【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及层析分离技术，特别是指一种蛋白质g配基层析介质的保护方法。
技术介绍
1、配基是亲和层析的核心物质，在分离中起特异性吸附待分离物的作用。蛋白质g(protein g)是一种来自链状球菌的细胞壁蛋白，由三个白蛋白结合域和免疫球蛋白结合域构成，可用来捕捉和结合igg。蛋白质g作为亲和配基被偶联到琼脂糖等基质上，在分离抗体等物质时，可以对抗体的igg的fc段特异性结合，从而分离出目标抗体。蛋白质g具有很强的亲和力，能够结合大多数哺乳动物的igg。但是，蛋白质g配基与基质的结合力较弱，容易在洗涤或洗脱过程中脱落。另外，由于蛋白质g配基的层析介质无法耐受苛刻的洗脱条件，使用后容易出现洗脱不彻底的问题，造成重复使用时蛋白载量下降较快。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供蛋白质g配基层析介质的保护方法，以解决现有技术中的蛋白质g配基层析介质的配基易脱落、重复使用时蛋白载量下降快的问题。
2、为解决上述技术问题，本专利技术的技术方案如下：
3、一种蛋白质g配基层析介质的保护方法，包括如下步骤：
4、(1)采用第一缓冲液通过蛋白质g配基层析介质；
5、(2)采用第二缓冲液通过蛋白质g配基层析介质，并使所述第二缓冲液在所述蛋白质g配基层析介质中静态保持10-20min；其中，所述第二缓冲液中含有2,2-二羟甲基丁醇、甘氨酸、硫酸钠；
6、(3)采用再生缓冲液通过所述蛋白质g配基层析介质。
7、优选地，步骤(1
8、优选地，步骤(1)中，所述第一缓冲液包括：浓度为20-50mmol/l的tris-hcl缓冲液，浓度为100-150mmol/l的氯化钠；所述第一缓冲液的ph值为7.0-7.4。
9、优选地，步骤(2)中，所述第二缓冲液为5-10倍体积的所述蛋白质g配基层析介质。
10、优选地，步骤(2)中，所述第二缓冲液包括：浓度为100-120mmol/l的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，浓度为100-150mmol/l的氯化钠，浓度为10-20mmol/l的2,2-二羟甲基丁醇，浓度为20-30mmol/l的甘氨酸，浓度为30-50mmol/l的硫酸钠；所述第二缓冲液的ph值为3.8-4.2。
11、优选地，步骤(3)中，所述再生缓冲液为5-10倍体积的所述蛋白质g配基层析介质。
12、优选地，步骤(3)中，所述再生缓冲液包括：浓度为100-120mmol/l的tris-hcl缓冲液，浓度为100-150mmol/l的氯化钠；所述再生缓冲液的ph值为8.0-9.0。
13、优选地，蛋白质g配基层析介质为以蛋白质g为配基的琼脂糖凝胶亲和层析介质。
14、优选地，所述的蛋白质g配基层析介质的保护方法，还包括步骤(4)：在采用再生缓冲液通过所述蛋白质g配基层析介质后，再用所述第一缓冲液通过蛋白质g配基层析介质。
15、优选地，步骤(4)中，所述第一缓冲液为3-5倍体积的所述蛋白质g配基层析介质。
16、本专利技术的上述方案至少包括以下有益效果：
17、本专利技术的蛋白质g配基层析介质的保护方法，包括如下步骤：采用第一缓冲液通过蛋白质g配基层析介质；采用第二缓冲液通过蛋白质g配基层析介质，并使所述第二缓冲液在所述蛋白质g配基层析介质中静态保持10-20min；其中，所述第二缓冲液中含有2,2-二羟甲基丁醇、甘氨酸、硫酸钠；采用再生缓冲液通过所述蛋白质g配基层析介质。本专利技术所述的蛋白质g配基层析介质的保护方法，可以稳固蛋白质g配基层析介质的配基，清洗、再生层析介质，使层析介质在重复使用时功能稳定，延长使用寿命。其中，所述第一缓冲液起到平衡的作用，使蛋白质g配基层析介质与缓冲液进行混合，让层析介质充分吸水并膨胀，达到平衡状态。所述第二缓冲液则呈酸性，可以将非特异性吸附的蛋白质从层析介质上洗掉，以切断非特异性吸附的物质与配基的结合。更为重要的是，所述第二缓冲液中含有所述2,2-二羟甲基丁醇，其亲水性好，可以占据层析介质孔隙和通道，并与层析介质中的配基形成交联结构，从而减少配基的脱落风险。所述甘氨酸作为弱竞争性洗脱剂，可以与蛋白质g配基上的被吸附蛋白竞争，通过改变层蛋白质g配基和被吸附蛋白之间的相互作用，降低被吸附蛋白的结合力，从而使洗脱不彻底的被吸附蛋白更容易从层析介质上洗脱。所述硫酸钠作为离子化合物，可以屏蔽蛋白间的离子相互作用，帮助蛋白溶解。
18、通过2,2-二羟甲基丁醇、甘氨酸、硫酸钠三者的相互配合，增强介质的稳定性和固定力，使得蛋白质g配基不易脱落。同时，使洗脱不彻底的被吸附蛋白更容易从层析介质上洗脱，并更容易溶解，进而被冲洗掉。由此在层析介质重复使用时保持良好的性能，延长层析介质的使用寿命。
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1.一种蛋白质G配基层析介质的保护方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的蛋白质G配基层析介质的保护方法，其特征在于，步骤(1)中，所述第一缓冲液为5-10倍体积的所述蛋白质G配基层析介质。
3.根据权利要求1所述的蛋白质G配基层析介质的保护方法，其特征在于，步骤(1)中，所述第一缓冲液包括：浓度为20-50mmol/L的Tris-HCl缓冲液，浓度为100-150mmol/L的氯化钠；所述第一缓冲液的pH值为7.0-7.4。
4.根据权利要求1所述的蛋白质G配基层析介质的保护方法，其特征在于，步骤(2)中，所述第二缓冲液为5-10倍体积的所述蛋白质G配基层析介质。
5.根据权利要求1所述的蛋白质G配基层析介质的保护方法，其特征在于，步骤(2)中，所述第二缓冲液包括：浓度为100-120mmol/L的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，浓度为100-150mmol/L的氯化钠，浓度为10-20mmol/L的2,2-二羟甲基丁醇，浓度为20-30mmol/L的甘氨酸，浓度为30-50mmol/L的硫酸钠；所述第二缓冲液的pH值为
6.根据权利要求1所述的蛋白质G配基层析介质的保护方法，其特征在于，步骤(3)中，所述再生缓冲液为5-10倍体积的所述蛋白质G配基层析介质。
7.根据权利要求1所述的蛋白质G配基层析介质的保护方法，其特征在于，步骤(3)中，所述再生缓冲液包括：浓度为100-120mmol/L的Tris-HCl缓冲液，浓度为100-150mmol/L的氯化钠；所述再生缓冲液的pH值为8.0-9.0。
8.根据权利要求1所述的蛋白质G配基层析介质的保护方法，其特征在于，蛋白质G配基层析介质为以蛋白质G为配基的琼脂糖凝胶亲和层析介质。
9.根据权利要求1所述的蛋白质G配基层析介质的保护方法，其特征在于，还包括步骤(4)：在采用再生缓冲液通过所述蛋白质G配基层析介质后，再用所述第一缓冲液通过蛋白质G配基层析介质。
10.根据权利要求9所述的蛋白质G配基层析介质的保护方法，其特征在于，步骤(4)中，所述第一缓冲液为3-5倍体积的所述蛋白质G配基层析介质。
...【技术特征摘要】
1.一种蛋白质g配基层析介质的保护方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的蛋白质g配基层析介质的保护方法，其特征在于，步骤(1)中，所述第一缓冲液为5-10倍体积的所述蛋白质g配基层析介质。
3.根据权利要求1所述的蛋白质g配基层析介质的保护方法，其特征在于，步骤(1)中，所述第一缓冲液包括：浓度为20-50mmol/l的tris-hcl缓冲液，浓度为100-150mmol/l的氯化钠；所述第一缓冲液的ph值为7.0-7.4。
4.根据权利要求1所述的蛋白质g配基层析介质的保护方法，其特征在于，步骤(2)中，所述第二缓冲液为5-10倍体积的所述蛋白质g配基层析介质。
5.根据权利要求1所述的蛋白质g配基层析介质的保护方法，其特征在于，步骤(2)中，所述第二缓冲液包括：浓度为100-120mmol/l的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，浓度为100-150mmol/l的氯化钠，浓度为10-20mmol/l的2,2-二羟甲基丁醇，浓度为20-30mmol/l的甘氨酸，浓度为30-50mmol...
【专利技术属性】
技术研发人员：高飞，吴学星，秦佳，朱至放，王祉羲，
申请(专利权)人：武汉博进生物新材料有限公司，
类型：发明
国别省市：
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