【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及医用材料，尤其涉及一种干细胞囊泡水凝胶技术。
技术介绍
1、创伤愈合是一个复杂的动态过程，微环境失衡与病理性组织再生会导致创面迁延不愈，甚至引发脓毒血症和多器官衰竭等严重的并发症，严重影响患者的正常生活。微环境活性氧(reactive oxygen species,ros)是创面炎症反应与氧化应激的中枢调节器，决定着创面的愈合进程。在创面感染期，炎症反应产生的活性氧可以抵御病原体入侵，维持创伤稳态。然而在创面修复期，活性氧过度积聚会引起机体局部氧化应激，直接加速病程发展和恶化。一个“完美”的创面治愈体系不仅要具备优异的组织活性氧调控性能，还应通过加速皮肤细胞增殖和再上皮化，调节胶原蛋白重塑等功能促进创面组织再生。
2、目前针对活性氧的调控疗法主要分为两种：一种是通过光动力等治疗手段产生大量的活性氧杀菌以促进感染性创面愈合(温海飞等.一应俱全的光治疗学：单组分aie点作为多模态治疗诊断剂，用于荧光/光声成像引导的协同癌症治疗[j].生物材料,2021)；另一种是通过利用黄芩素、水凝胶、二氧化铈等清除组织过量的活性氧(赵华、黄杰等.ros清除水凝胶可促进细菌感染的糖尿病伤口愈合[j].生物材料，2020)。然而在临床应用中组织环境微妙复杂，仅对创面愈合起单一作用的研究难以兼顾创面愈合的完整过程。因此，构建一种可程序化调控组织活性氧的材料满足创面愈合多个过程对活性氧水平的不同需求很关键，具有更广阔的临床应用前景。
3、此外，研究表明，干细胞含有大量生物活性物质(如dna、蛋白质和rna)，可通过旁
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种可程序性调控组织活性氧并促进组织再生的干细胞囊泡水凝胶及其制备方法与应用，以解决现有技术中创面易感染、难以愈合的问题。
2、为了达到上述目的本专利技术采用如下技术方案：
3、一种可程序性调控组织活性氧并促进组织再生的干细胞囊泡水凝胶，其为双层凝胶，包括活性氧响应型上层水凝胶gel 1和负载有含aie纳米粒子干细胞囊泡的下层水凝胶gel 2。
4、所述含aie纳米粒子干细胞囊泡的蛋白浓度范围为1～500μg/ml；是由人工干细胞囊泡包裹聚集诱导发光aie纳米粒子形成，其中aie纳米粒子的最大浓度不超过400μmol/l，该浓度为囊泡负载aie纳米粒子的最大极限，继续增加aie纳米粒子的浓度，会使aie纳米粒子大量附着在millipore聚碳酸脂膜，且易析出固体沉淀，最后影响含aie纳米粒子干细胞囊泡的制备。下层水凝胶gel 2通过透明质酸钠氢键固化形成，并负载含aie纳米粒子干细胞囊泡。
5、所述人工干细胞囊泡来源于脂肪干细胞、骨髓干细胞、人脐带间充质干细胞的一种或多种。
6、进一步地，所述aie纳米粒子中aie分子的结构式如式(i)所示：
7、
8、进一步地，所述活性氧响应型上层水凝胶gel 1是由含巯基的水溶性高分子化合物、含炔基的水溶性高分子化合物与含有氨基官能团的活性氧响应型分子化合物通过点击反应共价键交联制备获得。
9、本专利技术还提供一种可程序性调控组织活性氧并促进组织再生的干细胞囊泡水凝胶的制备方法，步骤包括：
10、s1.aie纳米粒子的制备：将dspe-peg溶液在搅拌条件下缓慢滴加在含aie分子的二甲基亚砜溶液中，搅拌后透析过夜，收集得到aie纳米粒子；
11、s2.aie@evs囊泡的制备：将干细胞裂解后获得细胞膜悬液，反复研磨细胞膜悬液，离心取上清液，进行脂质体挤出器往复挤压过筛，获得人工干细胞囊泡；
12、将aie纳米粒子和人工干细胞囊泡共孵育，进行脂质体挤出器往复挤压过筛，以实现人工干细胞囊泡对aie纳米粒子的包覆，获得含aie纳米粒子干细胞囊泡溶液，又名aie@evs囊泡溶液；
13、s3.aie@evs囊泡溶液与透明质酸钠粉末混合孵育，静置固化获得负载有aie@evs囊泡的下层水凝胶；
14、s4.制备含炔基的水溶性高分子化合物，将含巯基的水溶性高分子化合物、含炔基的水溶性高分子化合物与含有氨基官能团的活性氧响应型分子化合物混合后快速滴加在下层水凝胶上，静置固化，获得所述可程序性调控组织活性氧并促进创面再生的干细胞囊泡水凝胶。
15、优选地，所述s1.aie纳米粒子的制备详细过程包括：将6ml含6mg dspe-peg的溶液在搅拌条件下缓慢滴加在含2mgaie分子的300μl二甲基亚砜溶液中，搅拌30分钟后透析过夜，收集得到aie纳米粒子。
16、优选地，所述s2.aie@evs囊泡的详细制备过程包括：往干细胞悬液中加入低渗细胞裂解缓冲液，4℃过夜裂解后获得细胞膜悬液，反复研磨细胞膜悬液，3200g,4℃下离心5min，取上清液，依次使用孔径为800nm、400nm的millipore聚碳酸脂膜进行脂质体挤出器往复挤压过筛，获得直径约为300nm的人工干细胞囊泡；将aie纳米粒子和人工干细胞囊泡以质量比为2:1进行室温孵育30min，使用孔径为200nm的millipore聚碳酸脂膜进行脂质体挤出器往复挤压过筛，以实现人工干细胞囊泡对aie纳米粒子的包覆，纯化获得直径约为100-200nm的aie@evs囊泡。
17、优选地，所述s3的详细过程包括：蛋白浓度为1～500μg/ml的aie@evs囊泡溶液作为水凝胶前驱体溶液，将其与透明质酸钠粉末按照质量比为100：3-100:5的比例混合，37℃孵育30min，常温静置固化30min，利用透明质酸钠自身的羟基、羧基间形成氢键固化获得负载有aie@evs囊泡的下层水凝胶。条件简单，无需外加化学试剂，避免了额外的步骤，所形成的水凝胶可响应细菌产生的透明质酸酶，实现aie@evs囊泡的可控释放。
18、优选地，所述含巯基的水溶性化合物为如下所示结构中的一种：
19、
20、其中，n为大于等于1的整数；
21、所述含炔基的水溶性高分子化合物为如下所示结构中的一种：
22、
23、其中，n为大于等于1的整数；
24、含有氨基官能团的活性氧响应型分子化合物为如下所示结构中的一种：
25、
26、优选地，所述s4的详细过程包括：将含巯基的水溶性高分子化合物、含炔基的水溶性高分子化合物与含有氨基官能团的活性氧响应型分子化合物按摩尔比例为1:0.3:0.35本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种可程序性调控组织活性氧并促进组织再生的干细胞囊泡水凝胶，其特征在于：
2.根据权利要求1所述的一种可程序性调控组织活性氧并促进组织再生的干细胞囊泡水凝胶，其特征在于：
3.根据权利要求1所述的一种可程序性调控组织活性氧并促进组织再生的干细胞囊泡水凝胶，其特征在于：
4.一种如权利要求1-3任一所述的可程序性调控组织活性氧并促进组织再生的干细胞囊泡水凝胶的制备方法，其特征在于：
5.根据权利要求4所述的一种可程序性调控组织活性氧并促进组织再生的干细胞囊泡水凝胶的制备方法，其特征在于：
6.根据权利要求4所述的一种可程序性调控组织活性氧并促进组织再生的干细胞囊泡水凝胶的制备方法，其特征在于：
7.根据权利要求4所述的一种可程序性调控组织活性氧并促进组织再生的干细胞囊泡水凝胶的制备方法，其特征在于：
8.根据权利要求4所述的一种可程序性调控组织活性氧并促进组织再生的干细胞囊泡水凝胶的制备方法，其特征在于：
9.根据权利要求8所述的一种可程序性调控组织活性氧并促进组织再生的干细胞囊泡水
10.一种如权利要求1-3任一所述的可程序性调控组织活性氧并促进组织再生的干细胞囊泡水凝胶在制备创面修复再生材料中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种可程序性调控组织活性氧并促进组织再生的干细胞囊泡水凝胶，其特征在于：
2.根据权利要求1所述的一种可程序性调控组织活性氧并促进组织再生的干细胞囊泡水凝胶，其特征在于：
3.根据权利要求1所述的一种可程序性调控组织活性氧并促进组织再生的干细胞囊泡水凝胶，其特征在于：
4.一种如权利要求1-3任一所述的可程序性调控组织活性氧并促进组织再生的干细胞囊泡水凝胶的制备方法，其特征在于：
5.根据权利要求4所述的一种可程序性调控组织活性氧并促进组织再生的干细胞囊泡水凝胶的制备方法，其特征在于：
6.根据权利要求4所述的...
【专利技术属性】
技术研发人员：廖玉辉，赵美娇，陈旭，钟晓平，周思彤，谢启胡，郑举敦，
申请(专利权)人：南方医科大学皮肤病医院广东省皮肤病医院，广东省皮肤性病防治中心，中国麻风防治研究中心，
类型：发明
国别省市：
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