【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药，特别是指一种蛋白a亲和层析纯化抗体的方法。
技术介绍
1、金黄色葡萄球菌蛋白a(staphylococcal protein a，简称蛋白a)是细菌蛋白的一种，对抗体具有高亲和力，因此，常被用于检测和纯化抗体。蛋白a作为配体，可与不同物种或不同亲和力的抗体结合，其含有5个同源免疫球蛋白结合域，可以与抗体的fc段特异性结合，也可结合抗体重链可变区的cdr2与cdr3之间，对大部分igg都具有较高的亲和力。通常情况下，在以蛋白a作为配体的亲和层析介质上，一个蛋白a分子可以同时结合至少2个igg分子，其结合域可用来捕捉和结合igg。虽然，蛋白a与igg的亲和力强，但是其也较易与一些非目的蛋白结合，最终导致蛋白的纯度下降，在纯化抗体时，如何更大程度地提高抗体纯度，是本领域的研发热点之一。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种蛋白a亲和层析纯化抗体的方法，以解决现有技术中的蛋白a亲和层析纯化抗体的方法易于与非目的蛋白结合、抗体纯度较低的问题。
2、为解决上述技术问题，本专利技术的技术方案如下：
3、一种蛋白a亲和层析纯化抗体的方法，包括如下步骤：
4、(1)取平衡缓冲液，对蛋白a亲和层析柱进行平衡；
5、(2)取待纯化抗体溶液，向步骤(1)中得到的平衡后的蛋白a亲和层析柱进行上样；
6、(3)取洗涤液，对步骤(2)中的蛋白a亲和层析柱进行洗涤；
7、(4)取洗脱液，对步骤(3)中的蛋白a
8、优选地，步骤(1)中，所述平衡缓冲液包括：浓度为10-20mmol/l的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠，浓度为50-100mmol/l的氯化钠；所述平衡缓冲液的ph值为7.0-7.4。
9、优选地，步骤(1)中，所述平衡缓冲液的用量为3-5个柱体积，流速为200-250cm/h。
10、优选地，步骤(2)中，所述上样的流速为200-250cm/h，层析柱载量小于或者等于25mg/ml填料。
11、优选地，步骤(2)中，所述待纯化抗体溶液中加入硫酸皮肤素。
12、优选地，步骤(2)中，所述硫酸皮肤素在所述待纯化抗体溶液中的质量浓度为1-3％。
13、优选地，步骤(3)中，所述洗涤液包括：10-20mmol/l的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠，浓度为100-200mmol/l的氯化钠，质量浓度为0.05-0.1％的triton x-100，质量浓度为5-10％的乙醇，质量浓度为0.8-1.5％的葡萄糖；所述洗涤液的ph值为7.0-7.4。
14、优选地，步骤(3)中，所述洗涤液的用量为3-8个柱体积，流速为200-250cm/h。
15、优选地，步骤(4)中，所述洗脱液包括：10-20mmol/l的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠，浓度为100-200mmol/l的氯化钠；所述洗脱液的ph值为2.5-4.0。
16、优选地，步骤(4)中，所述洗脱液的流速为200-250cm/h。
17、本专利技术的上述方案至少包括以下有益效果：
18、(1)本专利技术的蛋白a亲和层析纯化抗体的方法，包括如下步骤：取平衡缓冲液，对蛋白a亲和层析柱进行平衡；取待纯化抗体溶液，向得到的平衡后的蛋白a亲和层析柱进行上样；取洗涤液，对蛋白a亲和层析柱进行洗涤；取洗脱液，对蛋白a亲和层析柱进行洗脱，收集流出液得到纯化后的抗体。本专利技术所述的蛋白a亲和层析纯化抗体的方法，纯化后的抗体纯度较高。
19、(2)本专利技术的蛋白a亲和层析纯化抗体的方法，所述待纯化抗体溶液中加入硫酸皮肤素。其中，硫酸皮肤素是由d-葡糖醛酸和n-乙酰氨基半乳糖以α-1,4-糖苷键连接而成的重复二糖单位组成的多糖，并在n-乙酰氨基半乳糖的c-4位或c-6位羟基上发生硫酸酯化。首先，由于硫酸皮肤素的结构具有连续性和稳定性，能保护抗体在纯化过程中的结构和活性，减少抗体的聚集。同时，由于其含有硫酸基团，整个cs分子呈现很强的负电性，易与蛋白质共价结合组成蛋白聚糖，与待纯化抗体通过静电相互作用形成强力结合，从而促使抗体与其它杂质分离。尤其是，所述硫酸皮肤素在所述待纯化抗体溶液中的质量浓度为1-3％时，纯化效果最好。
20、(3)本专利技术的蛋白a亲和层析纯化抗体的方法，所述洗涤液中含有磷酸氢二钠-磷酸二氢钠、氯化钠、triton x-100、乙醇、葡萄糖。其中，triton x-100(聚乙二醇辛基苯基)，其作为洗涤剂，可以去除非特异性吸附的杂蛋白。所述乙醇的加入可以用来切断非特异性吸附之间的氢键和疏水作用力，所述葡萄糖的加入可以协同乙醇降低非特异性吸附，共同促进洗掉非目的蛋白质，以便在后续的洗脱步骤中，减少非目的蛋白质的洗脱，提高目标抗体的纯度。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种蛋白A亲和层析纯化抗体的方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的蛋白A亲和层析纯化抗体的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述平衡缓冲液包括：浓度为10-20mmol/L的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠，浓度为50-100mmol/L的氯化钠；所述平衡缓冲液的pH值为7.0-7.4。
3.根据权利要求1所述的蛋白A亲和层析纯化抗体的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述平衡缓冲液的用量为3-5个柱体积，流速为200-250cm/h。
4.根据权利要求1所述的蛋白A亲和层析纯化抗体的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述上样的流速为200-250cm/h，层析柱载量小于或者等于25mg/ml填料。
5.根据权利要求1所述的蛋白A亲和层析纯化抗体的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述待纯化抗体溶液中加入硫酸皮肤素。
6.根据权利要求5所述的蛋白A亲和层析纯化抗体的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述硫酸皮肤素在所述待纯化抗体溶液中的质量浓度为1-3％。
7.根据权利要求1所述的蛋白A亲和层析纯化抗体的
8.根据权利要求1所述的蛋白A亲和层析纯化抗体的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述洗涤液的用量为3-8个柱体积，流速为200-250cm/h。
9.根据权利要求1所述的蛋白A亲和层析纯化抗体的方法，其特征在于，步骤(4)中，所述洗脱液包括：10-20mmol/L的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠，浓度为100-200mmol/L的氯化钠；所述洗脱液的pH值为2.5-4.0。
10.根据权利要求1所述的蛋白A亲和层析纯化抗体的方法，其特征在于，步骤(4)中，所述洗脱液的流速为200-250cm/h。
...【技术特征摘要】
1.一种蛋白a亲和层析纯化抗体的方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的蛋白a亲和层析纯化抗体的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述平衡缓冲液包括：浓度为10-20mmol/l的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠，浓度为50-100mmol/l的氯化钠；所述平衡缓冲液的ph值为7.0-7.4。
3.根据权利要求1所述的蛋白a亲和层析纯化抗体的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述平衡缓冲液的用量为3-5个柱体积，流速为200-250cm/h。
4.根据权利要求1所述的蛋白a亲和层析纯化抗体的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述上样的流速为200-250cm/h，层析柱载量小于或者等于25mg/ml填料。
5.根据权利要求1所述的蛋白a亲和层析纯化抗体的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述待纯化抗体溶液中加入硫酸皮肤素。
6.根据权利要求5所述的蛋白a亲和层析纯化抗体的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述硫酸皮肤素在所述待纯化抗体溶液中...
【专利技术属性】
技术研发人员：吴学星，高飞，秦佳，王佳琛，周延慧，
申请(专利权)人：武汉博进生物新材料有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。