【技术实现步骤摘要】
本专利技术专利涉及传染病治疗和防控，具体为一种可靶向治疗猴痘并阻断猴痘病毒传播的多功能仿生纳米粒子及其制备方法和应用。
技术介绍
1、猴痘是一种由猴痘病毒引起的人畜共患疾病，最初于1958年在猴子身上发现。然而，目前尚无专门用于治疗猴痘的药物，临床治疗主要是基于支持性治疗，和一些抗病毒药物。抗天花病毒药物如特考韦瑞(tecovirimat，也称为tpoxx或st-246)被初步证明在猴痘治疗中具有潜在疗效。特考韦瑞是第一种用于治疗成人和体重3公斤以上儿童天花患者的抗病毒药物，被认为是首选治疗方法。然而，特考韦瑞的有效性尚未在随机或非随机临床试验中得到证实，同时药物的毒副作用也存在争议。因此，迫切需要开发针对猴痘的特异性治疗药物，制定有效的治疗、预防和阻断传播的策略，以控制猴痘的持续流行，保障人民生命健康。
2、猴痘病情主要导致局部病变，尤其是局部口腔和肛门-生殖器病变，而非广泛的播散性病变。这些病变通常表现为皮肤和黏膜中的溃疡和脓疱，含有大量具有复制能力的病毒颗粒，其病毒滴度明显高于其他组织，如呼吸道和精液样本等(106copies ml-1vs.104copies ml-1)。因此，近年来猴痘病毒的主要传播途径是亲密接触，包括直接接触患者感染的病变部位(特别是性接触)和接触受污染的衣物，经呼吸道飞沫途径传播较少。目前，阻断猴痘病毒传播的常规策略包括患者的隔离、患者使用的亚麻布和衣物的消毒、避免性接触或建议使用避孕套等，但这些策略的效果有限。尽管天花疫苗接种可以降低感染猴痘的风险，但由于天花疫苗的供应极其有限，难以实
3、专利技术专利内容
4、本专利技术针对猴痘现有治疗和防控存在的上述缺陷，首先提供一种用于猴痘靶向治疗并阻断病毒传播的多功能仿生纳米粒子，能够实现病毒的精准靶向并在病灶中长期保留，同时实现精准光动力-光热协同作用杀伤病毒，从而有效阻断猴痘病毒传播。本专利技术专利为实现上述目的，提供如下技术方案：
5、一种靶向治疗猴痘病毒并阻断其传播的仿生纳米粒子，其特征在于，所述纳米粒子为外膜包覆核心的结构，其外膜为被猴痘病毒预先激活的巨噬细胞的细胞膜，核心为吲哚菁绿、聚集诱导发光材料dpt、抗天花病毒药物特考韦瑞等药物(drug)。
6、优选的，所述核心为drug包封在聚乳酸－乙醇酸(plga)聚合物形成的纳米核，其直径约为60-100nm。
7、优选的，所述的一种靶向治疗猴痘病毒并阻断其传播的仿生纳米粒子的制备方法，包括以下步骤：
8、(1)将plga聚合物和drug分子溶解在四氢呋喃(thf)溶剂中。然后将thf混合液快速注入3-5倍体积的磷酸缓冲盐(pbs)溶液或生理盐水或水中，在通风柜中快速搅拌12小时使得thf溶剂完全挥发去除，最终得到包封了drug的纳米核心悬浮液；
9、(2)提取猴痘病毒，用感染复数为5-10的病毒与在t175培养瓶中培养至60％的密度的巨噬细胞系raw 264.7进行37℃共培养12～24h，使得巨噬细胞被病毒激活，从培养瓶中刮下细胞，经过离心、pbs洗涤3次操作后，将细胞重悬在低渗裂解缓冲液中，并装入缓冲匀浆器，研磨20-30次破坏细胞，得到悬液，将该悬液离心两次，以去除细胞碎片。然后，用超速离心机将上清液超速离心，收集预刺激巨噬细胞的细胞膜；
10、(3)将收集到的预刺激巨噬细胞膜与步骤(1)得到的drug的纳米核心悬浮液进行混合，然后使用水浴式超声仪将得到的混合物在冰水浴中进行超声5min后离心，从而将预刺激的巨噬细胞膜覆盖在drug核心上，形成pn-drug
11、优选的，所述的一种靶向治疗猴痘病毒并阻断其传播的仿生纳米粒子的制备方法中步骤(2)所述低渗裂解缓冲液成分是：75mm蔗糖、20mm tris-hcl(ph＝7.5)、2mm mgcl2、10mm kcl和20mm pmsf。
12、优选的，所述的一种靶向治疗猴痘病毒并阻断其传播的仿生纳米粒子的制备方法中步骤(2)中的悬液离心的条件第一次为3000g，时间10min和第二次为20000g，时间30min。
13、优选的，所述的一种靶向治疗猴痘病毒并阻断其传播的仿生纳米粒子的制备方法中步骤(2)超速离心机型号为le-80k，生产公司为美国beckman coulter公司，超速离心的条件为100000g，时间为2h。
14、优选的，所述的一种靶向治疗猴痘病毒并阻断其传播的仿生纳米粒子的制备方法中步骤(3)巨噬细胞膜蛋白与drug核的质量比为1：1。
15、优选的，所述的一种靶向治疗猴痘病毒并阻断其传播的仿生纳米粒子的制备方法中步骤(4)超声仪型号为fs30d，生产公司为美国thermo fisher scientific公司。超声条件为频率42khz，功率60w，离心机设置的离心条件为20000g，离心时间为30min。
16、优选的，所述的一种靶向治疗猴痘病毒并阻断其传播的仿生纳米粒子在制备猴痘治疗药物的应用，所述的应用是提供一种用于治疗猴痘的制剂，所述制剂包括上述的纳米粒子。该纳米粒子药物具备与猴痘病毒的结合功能，实现猴痘病灶的精确靶向，并且兼有对猴痘的治疗功能，以及阻断病毒传播的功能。
17、优选的，所述的一种靶向治疗猴痘病毒并阻断其传播的仿生纳米粒子在制备猴痘疫苗中的应用，所述的应用基于dpt光敏材料的光动力和光热特性，在808nm红外光照射下，能够有效的将光能转化成热能，进而裂解猴痘病毒，有效促进皮肤病灶愈合；同时，由于本专利技术联合红外光照射的治疗方案，可以有效地消除坏死组织和炎症细胞，恢复受损的表皮，所以可以阻断病毒传播至健康人群。
18、与现有技术相比，本专利技术专利的有益效果如下：
19、(1)本专利技术以plga负载吲哚菁绿、聚集诱导发光材料dpt、抗天花病毒药物特考韦瑞等药物，形成纳米粒子的drug核心，以独特的设计方案，提取痘苗病毒预刺激的巨噬细胞的细胞膜，用于包裹drug核心，合成pn-drug仿生纳米粒子，获得具有靶向猴痘病毒进行杀伤裂解能力的仿生纳米粒子。
20、(2)本专利技术的仿生纳米粒子中，聚集发光光敏剂dpt为一种结构对称的aie材料，具有聚集诱导发热的特性；相比于传统的光热剂，aie光热剂具有激发波长长、光热转换效率高、光热稳定性强等优点；更重要的是，dpt具有较强的ros产生效率，从而发挥优良的光动力特性，为生物成像以及疾病的诊断和治疗提供了更大的潜力。本专利技术的纳米粒子是基于细胞膜的仿生纳米颗粒(bnps)，几乎携带痘苗病毒预刺激巨噬细胞细胞膜的所有蛋白受体，可特异性识别猴痘病毒。所以本专利技术同时结合了aie和bnps的优势，可以精确靶向猴痘病毒并光热裂解，实现猴痘的有效靶向治疗。
技术实现思路
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1.一种靶向治疗猴痘病毒并阻断其传播的仿生纳米粒子，其特征在于，所述纳米粒子为外膜包覆核心的结构，其外膜为被猴痘病毒预先激活的巨噬细胞的细胞膜，核心为吲哚菁绿、聚集诱导发光材料DPT、抗天花病毒药物特考韦瑞等药物(Drug)。
2.根据权利要求1所述的用于猴痘靶向治疗的纳米粒子，其特征在于：所述核心为Drug包封在聚乳酸－乙醇酸(PLGA)聚合物形成的纳米核，其直径约为60-100nm。
3.权利要求2所述的一种靶向治疗猴痘病毒并阻断其传播的仿生纳米粒子的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
4.根据权利要求3所述的一种靶向治疗猴痘病毒并阻断其传播的仿生纳米粒子的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述低渗裂解缓冲液成分是：75mM蔗糖、20mM tris-HCl(pH＝7.5)、2mM MgCl2、10mM KCl和20mM PMSF。
5.根据权利要求3所述的一种靶向治疗猴痘病毒并阻断其传播的仿生纳米粒子的制备方法，其特征在于，步骤(2)中的悬液离心的条件第一次为3000g，时间10min和第二次为20000g，时间30min。p>
6.根据权利要求3所述的一种靶向治疗猴痘病毒并阻断其传播的仿生纳米粒子的制备方法，其特征在于，步骤(2)超速离心机型号为LE-80K，生产公司为美国Beckman Coulter公司，超速离心的条件为100000g，时间为2h。
7.根据权利要求3所述的一种靶向治疗猴痘病毒并阻断其传播的仿生纳米粒子的制备方法，其特征在于，步骤(3)巨噬细胞膜蛋白与Drug核的质量比为1：1。
8.根据权利要求1-2任一项所述的一种靶向治疗猴痘病毒并阻断其传播的仿生纳米粒子在制备猴痘治疗药物的应用。
9.根据权利要求1-2任一项所述的一种靶向治疗猴痘病毒并阻断其传播的仿生纳米粒子在制备猴痘疫苗中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种靶向治疗猴痘病毒并阻断其传播的仿生纳米粒子，其特征在于，所述纳米粒子为外膜包覆核心的结构，其外膜为被猴痘病毒预先激活的巨噬细胞的细胞膜，核心为吲哚菁绿、聚集诱导发光材料dpt、抗天花病毒药物特考韦瑞等药物(drug)。
2.根据权利要求1所述的用于猴痘靶向治疗的纳米粒子，其特征在于：所述核心为drug包封在聚乳酸－乙醇酸(plga)聚合物形成的纳米核，其直径约为60-100nm。
3.权利要求2所述的一种靶向治疗猴痘病毒并阻断其传播的仿生纳米粒子的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
4.根据权利要求3所述的一种靶向治疗猴痘病毒并阻断其传播的仿生纳米粒子的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述低渗裂解缓冲液成分是：75mm蔗糖、20mm tris-hcl(ph＝7.5)、2mm mgcl2、10mm kcl和20mm pmsf。
5.根据权利要求3所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：廖玉辉，李斌，王伟，沈晨光，赵露，吴云霞，李培然，
申请(专利权)人：南方医科大学皮肤病医院广东省皮肤病医院，广东省皮肤性病防治中心，中国麻风防治研究中心，
类型：发明
国别省市：
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