【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及用于检测和定位或可视化肿瘤中的导蛋白-1的方法和试剂，以及基于导蛋白-1的存在来治疗癌症的方法和试剂。本专利技术特别涉及一种新诊断测试，其可以是伴随测试，以及可以与伴随测试组合的新癌症治疗方法。
技术介绍
1、目前有多种方法用于治疗每种类型的癌症，包括手术、放射疗法、化学疗法、靶向治疗和免疫治疗。成功的癌症治疗针对原发肿瘤和任何转移瘤，无论其是临床上明显的还是微观的。
2、患者关注的是尽早识别癌症的存在并可以定位癌症和确定待治疗癌症的类型。在早期诊断出的癌症更有可能得到成功治疗。如果癌症扩散，有效的治疗会变得更加困难，而且通常生存的机会也会低得多。因此，有必要知道何时立即使用强力且积极的治疗方案，以防止侵袭性癌症的扩散。
3、此外，即使治疗方案相当成功，也可能在某些地方留下肿瘤细胞或肿瘤干细胞。识别和定位这些细胞也至关重要。
4、患者也可能会关注能够提出抗癌靶向治疗。然而，靶向治疗的情况下，确实需要能够在体内检测和定位癌症并确定癌症的某些分子特征的试剂，以便可以在尽可能早的阶段提供适当的靶向治疗，或仅在患有适合所述治疗的癌症的患者中作为补充方案。
5、导蛋白-1(netrin-1)在生物体的发育，特别是中枢神经系统的建立中发挥着重要作用。因此，它对连合神经元具有有吸引人的作用。多年来，导蛋白-1在神经发育中被描述为具有扩散等级的分泌分子。信号传导路径由受体转导，该受体称为结直肠癌缺失蛋白(dcc)、unc-5(uncoordinated-5)家族和再生蛋白(neoge
6、导蛋白-1也被证明在许多癌症类型中表达上调，例如乳腺癌、非小细胞肺癌(nsclc)、髓母细胞瘤。肿瘤细胞的这种过度表达被认为是充当可以阻止由dcc和unc-5家族依赖性受体活性诱导的细胞死亡的分子机制。这些受体充当肿瘤抑制基因，并在其配体缺失的情况下引发细胞凋亡。为了抵制这种保护机制，肿瘤细胞激活导蛋白-1表达，导致该蛋白过度表达，从而抑制细胞死亡，例如在化疗后。因此，重新激活这种分子机制成为肿瘤学的治疗目标。因此，开发出阻断导蛋白-1的治疗策略，更精确地抑制导蛋白-1与其癌细胞表面受体之间的相互作用。i-ii期临床试验开始评估名为np137(人源化单克隆抗体)并能够阻断unc5-b/导蛋白-1相互作用的人igg1。中期结果显示出作为单一药剂的临床活性令人鼓舞的迹象。因此，导蛋白-1阻断似乎对小部分患者有效，但缺乏使用已批准的简单伴随测试来预测患者益处，所有基于活组织检查的测试都会受到侵入性组织采集的误差和局限性影响。
7、j.wischhusen等人(theranostics 2018；8(18)：5126-5142)公开了在导蛋白-1-阳性乳腺肿瘤中导蛋白-1与内皮cd31共定位。导蛋白-1位于这些肿瘤的血管内皮上。超声分子成像(usmi)被提议作为乳腺癌中导蛋白-1干扰治疗的非侵入性伴随诊断。在内皮细胞表面检测到的导蛋白-1可以在很短的时间内(大约十分钟)成像，并且可以将隔离在构成血管的内皮细胞上的导蛋白-1可视化。肿瘤合并方面的结果非常低，图5a中的背景与掺入的比率非常低：32％～45％，即实际增加了1.4倍。
8、进行放射性成像和内部放射性治疗以靶向膜受体或表面分子。通常认为或多或少可扩散的分泌因子或配体通常不被选择用于这些技术。
9、j.wischhusen等人(下文)没有公开导蛋白-1隔离在癌细胞的细胞周围的细胞基质中，并且仅公开了导蛋白-1被隔离在构成血管的内皮细胞上，并不能使导蛋白-1检测达到作为稳健工具的标准，来检测并定位表达导蛋白-1的肿瘤。
10、导蛋白-1主要被认为是分泌蛋白，或隔离在血管内皮细胞表面的蛋白，并不是成像和/或靶向治疗的主要候选者。
技术实现思路
1、本文呈现的是出人意料的广泛证明，如导蛋白-1的肿瘤积累所揭示的，导蛋白-1以更粘的方式保留在癌细胞的细胞外围的细胞基质中。有趣的是，导蛋白-1是在胚胎阶段表达的蛋白质，其在成人、特别是在某些肿瘤中表达。再加上导蛋白-1保留在肿瘤位置的细胞外细胞基质(ecm)中，这使得导蛋白-1成为出人意料的成像和/或靶向治疗的非常特异性的靶点。在肿瘤细胞的细胞基质中导蛋白-1的隔离为具有长采集时间(例如从约24小时～约96小时)的成像方法开辟了道路，使得隔离在肿瘤本身的细胞外基质中的导蛋白-1能够可视化，从而对整个肿瘤进行真实而强力的成像，这与j.wischhusen等人中描述的usmi相反。例如，如在4t1细胞上获得的，使用例如spect的方法的背景掺入比可以很高，例如大约5.8x。同样出乎意料的是，本文显示了导蛋白-1在肿瘤形成过程中非常早期表达，从而允许人们在出现小病变之前或触诊(如乳房触诊)之前，非常早地检测、定位和/或靶向治疗表达导蛋白-1的肿瘤细胞。
2、因此，本专利技术的各方面涉及化合物本身，其可用于成像、诊断、尤其是伴随诊断、或用于靶向治疗。以包含抗导蛋白-1抗体或其抗原结合片段以及与所述抗体或片段结合的螯合部分的化合物为基础，其中，所述螯合部分为任选地与放射性同位素缔合。与其缔合的合适同位素可以决定该化合物在影像治疗和靶向治疗之间的用途。
3、详细描述
4、在第一方面，本专利技术涉及一种化合物，包含：
5、-抗导蛋白-1抗体或其抗原结合片段，以及
6、-与所述抗体或片段结合的螯合部分，
7、其中，所述螯合部分任选地与放射性同位素缔合。
8、通常，抗体或其片段和螯合部分是共价连接的。根据该实施方式，本专利技术化合物是缀合物。在实施方式中，螯合部分与抗体或其片段的氨基酸侧链结合，特别是赖氨酸的侧链残基结合。
9、通常，放射性同位素通过共价键与螯合部分结合。
10、本专利技术的化合物特别地有用，因为它们能够在体内与导蛋白-1特异性结合，从而能够通过抗体与癌细胞周围的细胞基质中的导蛋白-1结合来使所述癌症或其靶标能够成像。这对于识别癌症的定位和/或追踪癌症的生长或消退特别有利。值得注意的是，放射性标记的化合物通过不同的技术用于流场可视化，例如单光子发射计算机断层成像术(spect)和正电子发射断层成像术(pet)。放射性标记的化合物还可用于放射治疗，或可视化和治疗两者。
11、抗体
12、所述化合物优选包含单克隆抗体(mab)或其抗原结合片段，其中，所述mab或其片段与导蛋白-1特异性结合。mab可以是鼠、嵌合、人源化或全人单克隆抗体。该片段可以是基本上保持整个抗体结合导蛋白-1的能力的任何类型的mab片段，其可以是例如fab或f(ab')2。
13、有用的鼠、嵌合和人源化单克隆抗体的实例在us10,494,427中公开，其通过引用并入本文。该在先文献中公开的并且可以在本文中使用的具体实施方式是表1中列出的以下抗体。表1中第一个列出的本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种化合物，包含：
2.根据权利要求1所述的化合物，其中，所述抗体是单克隆抗体或其抗原结合片段，包含：
3.根据权利要求2所述的化合物，其中，所述抗体是单克隆抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体是单克隆抗体或其抗原结合片段，包含选自以下对的VH和VL序列对：SEQ IDNO：21和13、SEQ ID NO：14和8、SEQ ID NO：15和9、SEQ ID NO：16和10、SEQ ID NO：17和11、SEQ ID NO：18和11、SEQ ID NO：19和10、SEQ ID NO：20和11、SEQ ID NO：16和11、SEQ IDNO：19和12、SEQ ID NO：15和10。
4.根据权利要求2或3所述的化合物，其中，所述抗体还包含人IgG1恒定重链(CH)和/或人IgG1恒定轻链(CL)。
5.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中，所述螯合部分包括NODAGA、NODAGA-NHS、DOTA、DOTA-NHS、p-SCN-Bn-NOTA、p-SCN-Bn-PCTA、p-SCN-Bn-氧代-DO3A、去
6.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中，所述放射性同位素是68Ga、64Cu、89Zr、186Re、188Re、153Sm、111In、99mTc、123I、177Lu、90Y、131I、213Bi、212Bi、211At或225Ac。
7.一种用于在受试者中成像导蛋白-1的存在或定位的方法，包括：
8.根据权利要求7所述的方法，其中，步骤b)中的定位包括突出所述化合物在至少一种身体部分的存在或积累，所述身体部分例如器官或组织。
9.根据权利要求7至8中任一项所述的方法，其中，所述放射性同位素选自由68Ga、64Cu、89Zr、186Re、188Re、153Sm、111In、99mTc和123I所组成的组。
10.一种化合物，包含：
11.根据权利要求10所述的化合物的用途，其中，所述放射性同位素为177Lu、90Y、131I、213Bi、212Bi、211At或225Ac。
12.一种体内放射疗法治疗患者中表达导蛋白-1的癌症的方法，所述患者患有表达导蛋白-1的癌症，所述方法包括给药足量的根据权利要求1至6中任一项所述的化合物。
13.根据权利要求12所述的方法，其中，所述化合物包含选自由177Lu、90Y、131I、213Bi、212Bi、211At和225Ac所组成的组中的放射性同位素。
14.一种识别和治疗表达导蛋白-1的癌症患者的方法，包括：
15.根据权利要求14所述的方法，其中，步骤a)中给药的化合物是根据权利要求1至6中任一项所述的化合物，其中，选自由68Ga、64Cu、89Zr、186Re、188Re、153Sm、111In、99mTc和123I所组成的组。
16.根据权利要求14所述的方法，其中，步骤e)中治疗患者包括向所述患者给药有效量的根据权利要求1至6中任一项所述的化合物，其中，放射性同位素选自由177Lu、90Y、131I、213Bi、212Bi、211At和225Ac所组成的组。
17.根据权利要求14所述的方法，其中，步骤e)中治疗患者包括向所述患者给药有效量的根据权利要求1至4中任一项所述的抗导蛋白-1抗体或其抗原结合片段。
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种化合物，包含：
2.根据权利要求1所述的化合物，其中，所述抗体是单克隆抗体或其抗原结合片段，包含：
3.根据权利要求2所述的化合物，其中，所述抗体是单克隆抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体是单克隆抗体或其抗原结合片段，包含选自以下对的vh和vl序列对：seq idno：21和13、seq id no：14和8、seq id no：15和9、seq id no：16和10、seq id no：17和11、seq id no：18和11、seq id no：19和10、seq id no：20和11、seq id no：16和11、seq idno：19和12、seq id no：15和10。
4.根据权利要求2或3所述的化合物，其中，所述抗体还包含人igg1恒定重链(ch)和/或人igg1恒定轻链(cl)。
5.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中，所述螯合部分包括nodaga、nodaga-nhs、dota、dota-nhs、p-scn-bn-nota、p-scn-bn-pcta、p-scn-bn-氧代-do3a、去铁胺-p-scn、二亚乙基三胺五乙酸(dtpa)或1,4,8,11-四氮杂环十四烷-1,4,8,11-四乙酸(teta)。
6.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中，所述放射性同位素是68ga、64cu、89zr、186re、188re、153sm、111in、99mtc、123i、177lu、90y、131i、213bi、212bi、211at或225ac。
7.一种用于在受试者中成像导蛋白-1的存在或定位的方法，包括：
8.根据权利要求7所述的方法，其中，步骤b)中的定位包括突出所述化...
【专利技术属性】
技术研发人员：马蒂厄·里绍，珍妮弗·维施胡森，达维德·内维斯，帕特里克·梅伦，达维德·萨吕，邦雅曼·吉贝尔，达维德·克里扎，
申请(专利权)人：奈特里斯药物公司，
类型：发明
国别省市：
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