一种提高绵羊成熟卵母细胞玻璃化冷冻后发育能力的方法技术

本发明专利技术涉及“一种提高绵羊成熟卵母细胞玻璃化冷冻后发育能力的方法”，属于生物技术领域，包括绵羊成熟卵母细胞的显微注射受精和受精卵的激活步骤，本发明专利技术受精卵的激活采用直流脉冲－化学激活－直流脉冲的方式，实验证明玻璃化冷冻后的绵羊卵母细胞单精子注射后采用本发明专利技术的激活方法，其胚胎发育能力大大提高，与常规的体外受精方法相比，卵裂率和囊胚率分别提高到１３．７％和６．８％。同时，比较了不同处理后的胚胎的染色体倍性，结果发现，利用ＥＣＥ法处理后，正常倍性胚胎的比例（７１．５％）明显高于普通的化学激活方法（４５．４％），且与体外受精组没有明显差异。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种提高绵羊成熟卵母细胞玻璃化冷冻后发育能力的方法，包括绵羊成熟卵母细胞的显微注射受精和受精卵的激活步骤，其特征在于：所述受精卵的激活包括如下步骤：１．将显微注射后的绵羊成熟卵母细胞在２．４ｋｖ／ｃｍ，１０ｕｓ的直流脉冲下刺激１次；２．放入添加了５ｍＭｉｏｎｏｍｙｃｉｎ的ＳＯＦ培养液中５分钟；３．在ＳＯＦ培养液中３小时；４．移入添加了１．９ｍＭ６－ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｐｕｒｉｎｅ　的ＳＯＦ培养液中１．５小时；５．用２．４ｋｖ／ｃｍ，１０ｕｓ的直流脉冲再刺激１次。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张家新，
申请(专利权)人：张家新，
类型：发明
国别省市：15[中国|内蒙]