倍、至少54倍、至少55倍、至少56倍、至少57倍、至少58倍、至少59倍、至少60倍、至少61倍、至少62倍、至少63倍、至少64倍、至少65倍、至少66倍、至少67倍、至少68倍、至少69倍、至少70倍、至少71倍、至少72倍、至少73倍、至少74倍或至少75倍。
7.权利要求1的方法，其中相较于在不存在所述DNA错配修复途径的抑制剂的情况下使用所述引导编辑器和所述pegRNA的编辑结果纯度，在存在所述DNA错配修复途径的抑制剂的情况下，所述编辑结果纯度增加至少1.5倍、至少2.0倍、至少2.5倍、至少3.0倍、至少3.5倍、至少4.0倍、至少4.5倍、至少5.0倍、至少5.5倍、至少6.0倍、至少6.5倍、至少7.0倍、至少7.5倍、至少8.0倍、至少8.5倍、至少9.0倍、至少9.5倍、至少10.0倍、至少11倍、至少12倍、至少13倍、至少14倍、至少15倍、至少16倍、至少17倍、至少18倍、至少19倍、至少20倍、至少21倍、至少22倍、至少23倍、至少24倍、至少25倍、至少26倍、至少27倍、至少28倍、至少29倍、至少30倍、至少31倍、至少32倍、至少33倍、至少34倍、至少35倍、至少36倍、至少37倍、至少38倍、至少39倍、至少40倍、至少41倍、至少42倍、至少43倍、至少44倍、至...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.用于通过引导编辑来编辑核酸分子的方法，所述方法包括：使核酸分子与引导编辑器、pegrna和dna错配修复途径的抑制剂接触，从而在靶位点处安装对所述核酸分子的一个或多个修饰。
2.用于编辑双链靶dna序列的方法，所述方法包括：使所述双链靶dna与(i)引导编辑器、(ii)引导编辑向导rna(pegrna)和(iii)dna错配修复途径的抑制剂接触，
3.权利要求2的方法，其中所述pbs包含与所述靶dna序列的非靶链中切口位点上游的区域互补的区域，其中所述切口位点是所述napdnabp的特征。
4.权利要求1的方法，其中所述方法进一步包括使所述核酸分子与第二链切口产生grna接触。
5.权利要求1的方法，其中相较于在不存在所述dna错配修复途径的抑制剂的情况下使用所述引导编辑器和所述pegrna的引导编辑效率，在存在所述dna错配修复途径的抑制剂的情况下，所述引导编辑效率增加至少1.5倍、至少2.0倍、至少2.5倍、至少3.0倍、至少3.5倍、至少4.0倍、至少4.5倍、至少5.0倍、至少5.5倍、至少6.0倍、至少6.5倍、至少7.0倍、至少7.5倍、至少8.0倍、至少8.5倍、至少9.0倍、至少9.5倍、至少10.0倍、至少11倍、至少12倍、至少13倍、至少14倍、至少15倍、至少16倍、至少17倍、至少18倍、至少19倍、至少20倍、至少21倍、至少22倍、至少23倍、至少24倍、至少25倍、至少26倍、至少27倍、至少28倍、至少29倍、至少30倍、至少31倍、至少32倍、至少33倍、至少34倍、至少35倍、至少36倍、至少37倍、至少38倍、至少39倍、至少40倍、至少41倍、至少42倍、至少43倍、至少44倍、至少45倍、至少46倍、至少47倍、至少48倍、至少49倍、至少50倍、至少51倍、至少52倍、至少53倍、至少54倍、至少55倍、至少56倍、至少57倍、至少58倍、至少59倍、至少60倍、至少61倍、至少62倍、至少63倍、至少64倍、至少65倍、至少66倍、至少67倍、至少68倍、至少69倍、至少70倍、至少71倍、至少72倍、至少73倍、至少74倍或至少75倍。
6.权利要求1的方法，其中相较于在不存在所述dna错配修复途径的抑制剂的情况下使用所述引导编辑器和所述pegrna的插入缺失形成频率，在存在所述dna错配修复途径的抑制剂的情况下，所述插入缺失形成频率减少至少1.5倍、至少2.0倍、至少2.5倍、至少3.0倍、至少3.5倍、至少4.0倍、至少4.5倍、至少5.0倍、至少5.5倍、至少6.0倍、至少6.5倍、至少7.0倍、至少7.5倍、至少8.0倍、至少8.5倍、至少9.0倍、至少9.5倍、至少10.0倍、至少11倍、至少12倍、至少13倍、至少14倍、至少15倍、至少16倍、至少17倍、至少18倍、至少19倍、至少20倍、至少21倍、至少22倍、至少23倍、至少24倍、至少25倍、至少26倍、至少27倍、至少28倍、至少29倍、至少30倍、至少31倍、至少32倍、至少33倍、至少34倍、至少35倍、至少36倍、至少37倍、至少38倍、至少39倍、至少40倍、至少41倍、至少42倍、至少43倍、至少44倍、至少45倍、至少46倍、至少47倍、至少48倍、至少49倍、至少50倍、至少51倍、至少52倍、至少53倍、至少54倍、至少55倍、至少56倍、至少57倍、至少58倍、至少59倍、至少60倍、至少61倍、至少62倍、至少63倍、至少64倍、至少65倍、至少66倍、至少67倍、至少68倍、至少69倍、至少70倍、至少71倍、至少72倍、至少73倍、至少74倍或至少75倍。
7.权利要求1的方法，其中相较于在不存在所述dna错配修复途径的抑制剂的情况下使用所述引导编辑器和所述pegrna的编辑结果纯度，在存在所述dna错配修复途径的抑制剂的情况下，所述编辑结果纯度增加至少1.5倍、至少2.0倍、至少2.5倍、至少3.0倍、至少3.5倍、至少4.0倍、至少4.5倍、至少5.0倍、至少5.5倍、至少6.0倍、至少6.5倍、至少7.0倍、至少7.5倍、至少8.0倍、至少8.5倍、至少9.0倍、至少9.5倍、至少10.0倍、至少11倍、至少12倍、至少13倍、至少14倍、至少15倍、至少16倍、至少17倍、至少18倍、至少19倍、至少20倍、至少21倍、至少22倍、至少23倍、至少24倍、至少25倍、至少26倍、至少27倍、至少28倍、至少29倍、至少30倍、至少31倍、至少32倍、至少33倍、至少34倍、至少35倍、至少36倍、至少37倍、至少38倍、至少39倍、至少40倍、至少41倍、至少42倍、至少43倍、至少44倍、至少45倍、至少46倍、至少47倍、至少48倍、至少49倍、至少50倍、至少51倍、至少52倍、至少53倍、至少54倍、至少55倍、至少56倍、至少57倍、至少58倍、至少59倍、至少60倍、至少61倍、至少62倍、至少63倍、至少64倍、至少65倍、至少66倍、至少67倍、至少68倍、至少69倍、至少70倍、至少71倍、至少72倍、至少73倍、至少74倍或至少75倍，其中所述编辑结果纯度通过预期编辑/非预期插入缺失的比率来测量。
8.权利要求1的方法，其中所述dna错配修复途径的抑制剂抑制所述dna错配修复途径的一种或多种蛋白质(mmr蛋白)的表达或功能。
9.权利要求8的方法，其中所述一种或多种mmr蛋白选自mlh1、pms2(或mutlα)、pms1(或mutlβ)、mlh3(或mutlγ)、mutsα(msh2-msh6)、mutsβ(msh2-msh3)、msh2、msh6、pcna、rfc、exo1、polδ和pcna。
10.权利要求8的方法，其中所述一种或多种mmr蛋白是mlh1。
11.权利要求10的方法，其中mlh1包含seq id no：204的氨基酸序列，或与seq id no：204具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或高达并包括100％的序列同一性的氨基酸序列。
12.权利要求8的方法，其中所述抑制剂是抑制所述dna错配修复途径的一种或多种蛋白质的活性的抗体。
13.权利要求8的方法，其中所述抑制剂是抑制所述dna错配修复途径的所述一种或多种蛋白质的活性的小分子。
14.权利要求8的方法，其中所述抑制剂是抑制所述dna错配修复途径的所述一种或多种蛋白质的活性的小干扰rna(sirna)或小非编码微小rna。
15.权利要求8的方法，其中所述抑制剂是抑制野生型mmr蛋白的活性的mmr蛋白的显性失活变体。
16.权利要求8的方法，其中所述抑制剂是抑制mlh1的活性的mlh1的显性失活变体。
17.权利要求16的方法，其中与seq id no：204所示的野生型mlh1蛋白相比，所述mlh1的显性失活变体在atp酶结构域中包含一个或多个氨基酸取代、插入和/或缺失，其中所述一个或多个氨基酸改变损害或消除所述mlh1的显性失活变体的atp酶活性。
18.权利要求16的方法，其中与seq id no：204所示的野生型mlh1蛋白相比，所述mlh1的显性失活变体在内切核酸酶结构域中包含一个或多个氨基酸取代、插入和/或缺失，其中所述一个或多个氨基酸改变损害或消除所述mlh1的显性失活变体的内切核酸酶活性。
19.权利要求16的方法，其中与seq id no：204所示的野生型mlh1蛋白相比，所述mlh1的显性失活变体在c端截短。
20.权利要求16的方法，其中与seq id no：204所示的野生型mlh1蛋白相比，所述mlh1的显性失活变体在n端截短。
21.权利要求16-20中任一项的方法，其中所述mlh1的显性失活变体进一步包含位于n端的核定位信号(nls)和/或位于c端的nls。
22.权利要求16的方法，其中所述显性失活变体是(a)mlh1 e34a(seq id no：222)、(b)mlh1 δ756(seq id no：208)、(c)mlh1 δ754-756(seq id no：209)、(d)mlh1 e34a δ754-756(seq id no：210)、(e)mlh1 1-335(seq id no：211)、(f)mlh1 1-335 e34a(seq idno：212)、(g)mlh1 1-335 nlssv40(seq id no：213)、(h)mlh1 501-756(seq id no：215)、(i)mlh1 501-753(seq id no：216)、(j)mlh1 461-753(seq id no：218)、或(k)nlssv40mlh1501-753(seq id no：223)，或包含与seq id no：208-213、215、216、218、222或223中任一项具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或高达并包括100％的序列同一性的氨基酸序列的多肽。
23.权利要求16的方法，其中所述显性失活变体(a)包含e34a氨基酸取代；(b)氨基酸756的缺失；(c)氨基酸754-756的缺失；(d)e34a氨基酸取代和氨基酸754-756的缺失；(e)氨基酸336-756的缺失；(f)e34a氨基酸取代和氨基酸336-756的缺失；(g)氨基酸1-500的缺失；(h)氨基酸1-500的缺失和氨基酸754-756的缺失；或(i)氨基酸1-460的缺失和氨基酸754-756的缺失，任选地其中所述显性失活变体进一步包含nls，所述nls在c端和/或n端包含序列krtadgsefespkkkrkv。
24.权利要求8的方法，其中所述抑制剂是抑制pms2活性的pms2的显性失活变体，任选地其中与野生型pms2蛋白相比，所述显性失活变体包含一个或多个氨基酸取代、插入和/或缺失，任选地其中与野生型pms2蛋白相比，所述显性失活变体包含(a)e705k取代、(b)氨基酸2-607的缺失、(c)氨基酸2-635的缺失、(d)氨基酸1-635的缺失、(e)e41a取代和/或(f)氨基酸134后的缺失。
25.权利要求8的方法，其中所述抑制剂是抑制msh6活性的msh6的显性失活变体，任选地其中与野生型msh6蛋白相比，所述显性失活变体包含一个或多个氨基酸取代、插入和/或缺失，任选地其中与野生型msh6蛋白相比，所述显性失活变体包含(a)k1140r取代和/或(b)氨基酸2-361的缺失。
26.权利要求8的方法，其中所述抑制剂包括cdkn1a。
27.权利要求1的方法，其中所述引导编辑器包含napdnabp和聚合酶。
28.权利要求27的方法，其中所述napdnabp是核酸酶活性cas9结构域、核酸酶失活cas9结构域、或cas9切口酶结构域或其变体。
29.权利要求27的方法，其中所述napdnabp是在hnh结构域中包含一个或多个氨基酸取代的cas9切口酶，任选地其中所述一个或多个氨基酸取代包含h840x、n854x和/或n863x，其中x是除原始氨基酸之外的任何氨基酸，任选地其中所述一个或多个氨基酸取代包括h840a、n854a和/或n863a。
30.权利要求27的方法，其中所述napdnabp选自下组：cas9、cas12e、cas12d、cas12a、cas12b1、cas13a、cas12c、cas12b2、cas13a、cas12c、cas12d、cas12e、cas12h、cas12i、cas12g、cas12f(cas14)、cas12f1、cas12j(casφ)和argonaute，并且任选地具有切口酶活性。
31.权利要求27的方法，其中所述napdnabp包含seq id no：2、4-67或104中任一项的氨基酸序列，或与seq id no：2、4-67或104中任一项具有至少80％、85％、90％、95％或99％的序列同一性的氨基酸序列。
32.权利要求27的方法，其中所述napdnabp包含seq id no：2或seq id no：37的氨基酸序列(即，pe1和pe2的napdnabp)或与seq id no：2或seq id no：37具有至少80％、85％、90％、95％或99％的序列同一性的氨基酸序列。
33.权利要求27的方法，其中所述聚合酶是dna依赖性dna聚合酶或rna依赖性dna聚合酶。
34.权利要求27的方法，其中所述聚合酶是逆转录酶。
35.权利要求34的方法，其中所述逆转录酶是逆转录病毒逆转录酶，任选地其中所述逆转录酶是莫洛尼鼠白血病病毒逆转录酶(mmlv-rt)，任选地其中所述mmlv-rt与野生型mmlv-rt相比包含选自以下的一个或多个氨基酸取代：d200n、t306k、w313f、t330p和l603w。
36.权利要求34的方法，其中所述逆转录酶包含seq id no：69-98中任一项的氨基酸序列或与seq id no：69-98中任一项具有至少80％、85％、90％、95％或99％的序列同一性的氨基酸序列，任选地其中所述逆转录酶包含seq id no：105的氨基酸序列。
37.权利要求27的方法，其中所述napdnabp和所述引导编辑器的聚合酶连接以形成融合蛋白，任选地其中所述napdnabp和所述聚合酶通过接头连接。
38.权利要求37的方法，其中所述接头包含seq id no：102或118-131中任一项的氨基酸序列，或与seq id no：102或118-131中任一项具有至少80％、85％、90％、95％或99％的序列同一性的氨基酸序列。
39.权利要求37的方法，其中所述接头为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、38、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸长度。
40.权利要求37的方法，其中所述融合蛋白包含seq id no：99或seq id no：107的氨基酸序列，或与seq id no：99或seq id no：107中任一项具有至少80％、85％、90％、95％或99％的序列同一性的氨基酸序列。
41.权利要求1的方法，其中所述引导编辑器、所述pegrna和所述dna错配修复途径的抑制剂在一个或多个dna载体上编码。
42.权利要求41的方法，其中所述一个或多个dna载体包括aav或慢病毒dna载体。
43.权利要求42的方法，其中所述aav载体是血清型1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
44.权利要求27-36中任一项的方法，其中所述引导编辑器和所述dna错配修复途径的抑制剂不是共价连接的。
45.权利要求27-36中任一项的方法，其中作为融合蛋白的所述napdnabp、所述聚合酶或所述引导编辑器进一步通过第二接头连接至所述dna错配修复途径的抑制剂。
46.权利要求45的方法，其中所述第二接头包含自水解接头，任选地其中所述第二接头是t2a接头或p2a接头。
47.权利要求45的方法，其中所述第二接头包含seq id no：102、118-131或233-236中任一项的氨基酸序列，或与seq id no：102、118-131或233-236中任一项具有至少80％、85％、90％、95％或99％的序列同一性的氨基酸序列。
48.权利要求45的方法，其中所述第二接头为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、38、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸长度。
49.权利要求1的方法，其中在所述靶位点处安装的对所述核酸分子的一个或多个修饰包括一个或多个转换、一个或多个颠换、一个或多个插入、一个或多个缺失、一个或多个倒位、或其任何组合，并且任选地小于15bp。
50.权利要求49的方法，其中所述一个或多个转换选自下组：(a)t至c；(b)a至g；(c)c至t；和(d)g至a。
51.权利要求49的方法，其中所述一个或多个颠换选自下组：(a)t至a；(b)t至g；(c)c至g；(d)c至a；(e)a至t；(f)a至c；(g)g至c；和(h)g至t。
52.权利要求1的方法，其中所述一个或多个修饰包括改变(1)g：c碱基对至t：a碱基对、(2)g：c碱基对至a：t碱基对、(3)g：c碱基对至c：g碱基对、(4)t：a碱基对至g：c碱基对、(5)t：a碱基对至a：t碱基对、(6)t：a碱基对至c：g碱基对、(7)c：g碱基对至g：c碱基对、(8)c：g碱基对至t：a碱基对、(9)c：g碱基对至a：t碱基对、(10)a：t碱基对至t：a碱基对、(11)a：t碱基对至g：c碱基对、或(12)a：t碱基对至c：g碱基对。
53.权利要求1的方法，其中所述一个或多个修饰包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25个核苷酸的插入或缺失，任选地其中所述一个或多个编辑包含1-15个核苷酸的插入或缺失。
54.权利要求1的方法，其中所述一个或多个修饰包含对疾病相关基因中与疾病相关的突变的校正。
55.权利要求54的方法，其中所述疾病相关基因与选自下组的多基因病症相关：心脏病；高血压；阿尔茨海默病；关节炎；糖尿病；癌症；和肥胖。
56.权利要求54的方法，其中所述疾病相关基因与选自下组的单基因病症相关：腺苷脱氨酶(ada)缺乏症；alpha-1抗胰蛋白酶缺乏症；囊性纤维化；杜氏肌营养不良症；半乳糖血症；血色素沉着症；亨廷顿病；枫糖浆尿病；马凡氏综合症；1型神经纤维瘤病；先天性厚甲症；苯丙酮尿症；严重联合免疫缺陷；镰状细胞性贫血症；史密斯-莱姆利-奥皮茨综合症；三核苷酸重复病症；朊病毒病；和泰萨二氏病。
57.权利要求1-56中任一项的方法，其中所述grna核心包含与所述靶位点的序列的最小序列同源性，任选地其中所述grna核心包含与所述一个或多个核苷酸编辑的位置上游或下游5、10、15、20、25、30、35、40、45或50个核苷酸两侧的所述双链靶dna的序列不超过1％、5％、10％、15％、20％、25％或30％的序列同源性。
58.用于通过引导编辑来编辑核酸分子的组合物，其包含引导编辑器、pegrna和dna错配修复途径的抑制剂，其中所述组合物能够在靶位点处安装对所述核酸分子的一个或多个修饰。
59.权利要求58的组合物，其中所述组合物进一步包含第二链切口产生grna。
60.权利要求58的组合物，其中相较于在不存在所述dna错配修复途径的抑制剂的情况下使用所述引导编辑器和所述pegrna的引导编辑效率，在存在所述dna错配修复途径的抑制剂的情况下，所述引导编辑效率增加至少1.5倍、至少2.0倍、至少2.5倍、至少3.0倍、至少3.5倍、至少4.0倍、至少4.5倍、至少5.0倍、至少5.5倍、至少6.0倍、至少6.5倍、至少7.0倍、至少7.5倍、至少8.0倍、至少8.5倍、至少9.0倍、至少9.5倍、至少10.0倍、至少11倍、至少12倍、至少13倍、至少14倍、至少15倍、至少16倍、至少17倍、至少18倍、至少19倍、至少20倍、至少21倍、至少22倍、至少23倍、至少24倍、至少25倍、至少26倍、至少27倍、至少28倍、至少29倍、至少30倍、至少31倍、至少32倍、至少33倍、至少34倍、至少35倍、至少36倍、至少37倍、至少38倍、至少39倍、至少40倍、至少41倍、至少42倍、至少43倍、至少44倍、至少45倍、至少46倍、至少47倍、至少48倍、至少49倍、至少50倍、至少51倍、至少52倍、至少53倍、至少54倍、至少55倍、至少56倍、至少57倍、至少58倍、至少59倍、至少60倍、至少61倍、至少62倍、至少63倍、至少64倍、至少65倍、至少66倍、至少67倍、至少68倍、至少69倍、至少70倍、至少71倍、至少72倍、至少73倍、至少74倍或至少75倍。
61.权利要求58的组合物，其中相较于在不存在所述dna错配修复途径的抑制剂的情况下使用所述引导编辑器和所述pegrna的插入缺失形成频率，在存在所述dna错配修复途径的抑制剂的情况下，所述插入缺失形成频率减少至少1.5倍、至少2.0倍、至少2.5倍、至少3.0倍、至少3.5倍、至少4.0倍、至少4.5倍、至少5.0倍、至少5.5倍、至少6.0倍、至少6.5倍、至少7.0倍、至少7.5倍、至少8.0倍、至少8.5倍、至少9.0倍、至少9.5倍、至少10.0倍、至少11倍、至少12倍、至少13倍、至少14倍、至少15倍、至少16倍、至少17倍、至少18倍、至少19倍、至少20倍、至少21倍、至少22倍、至少23倍、至少24倍、至少25倍、至少26倍、至少27倍、至少28倍、至少29倍、至少30倍、至少31倍、至少32倍、至少33倍、至少34倍、至少35倍、至少36倍、至少37倍、至少38倍、至少39倍、至少40倍、至少41倍、至少42倍、至少43倍、至少44倍、至少45倍、至少46倍、至少47倍、至少48倍、至少49倍、至少50倍、至少51倍、至少52倍、至少53倍、至少54倍、至少55倍、至少56倍、至少57倍、至少58倍、至少59倍、至少60倍、至少61倍、至少62倍、至少63倍、至少64倍、至少65倍、至少66倍、至少67倍、至少68倍、至少69倍、至少70倍、至少71倍、至少72倍、至少73倍、至少74倍或至少75倍。
62.权利要求58的组合物，其中相较于在不存在所述dna错配修复途径的抑制剂的情况下使用所述引导编辑器和所述pegrna的编辑结果纯度，在存在所述dna错配修复途径的抑制剂的情况下，所述编辑结果纯度增加至少1.5倍、至少2.0倍、至少2.5倍、至少3.0倍、至少3.5倍、至少4.0倍、至少4.5倍、至少5.0倍、至少5.5倍、至少6.0倍、至少6.5倍、至少7.0倍、至少7.5倍、至少8.0倍、至少8.5倍、至少9.0倍、至少9.5倍、至少10.0倍、至少11倍、至少12倍、至少13倍、至少14倍、至少15倍、至少16倍、至少17倍、至少18倍、至少19倍、至少20倍、至少21倍、至少22倍、至少23倍、至少24倍、至少25倍、至少26倍、至少27倍、至少28倍、至少29倍、至少30倍、至少31倍、至少32倍、至少33倍、至少34倍、至少35倍、至少36倍、至少37倍、至少38倍、至少39倍、至少40倍、至少41倍、至少42倍、至少43倍、至少44倍、至少45倍、至少46倍、至少47倍、至少48倍、至少49倍、至少50倍、至少51倍、至少52倍、至少53倍、至少54倍、至少55倍、至少56倍、至少57倍、至少58倍、至少59倍、至少60倍、至少61倍、至少62倍、至少63倍、至少64倍、至少65倍、至少66倍、至少67倍、至少68倍、至少69倍、至少70倍、至少71倍、至少72倍、至少73倍、至少74倍或至少75倍，其中所述编辑结果纯度通过预期编辑/非预期插入缺失的比率来测量。
63.权利要求58的组合物，其中所述dna错配修复途径的抑制剂抑制所述dna错配修复途径的一种或多种蛋白质(mmr蛋白)的表达。
64.权利要求63的组合物，其中所述一种或多种mmr蛋白选自mlh1、pms2(或mutlα)、pms1(或mutlβ)、mlh3(或mutlγ)、mutsα(msh2-msh6)、mutsβ(msh2-msh3)、msh2、msh6、pcna、rfc、exo1、polδ和pcna。
65.权利要求63的组合物，其中所述一种或多种mmr蛋白是mlh1。
66.权利要求65的组合物，其中mlh1包含seq id no：204的氨基酸序列，或与seq idno：204具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或高达并包括100％的序列同一性的氨基酸序列。
67.权利要求63的组合物，其中所述抑制剂是抑制所述dna错配修复途径的一种或多种蛋白质的活性的抗体。
68.权利要求63的组合物，其中所述抑制剂是抑制所述dna错配修复途径的所述一种或多种蛋白质的活性的小分子。
69.权利要求63的组合物，其中所述抑制剂是抑制所述dna错配修复途径的所述一种或多种蛋白质的活性的小干扰rna(sirna)或小非编码微小rna。
70.权利要求63的组合物，其中所述抑制剂是抑制野生型mmr蛋白的活性的mmr蛋白的显性失活变体。
71.权利要求63的组合物，其中所述抑制剂是抑制mlh1活性的mlh1的显性失活变体。
72.权利要求71的组合物，其中与seq id no：204所示的野生型mlh1蛋白相比，所述mlh1的显性失活变体在atp酶结构域中包含一个或多个氨基酸取代、插入和/或缺失，其中所述一个或多个氨基酸改变损害或消除所述mlh1的显性失活变体的atp酶活性。
73.权利要求71的组合物，其中与seq id no：204所示的野生型mlh1蛋白相比，所述mlh1的显性失活变体在内切核酸酶结构域中包含一个或多个氨基酸取代、插入和/或缺失，其中所述一个或多个氨基酸改变损害或消除所述mlh1的显性失活变体的内切核酸酶活性。
74.权利要求71的组合物，其中与seq id no：204所示的野生型mlh1蛋白相比，所述mlh1的显性失活变体在c端截短。
75.权利要求71的组合物，其中与seq id no：204所示的野生型mlh1蛋白相比，所述mlh1的显性失活变体在n端截短。
76.权利要求71-75中任一项的组合物，其中所述mlh1的显性失活变体进一步包含位于n端的核定位信号(nls)和/或位于c端的nls。
77.权利要求71的组合物，其中所述显性失活变体是(a)mlh1 e34a(seq id no：222)、(b)mlh1 δ756(seq id no：208)、(c)mlh1 δ754-756(seq id no：209)、(d)mlh1 e34a δ754-756(seq id no：210)、(e)mlh1 1-335(seq id no：211)、(f)mlh1 1-335 e34a(seq idno：212)、(g)mlh1 1-335 nlssv40(seq id no：213)、(h)mlh1 501-756(seq id no：215)、(i)mlh1 501-753(seq id no：216)、(j)mlh1 461-753(seq id no：218)、或(k)nlssv40mlh1501-753(seq id no：223)，或包含与seq id no：208-213、215、216、218、222或223中任一项具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或高达并包括100％的序列同一性的氨基酸序列的多肽。
78.权利要求71的组合物，其中所述显性失活变体(a)包含e34a氨基酸取代；(b)氨基酸756的缺失；(c)氨基酸754-756的缺失；(d)e34a氨基酸取代和氨基酸754-756的缺失；(e)氨基酸336-756的缺失；(f)e34a氨基酸取代和氨基酸336-756的缺失；(g)氨基酸1-500的缺失；(h)氨基酸1-500的缺失和氨基酸754-756的缺失；或(i)氨基酸1-460的缺失和氨基酸754-756的缺失，任选地其中所述显性失活变体进一步包含nls，所述nls在c端和/或n端包含序列krtadgsefespkkkrkv。
79.权利要求73的组合物，其中所述抑制剂是抑制pms2活性的pms2的显性失活变体，任选地其中与野生型pms2蛋白相比，所述显性失活变体包含一个或多个氨基酸取代、插入和/或缺失，任选地其中与野生型pms2蛋白相比，所述显性失活变体包含(a)e705k取代、(b)氨基酸2-607的缺失、(c)氨基酸2-635的缺失、(d)氨基酸1-635的缺失、(e)e41a取代和/或(f)氨基酸134后的缺失。
80.权利要求73的组合物，其中所述抑制剂是抑制msh6活性的msh6的显性失活变体，任选地其中与野生型msh6蛋白相比，所述显性失活变体包含一个或多个氨基酸取代、插入和/或缺失，任选地其中与野生型msh6蛋白相比，所述显性失活变体包含(a)k1140r取代和/或(b)氨基酸2-361的缺失。
81.权利要求73的组合物，其中所述抑制剂包括cdkn1a。
82.权利要求58的组合物，其中所述引导编辑器包含napdnabp和聚合酶。
83.权利要求82的组合物，其中所述napdnabp是核酸酶活性cas9结构域、核酸酶失活cas9结构域、或cas9切口酶结构域或其变体。
84.权利要求82的组合物，其中所述napdnabp是在hnh结构域中包含一个或多个氨基酸取代的cas9切口酶，任选地其中所述一个或多个氨基酸取代包含h840x、n854x和/或n863x，其中x是除原始氨基酸之外的任何氨基酸，任选地其中所述一个或多个氨基酸取代包括h840a、n854a和/或n863a。
85.权利要求84的组合物，其中所述napdnabp选自下组：cas9、cas12e、cas12d、cas12a、cas12b1、cas13a、cas12c、argonautecas12b2、cas13a、cas12c、cas12d、cas12e、cas12h、cas12i、cas12g、cas12f(cas14)、cas12f1、cas12j(casφ)和argonaute，并且任选地具有切口酶活性。
86.权利要求84的组合物，其中所述napdnabp包含seq id no：2、4-67或pemax中任一项的氨基酸序列，或与seq id no：2、4-67或104中任一项具有至少80％、85％、90％、95％或99％的序列同一性的氨基酸序列。
87.权利要求84的组合物，其中所述napdnabp包含seq id no：2或seq id no：37的氨基酸序列(即，pe1和pe2的napdnabp)或与seq id no：2或seq id no：37具有至少80％、85％、90％、95％或99％的序列同一性的氨基酸序列。
88.权利要求84的组合物，其中所述聚合酶是dna依赖性dna聚合酶或rna依赖性dna聚合酶。
89.权利要求84的组合物，其中所述聚合酶是逆转录酶。
90.权利要求89的组合物，其中所述逆转录酶是逆转录病毒逆转录酶，任选地其中所述逆转录酶是莫洛尼鼠白血病病毒逆转录酶(mmlv-rt)，任选地其中所述mmlv-rt与野生型mmlv-rt相比包含选自以下的一个或多个氨基酸取代：d200n、t306k、w313f、t330p和l603w。
91.权利要求89的组合物，其中所述逆转录酶包含seq id no：69-98中任一项的氨基酸序列或与seq id no：69-98中任一项具有至少80％、85％、90％、95％或99％的序列同一性的氨基酸序列，任选地其中所述逆转录酶包含seq id no：105的氨基酸序列。
92.权利要求84的组合物，其中所述napdnabp和所述引导编辑器的聚合酶连接以形成融合蛋白，任选地其中所述napdnabp和所述聚合酶通过接头连接。
93.权利要求92的组合物，其中所述接头包含seq id no：102、118-131中任一项的氨基酸序列，或与seq id no：102、118-131中任一项具有至少80％、85％、90％、95％或99％的序列同一性的氨基酸序列。
94.权利要求92的组合物，其中所述接头为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、38、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸长度。
95.权利要求92的组合物，其中所述融合蛋白包含seq id no：99或seq id no：107的氨基酸序列，或与seq id no：99或seq id no：107中任一项具有至少80％、85％、90％、95％或99％的序列同一性的氨基酸序列。
96.权利要求58的组合物，其中所述引导编辑器、所述pegrna和所述dna错配修复途径的抑制剂在一个或多个dna载体上编码。
97.权利要求96的组合物，其中所述一个或多个dna载体包括aav或慢病毒dna载体。
98.权利要求97的组合物，其中所述aav载体是血清型1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
99.权利要求84-91中任一项的组合物，其中所述引导编辑器和所述dna错配修复途径的抑制剂不是共价连接的。
100.权利要求84-91中任一项的组合物，其中作为融合蛋白的所述引导编辑器进一步通过第二接头连接至所述dna错配修复途径的抑制剂。
101.权利要求100的组合物，其中所述第二接头包含自水解接头，任选地其中所述第二接头是t2a接头或p2a接头。
102.权利要求100的组合物，其中所述第二接头包含seq id no：102、118-131或233-236中任一项的氨基酸序列，或与seq id no：102、118-131、233-236中任一项具有至少80％、85％、90％、95％或99％的序列同一性的氨基酸序列。
103.权利要求100的组合物，其中所述第二接头为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、38、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸长度。
104.权利要求58的组合物，其中在所述靶位点处安装的对所述核酸分子的一个或多个修饰包括一个或多个转换、一个或多个颠换、一个或多个插入、一个或多个缺失、一个或多个倒位、或其任何组合，并且任选地小于15bp。
105.权利要求104的组合物，其中所述一个或多个转换选自下组：(a)t至c；(b)a至g；(c)c至t；和(d)g至a。
106.权利要求104的组合物，其中所述一个或多个颠换选自下组：(a)t至a；(b)t至g；(c)c至g；(d)c至a；(e)a至t；(f)a至c；(g)g至c；和(h)g至t。
107.权利要求58的组合物，其中所述一个或多个修饰包括改变(1)g：c碱基对至t：a碱基对、(2)g：c碱基对至a：t碱基对、(3)g：c碱基对至c：g碱基对、(4)t：a碱基对至g：c碱基对、(5)t：a碱基对至a：t碱基对、(6)t：a碱基对至c：g碱基对、(7)c：g碱基对至g：c碱基对、(8)c：g碱基对至t：a碱基对、(9)c：g碱基对至a：t碱基对、(10)a：t碱基对至t：a碱基对、(11)a：t碱基对至g：c碱基对、或(12)a：t碱基对至c：g碱基对。
108.权利要求58的组合物，其中所述一个或多个修饰包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25个核苷酸的插入或缺失，任选地其中所述一个或多个编辑包含1-15个核苷酸的插入或缺失。
109.权利要求58的组合物，其中所述一个或多个修饰包含对疾病相关基因中与疾病相关的突变的校正。
110.权利要求109的组合物，其中所述疾病相关基因与选自下组的多基因病症相关：心脏病；高血压；阿尔茨海默病；关节炎；糖尿病；癌症；和肥胖。
111.权利要求109的组合物，其中所述疾病相关基因与选自下组的单基因病症相关：腺苷脱氨酶(ada)缺乏；alpha-1抗胰蛋白酶缺乏症；囊性纤维化；杜氏肌营养不良症；半乳糖血症；血色素沉着症；亨廷顿病；枫糖浆尿病；马凡氏综合症；1型神经纤维瘤病；先天性厚甲症；苯丙酮尿症；严重联合免疫缺陷；镰状细胞性贫血症；史密斯-莱姆利-奥皮茨综合症；三核苷酸重复病症；朊病毒病；和泰萨二氏病。
112.权利要求58-111中任一项的组合物，其中所述grna核心包含与所述靶位点的序列的最小序列同源性，任选地其中所述grna核心包含与所述一个或多个核苷酸编辑的位置上游或下游5、10、15、20、25、30、35、40、45或50个核苷酸两侧的所述双链靶dna的序列不超过1％、5％、10％、15％、20％、25％或30％的序列同源性。
113.用于通过引导编辑来编辑dna靶位点的多核苷酸，所述多核苷酸包含编码napdnabp、聚合酶和dna错配修复途径的抑制剂的核酸序列，其中所述napdnabp和聚合酶能够在存在pegrna的情况下在dna靶位点中安装一个或多个修饰。
114.权利要求113的多核苷酸，其中所述多核苷酸进一步包含编码第二链切口产生grna的核酸序列。
115.权利要求113的多核苷酸，其中在存在所述dna错配修复途径的抑制剂的情况下，所述引导编辑效率增加至少1.5倍、至少2.0倍、至少2.5倍、至少3.0倍、至少3.5倍、至少4.0倍、至少4.5倍、至少5.0倍、至少5.5倍、至少6.0倍、至少6.5倍、至少7.0倍、至少7.5倍、至少8.0倍、至少8.5倍、至少9.0倍、至少9.5倍、至少10.0倍、至少11倍、至少12倍、至少13倍、至少14倍、至少15倍、至少16倍、至少17倍、至少18倍、至少19倍、至少20倍、至少21倍、至少22倍、至少23倍、至少24倍、至少25倍、至少26倍、至少27倍、至少28倍、至少29倍、至少30倍、至少31倍、至少32倍、至少33倍、至少34倍、至少35倍、至少36倍、至少37倍、至少38倍、至少39倍、至少40倍、至少41倍、至少42倍、至少43倍、至少44倍、至少45倍、至少46倍、至少47倍、至少48倍、至少49倍、至少50倍、至少51倍、至少52倍、至少53倍、至少54倍、至少55倍、至少56倍、至少57倍、至少58倍、至少59倍、至少60倍、至少61倍、至少62倍、至少63倍、至少64倍、至少65倍、至少66倍、至少67倍、至少68倍、至少69倍、至少70倍、至少71倍、至少72倍、至少73倍、至少74倍或至少75倍。
116.权利要求113的多核苷酸，其中在存在所述dna错配修复途径的抑制剂的情况下，所述插入缺失形成频率减少至少1.5倍、至少2.0倍、至少2.5倍、至少3.0倍、至少3.5倍、至少4.0倍、至少4.5倍、至少5.0倍、至少5.5倍、至少6.0倍、至少6.5倍、至少7.0倍、至少7.5倍、至少8.0倍、至少8.5倍、至少9.0倍、至少9.5倍、至少10.0倍、至少11倍、至少12倍、至少13倍、至少14倍、至少15倍、至少16倍、至少17倍、至少18倍、至少19倍、至少20倍、至少21倍、至少22倍、至少23倍、至少24倍、至少25倍、至少26倍、至少27倍、至少28倍、至少29倍、至少30倍、至少31倍、至少32倍、至少33倍、至少34倍、至少35倍、至少36倍、至少37倍、至少38倍、至少39倍、至少40倍、至少41倍、至少42倍、至少43倍、至少44倍、至少45倍、至少46倍、至少47倍、至少48倍、至少49倍、至少50倍、至少51倍、至少52倍、至少53倍、至少54倍、至少55倍、至少56倍、至少57倍、至少58倍、至少59倍、至少60倍、至少61倍、至少62倍、至少63倍、至少64倍、至少65倍、至少66倍、至少67倍、至少68倍、至少69倍、至少70倍、至少71倍、至少72倍、至少73倍、至少74倍或至少75倍。
117.权利要求113的多核苷酸，其中所述dna错配修复途径的抑制剂抑制所述dna错配修复途径的一种或多种蛋白质。
118.权利要求117的多核苷酸，其中所述一种或多种蛋白质选自mlh1、pms2(或mutlα)、pms1(或mutlβ)、mlh3(或mutlγ)、mutsα(msh2-msh6)、mutsβ(msh2-msh3)、msh2、msh6、pcna、rfc、exo1、polδ和pcna。
119.权利要求117的多核苷酸，其中所述一种或多种蛋白质是mlh1。
120.权利要求119的多核苷酸，其中mlh1包含seq id no：204的氨基酸序列，或与seqid no：204具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或高达并包括100％的序列同一性的氨基酸序列。
121.权利要求113的多核苷酸，其中所述抑制剂是抑制所述dna错配修复途径的一种或多种蛋白质的活性的抗体。
122.权利要求113的多核苷酸，其中所述抑制剂是抑制所述dna错配修复途径的一种或多种蛋白质的活性的小干扰rna(sirna)或小非编码微小rna。
123.权利要求113的多核苷酸，其中所述抑制剂是抑制野生型mmr蛋白的活性的mmr蛋白的显性失活变体。
124.权利要求113的多核苷酸，其中所述抑制剂是抑制mlh1的mlh1的显性失活变体。
125.权利要求124的多核苷酸，其中所述显性失活变体是(a)mlh1 e34a(seq id no：222)、(b)mlh1 δ756(seq id no：208)、(c)mlh1 δ754-756(seq id no：209)、(d)mlh1e34a δ754-756(seq id no：210)、(e)mlh1 1-335(seq id no：211)、(f)mlh1 1-335 e34a(seq id no：212)、(g)mlh1 1-335 nlssv40(seq id no：213)、(h)mlh1 501-756(seq idno：215)、(i)mlh1 501-753(seq id no：216)、(j)mlh1 461-753(seq id no：218)、或(k)nlssv40mlh1 501-753(seq id no：223)，或包含与seq id no：208-213、215、216、218、222或223中任一项具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或高达并包括100％的序列同一性的氨基酸序列的多肽。
126.权利要求113的多核苷酸，其中所述napdnabp是核酸酶活性cas9结构域、核酸酶失活cas9结构域、或cas9切口酶结构域或其变体。
127.权利要求113的多核苷酸，其中所述napdnabp选自下组：cas9、cas12e、cas12d、cas12a、cas12b1、cas13a、cas12c、argonautecas12b2、cas13a、cas12c、cas12d、cas12e、cas12h、cas12i、cas12g、cas12f(cas14)、cas12f1、cas12j(casφ)和argonaute，并且任选地具有切口酶活性。
128.权利要求113的多核苷酸，其中所述napdnabp包含seq id no：2、4-67或104中任一项的氨基酸序列，或与seq id no：2、4-67或104中任一项具有至少80％、85％、90％、95％或99％的序列同一性的氨基酸序列。
129.权利要求113的多核苷酸，其中所述napdnabp包含seq id no：2的氨基酸序列(即，pe1和pe2的napdnabp)或与seq id no：2具有至少80％、85％、90％、95％或99％的序列同一性的氨基酸序列。
130.权利要求113的多核苷酸，其中所述聚合酶是dna依赖性dna聚合酶或rna依赖性dna聚合酶。
131.权利要求113的多核苷酸，其中所述聚合酶是逆转录酶。
132.权利要求131的多核苷酸，其中所述逆转录酶包含seq id no：69-98中任一项的氨基酸序列，或与seq id no：69-98中任一项具有至少80％、85％、90％、95％或99％的序列同一性的氨基酸序列。
133.权利要求113的多核苷酸，其中所述napdnabp和所述引导编辑器的聚合酶通过接头连接以形成融合蛋白。
134.权利要求133的多核苷酸，其中所述接头包含seq id no：102或118-131中任一项的氨基酸序列，或与seq id no：102或118-131中任一项具有至少80％、85％、90％、95％或99％的序列同一性的氨基酸序列。
135.权利要求133的多核苷酸，其中所述接头为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、38、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸长度。
136.权利要求113的多核苷酸，其中所述多核苷酸是dna载体。
137.权利要求136的多核苷酸，其中所述dna载体是aav或慢病毒dna载体。
138.权利要求137的多核苷酸，其中所述aav载体是血清型1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
139.权利要求133的多核苷酸，其中作为融合蛋白的所述引导编辑器进一步通过第二接头连接至所述dna错配修复途径的抑制剂。
140.权利要求139的多核苷酸，其中所述第二接头包含自水解接头。
141.权利要求139的多核苷酸，其中所述第二接头包含seq id no：102、118-131或233-236中任一项的氨基酸序列，或与seq id no：102、118-131或233-236中任一项具有至少80％、85％、90％、95％或99％的序列同一性的氨基酸序列。
142.权利要求139的多核苷酸，其中所述第二接头为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、38、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸长度。
143.权利要求113的多核苷酸，其中在所述靶位点处安装的对所述核酸分子的一个或多个修饰包括一个或多个转换、一个或多个颠换、一个或多个插入、一个或多个缺失、或一个或多个倒位。
144.权利要求143的多核苷酸，其中所述一个或多个转换选自下组：(a)t至c；(b)a至g；(c)c至t；和(d)g至a。
145.权利要求143的多核苷酸，其中所述一个或多个颠换选自下组：(a)t至a；(b)t至g；(c)c至g；(d)c至a；(e)a至t；(f)a至c；(g)g至c；和(h)g至t。
146.权利要求113的多核苷酸，其中所述一个或多个修饰包括改变(1)g：c碱基对至t：a碱基对、(2)g：c碱基对至a：t碱基对、(3)g：c碱基对至c：g碱基对、(4)t：a碱基对至g：c碱基对、(5)t：a碱基对至a：t碱基对、(6)t：a碱基对至c：g碱基对、(7)c：g碱基对至g：c碱基对、(8)c：g碱基对至t：a碱基对、(9)c：g碱基对至a：t碱基对、(10)a：t碱基对至t：a碱基对、(11)a：t碱基对至g：c碱基对、或(12)a：t碱基对至c：g碱基对。
147.权利要求113的多核苷酸，其中所述一个或多个修饰包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25个核苷酸的插入或缺失。
148.权利要求113的的多核苷酸，其中所述一个或多个修饰包含对疾病相关基因的校正。
149.权利要求148的多核苷酸，其中所述疾病相关基因与选自下组的多基因病症相关：心脏病；高血压；阿尔茨海默病；关节炎；糖尿病；癌症；和肥胖。
150.权利要求148的多核苷酸，其中所述疾病相关基因与选自下组的单基因病症相关：腺苷脱氨酶(ada)缺乏；alpha-1抗胰蛋白酶缺乏症；囊性纤维化；杜氏肌营养不良症；半乳糖血症；血色素沉着症；亨廷顿病；枫糖浆尿病；马凡氏综合症；1型神经纤维瘤病；先天性厚甲症；苯丙酮尿症；严重联合免疫缺陷；镰状细胞性贫血症；史密斯-莱姆利-奥皮茨综合症；三核苷酸重复病症；朊病毒病；和泰萨二氏病。
151.细胞，其包含权利要求113-150中任一项的多核苷酸，任选地其中所述细胞是哺乳动物细胞、非人灵长类细胞或人细胞。
152.药物组合物，其包含权利要求41-80中任一项的组合物或权利要求113-151中任一项的多核苷酸、或权利要求151的细胞，以及药物赋形剂。
153.试剂盒，其包含权利要求58-112中任一项的组合物或权利要求113-150中任一项的多核苷酸、药物赋形剂和用于通过引导编辑来编辑dna靶位点的说明书。
154.组合物，其包含编码核酸可编程dna结合蛋白(napdnabp)的第一核酸序列、编码聚合酶的第二核酸序列和编码dna错配修复途径的抑制剂的第三核酸序列。
155.权利要求154的组合物，其中所述组合物进一步包含引导编辑向导rna(pegrna)或编码所述pegrna的核酸序列，其中所述pegrna包含间隔区序列、grna核心以及包含dna合成模板和引物结合位点(pbs)的延伸臂，其中所述间隔区序列包含与双链靶dna序列的靶链互补的区域，其中所述grna核心与所述napdnabp缔合，其中所述dna合成模板包含与所述双链靶dna序列的非靶链互补的区域以及与所述双链靶dna序列的靶链相比的一个或多个核苷酸编辑，并且其中所述引物结合位点包含与所述双链靶dna序列的非靶链互补的区域。
156.权利要求154的组合物，其中所述第一核酸序列和所述第二核酸序列位于单个多核苷酸上。
157.权利要求154的组合物，其中所述第一核酸序列、所述第二核酸序列和所述第三核酸序列位于单个多核苷酸上。
158.权利要求157的组合物，其中所述第一核酸序列和所述第二核酸序列连接以编码napdnabp-dna聚合酶融合蛋白。
159.权利要求158的组合物，其中所述第一核酸序列和所述第二核酸序列连接以编码napdnabp-dna聚合酶融合蛋白，其中所述第三核酸序列经由接头核酸序列连接至所述第一核酸序列或所述第二核酸序列，任选地其中所述接头核酸序列编码肽接头，任选地其中所述肽接头是自水解接头，任选地其中所...
【专利技术属性】
技术研发人员：D·R·刘，P·J·陈，B·亚当森，J·哈斯曼，
申请(专利权)人：布罗德研究所股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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