System.ArgumentOutOfRangeException: 索引和长度必须引用该字符串内的位置。 参数名: length 在 System.String.Substring(Int32 startIndex, Int32 length) 在 zhuanliShow.Bind() 一种A型塞内卡谷病毒融合蛋白、纳米骨架疫苗及其制备方法和应用技术_技高网

一种A型塞内卡谷病毒融合蛋白、纳米骨架疫苗及其制备方法和应用技术

技术编号:40949853 阅读:2 留言:0更新日期:2024-04-18 20:24
本发明专利技术提供了一种A型塞内卡谷病毒融合蛋白、纳米骨架疫苗及其制备方法和应用,属于兽用疫苗技术领域。一种A型塞内卡谷病毒融合蛋白,是包括A型塞内卡谷病毒结构蛋白VP1的B细胞表位、A型塞内卡谷病毒结构蛋白VP2和纳米支架(β环肽)融合得到。本发明专利技术通过选取SVA结构蛋白VP1B细胞表位与β环肽和VP2蛋白串联经密码子优化后构建重组质粒,通过大肠杆菌原核表达系统进行重组蛋白表达,得到的A型塞内卡谷纳米骨架蛋白制备成疫苗免疫动物,能诱导强烈的免疫应答反应。可见本发明专利技术提供的疫苗为预防A型塞内卡谷病毒病大规模流行提供了新手段。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于兽用疫苗,具体涉及一种a型塞内卡谷病毒融合蛋白、纳米骨架疫苗及其制备方法和应用。


技术介绍

1、a型塞内卡谷病毒(sva)是一种无包膜单股正链不分节段的rna病毒,属于小核糖核酸病毒科塞内卡病毒属。sva有一个大的开放阅读框,编码一个多蛋白,该多蛋白按标准小核糖核酸病毒l-4-3-4排列被切割成4个结构蛋白(vp1、vp3、vp2和vp4)和8个非结构蛋白(lpro、2a、2b、2c、3a、3b、3c和3d)。sva主要通过呼吸道感染传播。猪感染sva后,病毒首先在扁桃体定植繁殖并进入血液引起病毒血症,然后通过血液循环进入其他器官,引起临床症状。sva引起的临床疾病与口蹄疫(fmd)相似,其特征为鼻口、口腔黏膜、蹄冠出现囊泡、溃疡,甚至冠状脱离,偶有腹泻、偶有腹泻,临床表现为厌食、跛行、发热等。

2、有大量证据表明,sva毒株目前正在进化出毒性表型,从而增加了其致病性。因此,可能存在sva大流行爆发的潜在风险,应更加重视病毒的预防和控制。疫苗接种是预防和控制多种传染病的有效途径之一,因此研制安全高效的sva疫苗对sva的预防和控制具有重要意义。sva亚单位疫苗的开发需要精确定位具有较高免疫原性的抗原表位,以诱导强大的免疫应答。研究表明,sva感染猪血清中抗sva vp2的抗体水平高于其他抗sva的结构蛋白,这证明sva vp2蛋白是一种重要的免疫原性蛋白。然而为了进一步提高免疫应答程度,现有技术通过进一步筛选sva vp2的细胞表位,能有效阻断sva感染(cn115850394a)。


<p>技术实现思路

1、有鉴于此,本专利技术的目的在于提供一种a型塞内卡谷病毒融合蛋白,所述融合蛋白将sva vp1 b细胞表位和sva vp2通过β环肽连接,实现体外组装成24个亚基纳米骨架,可有效诱导动物强烈的免疫反应和产生相应中和抗体,为预防a型塞内卡谷病毒病大规模流行提供了有效工具。

2、本专利技术提供了一种a型塞内卡谷病毒融合蛋白,是包括a型塞内卡谷病毒结构蛋白vp1的b细胞表位、a型塞内卡谷病毒结构蛋白vp2和β环肽融合得到。

3、优选的,所述β环肽的氨基酸序列如seq id no:1所示;

4、所述a型塞内卡谷病毒结构蛋白vp1的b细胞表位的氨基酸序列如seq id no:2所示;

5、所述a型塞内卡谷病毒结构蛋白vp2的氨基酸序列如seq id no:3所示。

6、优选的,具有a型塞内卡谷病毒结构蛋白vp1 b细胞表位-β环肽-a型塞内卡谷病毒结构蛋白vp2的融合结构,氨基酸序列如seq id no:4所示。

7、本专利技术提供了一种编码所述a型塞内卡谷病毒融合蛋白的融合基因。

8、优选的,核苷酸序列如seq id no:5所示。

9、本专利技术提供了一种重组载体,包含所述融合基因。

10、本专利技术提供了一种工程菌株,包括所述融合基因或所述重组载体。

11、本专利技术提供了一种所述a型塞内卡谷病毒融合蛋白的制备方法,包括以下步骤:

12、将所述融合基因克隆至骨架载体中,得到重组载体;

13、将所述重组载体转化至宿主菌中,得到工程菌株;

14、将所述工程菌株经过培养进行融合基因的重组表达,重组蛋白分离和纯化,得到a型塞内卡谷纳米骨架蛋白。

15、本专利技术提供了一种纳米骨架疫苗,包括佐剂和所述制备方法得到的a型塞内卡谷纳米骨架蛋白。

16、本专利技术提供了所述a型塞内卡谷病毒融合蛋白、所述融合基因、所述重组载体、所述工程菌株或所述制备方法得到的a型塞内卡谷纳米骨架蛋白在制备防控a型塞内卡谷病毒感染的纳米骨架疫苗中的应用。

17、本专利技术提供了一种a型塞内卡谷病毒融合蛋白,包括a型塞内卡谷病毒结构蛋白vp1的b细胞表位、a型塞内卡谷病毒结构蛋白vp2和β环肽融合得到。β环肽作为一种新型球形纳米蛋白,具有良好的生物相容性和安全性,广泛存在于番茄丛效应病毒(tbsv)等天然植物病毒中,在体外可自组装成24个亚基纳米骨架,是开发新型纳米骨架疫苗的良好候选材料。sva结构蛋白vp1 b细胞表位完全暴露在vp1表面,可被单克隆抗体特异性识别,抗原指数高,可能是重要的b细胞表位。研究表明,sva感染猪血清中抗sva的抗体水平高于其他抗sva的结构蛋白,这证明sva结构蛋白vp2是一种重要的免疫原性蛋白,可诱导高水平的体液免疫反应。因此,vp2蛋白在sva疫苗的研制中起着极其重要的作用。可诱导实验动物产生针对sva的中和抗体,通过选取sva结构蛋白vp1 b细胞表位和vp2蛋白与β环肽串联构建质粒,通过大肠杆菌原核表达系统进行融合蛋白表达,这些纳米蛋白可以紧密携带抗原,并能诱导强烈的免疫反应,搭配合适佐剂制成新型纳米骨架疫苗用来预防a型塞内卡谷病毒病大规模流行。

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【技术保护点】

1.一种A型塞内卡谷病毒融合蛋白,其特征在于,是包括A型塞内卡谷病毒结构蛋白VP1的B细胞表位、A型塞内卡谷病毒结构蛋白VP2和β环肽融合得到。

2.根据权利要求1所述A型塞内卡谷病毒融合蛋白,其特征在于,所述β环肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示;

3.根据权利要求1所述A型塞内卡谷病毒融合蛋白,其特征在于,具有A型塞内卡谷病毒结构蛋白VP1 B细胞表位-β环肽-A型塞内卡谷病毒结构蛋白VP2的融合结构,氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示。

4.一种编码权利要求1~3中任意一项所述A型塞内卡谷病毒融合蛋白的融合基因。

5.根据权利要求4所述融合基因,其特征在于,核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示。

6.一种重组载体,其特征在于,包含权利要求4或5所述融合基因。

7.一种工程菌株,其特征在于,包括权利要求4或5所述融合基因或权利要求6所述重组载体。

8.一种权利要求1~3中任意一项所述A型塞内卡谷病毒融合蛋白的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:

9.一种A型塞内卡谷病毒纳米骨架疫苗,其特征在于,包括佐剂和权利要求8所述制备方法得到的A型塞内卡谷纳米骨架蛋白。

10.权利要求1~3中任意一项所述A型塞内卡谷病毒融合蛋白、权利要求4或5所述融合基因、权利要求6所述重组载体、权利要求8所述工程菌株或权利要求8所述制备方法得到的A型塞内卡谷纳米骨架蛋白在制备防控A型塞内卡谷病毒感染的纳米骨架疫苗中的应用。

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【技术特征摘要】

1.一种a型塞内卡谷病毒融合蛋白,其特征在于,是包括a型塞内卡谷病毒结构蛋白vp1的b细胞表位、a型塞内卡谷病毒结构蛋白vp2和β环肽融合得到。

2.根据权利要求1所述a型塞内卡谷病毒融合蛋白,其特征在于,所述β环肽的氨基酸序列如seq id no:1所示;

3.根据权利要求1所述a型塞内卡谷病毒融合蛋白,其特征在于,具有a型塞内卡谷病毒结构蛋白vp1 b细胞表位-β环肽-a型塞内卡谷病毒结构蛋白vp2的融合结构,氨基酸序列如seq id no:4所示。

4.一种编码权利要求1~3中任意一项所述a型塞内卡谷病毒融合蛋白的融合基因。

5.根据权利要求4所述融合基因,其特征在于,核苷酸序列如seq id no:5所示。<...

【专利技术属性】
技术研发人员:钱平曹楠李祥敏李亚美
申请(专利权)人:华中农业大学
类型:发明
国别省市:

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