【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药和疾病检测领域，特别是一种梅毒诊断与疗效评估试剂盒。
技术介绍
1、梅毒是由梅毒螺旋体(tp)引起的一种慢性、全身性传播疾病(std)。它是世界上最普遍的性传播疾病之一。尽管盘尼西林对治疗梅毒有效，但近年来该病在全球的发病率持续上升。世界卫生组织(世卫组织)报告称，2016年全球15-49岁人群中有630万新发梅毒病例。根据欧洲疾病预防和控制中心(ecdc)的数据，自2010年以来，报告的梅毒病例稳步增加。在美国，自2009年以来，新发梅毒病例每年都在增加，2019年每10万人中有39.68例。在英国，英国公共卫生部(phe)报告称，每年确诊的传染性梅毒病例已从2010年的2648例增加到2019年的7982例。在中国，新发梅毒病例从1995年的11336例上升到2016年的438199例。因此，早期准确诊断梅毒对降低发病率至关重要。
2、目前，梅毒的实验室诊断主要依靠两种广泛使用的血清学检测:非梅毒螺旋体检测(ntt)和梅毒螺旋体检测(tt)。这些检查主要用于梅毒的诊断，但不能用于评价治疗效果。然而，最近的研究已经探索了密螺旋体抗体水平作为评估治疗反应的一种手段的动态。例如，一项研究发现，在先前治疗过的梅毒样本中，western blot检测的tp17和tp47抗体的反应强度相当弱，可能用于监测梅毒的治疗效果。然而，需要更多的研究来检查密螺旋体抗体水平变化与治疗效果之间的相关性。这可以通过对梅毒患者配对随访血清样本进行定量tt试验来完成。
3、目前，梅毒的实验室诊断主要依靠ntt和
4、总之，到目前为止，我们还没有完善的梅毒诊断方法。因此，有必要开发准确、高效、无干扰的检测方法来准确诊断梅毒。
技术实现思路
1、为解决现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种梅毒诊断与疗效评估试剂盒，使用荧光素酶免疫吸附法(lisa)来检测梅毒患者血清中针对tp15、tp17和tp47三种高免疫原性抗原的特异性igg，本专利技术的lisa-tp47会是一种很好的替代tppa诊断梅毒的方法，且能够实现疗效监控。
2、为了实现上述目标，本专利技术采用如下的技术方案：
3、一种梅毒诊断与疗效评估试剂盒，包括：克隆有tp0171、tp0435和tp0574基因序列和荧光基因的重组质粒，dna纯化试剂盒，hela细胞转染试剂，包被有蛋白g的elisa微孔板，洗涤缓冲液，封闭剂，兔或人血清，nluc抗原细胞粗提物，纳米荧光素酶测定试剂。
4、前述的一种梅毒诊断与疗效评估试剂盒，tp0171的序列如：
5、atggtgaaaagaggtggcgcgttcgcgctgtgtcttgcggtgttgcttggggcgtgttcatttagttctatcccgaatggcacgtaccgggcgacgtatcaggattttgatgagaatggttggaaggactttctcgaggttacttttgatggtggcaagatggtgcaggtggtttacgattatcagcataaagaagggcggtttaagtcccaggacgctgactaccatcgggtcatgtatgcatcctcgggcataggtcctgaaaaggccttcagagagctcgccgatgctttgcttgaaaagggtaatcccgagatggtggatgtggtcaccggtgcaactgtttcttcccagagtttcaggaggttgggtgctgcgcttctgcagagtgcgcggcgcggcgagaaggaagccattattagcagg seq id no.01，
6、tp043的序列如：
7、atgaaaggatctgtccgcgcgctgtgcgcgttccttggtgttggagcgctcggtagcgctttgtgtgtctcgtgcacaaccgtgtgtccgcacgccgggaaggccaaagcggaaaaggtagagtgcgcgttgaagggaggtatctttcggggtacgctacctgcggccgattgcccgggaatcgatacgactgtgacgttcaacgcggatggcactgcgcaaaaggtagagcttgcccttgagaagaagtcggcaccttctcctcttacgtatcgcggtacgtggatggtacgtgaagacggaattgtcgaactctcgcttgtgtcctcggagcaatcgaaggcaccgcacgagaaagagctgtacgagctgatagacagtaactccgttcgctacatgggcgctcccggcgcaggaaagccttcaaaggagatggcgccgttttacgtgctcaaaaaaacaaagaaa seq id no.02，
8、tp0574的序列如：
9、gtgaaagtgaaatacgcactactttctgccggagcgctgcagttgttggttgtaggctgtggctcgtctcatcatgagacgcactatggctatgcgacgctaagctatgcggactactgggccggggagttggggcagagtagggacgtgcttttggcgggtaatgccgaggcggaccgcgcgggggatctcgacgcaggcatgttcgatgcagtttctcgcgcaacccacgggcatggcgcgttccgtcagcaatttcagtacgcggttgaggtattgggcgaaaaggttctctcgaagcaggagaccgaagacagcaggggaagaaaaaagtgggagtacgagactgacccaagcgttactaagatggtgcgtgcctctgcgtcatttcaggatttgggagaggacggggagattaagtttgaagcagtcgagggtgcagtagcgttggcggatcgcgcgagttccttcatggttgacagcgaggaatacaagattacgaacgtaaaggttcacggtatgaagtttg本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种梅毒诊断与疗效评估试剂盒，其特征在于，包括：克隆有Tp0171、Tp0435和Tp0574基因序列和荧光基因的重组质粒。
2.根据权利要求1所述的一种梅毒诊断与疗效评估试剂盒，其特征在于，
3.根据权利要求1所述的一种梅毒诊断与疗效评估试剂盒，其特征在于，包括：克隆有Tp0171、Tp0435和Tp0574基因序列和荧光基因的重组质粒，DNA纯化试剂，Hela细胞转染试剂，包被有蛋白G的ELISA微孔板，洗涤缓冲液，封闭剂，纳米荧光素酶测定试剂。
4.根据权利要求2所述的一种梅毒诊断与疗效评估试剂盒，其特征在于，所述Tp0171、Tp0435和Tp0574基因序列具有EcoRI和XbaI切割位点。
5.根据权利要求1所述的一种梅毒诊断与疗效评估试剂盒，其特征在于，所述重组质粒为克隆有Tp0171、Tp0435和Tp0574基因序列和荧光基因的EcoRI-XbaI-cut pNLF1-N载体。
6.根据权利要求5所述的一种梅毒诊断与疗效评估试剂盒，其特征在于，所述荧光基因为Nluc荧光素酶基因。
7.根
8.根据权利要求1所述的一种梅毒诊断与疗效评估试剂盒，其特征在于，所述包被有蛋白G的ELISA微孔板采用的5μg/mL蛋白G，缓冲液为0.01M PBS。
9.根据权利要求1所述的一种梅毒诊断与疗效评估试剂盒，其特征在于，所述洗涤缓冲液为含有0.05％Tween 20的0.01M PBS。
10.根据权利要求1所述的一种梅毒诊断与疗效评估试剂盒，其特征在于，所述封闭剂为2-5％脱脂干乳。
11.根据权利要求1所述的一种梅毒诊断与疗效评估试剂盒，其特征在于，所述纳米荧光素酶测定试剂的加入量为：每孔加入50μL纳米荧光素酶测定试剂。
12.根据权利要求1所述的一种检测Tp15、Tp17和Tp47抗体水平的方法，其特征在于，包括如下步骤：
13.根据权利要求1所述的一种梅毒诊断与疗效评估试剂盒的用途，其特征在于，所述梅毒诊断与疗效评估试剂盒可用于诊断梅毒。
14.根据权利要求1所述的一种梅毒诊断与疗效评估试剂盒的用途，其特征在于，所述梅毒诊断与疗效评估试剂盒可用于监测疗效。
...【技术特征摘要】
1.一种梅毒诊断与疗效评估试剂盒，其特征在于，包括：克隆有tp0171、tp0435和tp0574基因序列和荧光基因的重组质粒。
2.根据权利要求1所述的一种梅毒诊断与疗效评估试剂盒，其特征在于，
3.根据权利要求1所述的一种梅毒诊断与疗效评估试剂盒，其特征在于，包括：克隆有tp0171、tp0435和tp0574基因序列和荧光基因的重组质粒，dna纯化试剂，hela细胞转染试剂，包被有蛋白g的elisa微孔板，洗涤缓冲液，封闭剂，纳米荧光素酶测定试剂。
4.根据权利要求2所述的一种梅毒诊断与疗效评估试剂盒，其特征在于，所述tp0171、tp0435和tp0574基因序列具有ecori和xbai切割位点。
5.根据权利要求1所述的一种梅毒诊断与疗效评估试剂盒，其特征在于，所述重组质粒为克隆有tp0171、tp0435和tp0574基因序列和荧光基因的ecori-xbai-cut pnlf1-n载体。
6.根据权利要求5所述的一种梅毒诊断与疗效评估试剂盒，其特征在于，所述荧光基因为nluc荧光素酶基因。
7.根据权利要求1所述的一种梅毒诊断与疗效评估试剂盒，其特征在于，所述重...
【专利技术属性】
技术研发人员：柯吴坚，熬彩玲，冷欣颖，朱芮，黄丽霞，吴嘉欣，黄南轩，
申请(专利权)人：南方医科大学皮肤病医院广东省皮肤病医院，广东省皮肤性病防治中心，中国麻风防治研究中心，
类型：发明
国别省市：
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