一种甲酸脱氢酶突变体及其在制备还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸中的应用制造技术

本发明专利技术涉及酶催化技术领域，尤其是一种甲酸脱氢酶突变体及其在制备还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸中的应用，该甲酸脱氢酶突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示，可用于制备还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸。与野生型甲酸脱氢酶相比，本发明专利技术的甲酸脱氢酶突变体的酶活更高，并且在特定的反应条件下(45℃，pH8.5)具有更快的反应速度和更高的底物转化率，更少的底物浪费，有利于产物的高效分离。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及酶催化，具体领域为一种甲酸脱氢酶突变体及其在制备还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸中的应用。

技术介绍

1、nadh的再生循环方法是利用nad还原为nadh来实现的。目前将nad还原为nadh的主要酶促方法有醇脱氢酶、甲酸脱氢酶、葡萄糖脱氢酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶等，醇脱氢酶和乙醇。甲酸铵工艺是将甲酸、碱金属和甲酸脱氢酶(formate dehydrogenase，fdh)一起孵育并去除大部分形成的碳酸盐，酶促制备还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸或其磷酸盐，并用到了至少一种碱金属甲酸盐，最终消除形成的碱金属碳酸盐。醇脱氢酶方案需要使用过量的乙醇，并不断去除产生的挥发性乙醛。最大弊端是nadh转化不完全，且在反应中产生有毒的乙醛。相比较而言，甲酸脱氢酶反应体系中只产生一种副产物－二氧化碳，对酶的活性无不利影响，对工业制造有更大的吸引力。

2、现有的甲酸铵工艺还存在一些自身的缺陷，甲酸脱氢酶来源范围较小，主要集中于不耐热微生物，导致目前主流使用的fdh热稳定性较差，最适反应温度多在30℃左右，而在45℃～60℃之间迅速失活。p>

3、因此，本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种甲酸脱氢酶突变体，其特征在于：其氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示。

2.权利要求1所述甲酸脱氢酶突变体在制备还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸中的应用。

3.根据权利要求2所述甲酸脱氢酶突变体在制备还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸中的应用，其特征在于：分别称取甲酸铵、NAD至烧瓶中，加纯水，在45℃水浴中搅拌溶解并使用氢氧化钠调节pH至8.5，加入甲酸脱氢酶突变体的粗酶液进行反应，并用氢氧化钠维持pH在8.5。

4.根据权利要求3所述甲酸脱氢酶突变体在制备还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸中的应用，其特征在于：所述粗酶液的制备方法包括以下步骤：

5...

【技术特征摘要】

1.一种甲酸脱氢酶突变体，其特征在于：其氨基酸序列如seq id no：3所示。

2.权利要求1所述甲酸脱氢酶突变体在制备还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸中的应用。

3.根据权利要求2所述甲酸脱氢酶突变体在制备还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸中的应用，其特征在于：分别称取甲酸铵、nad至烧瓶中，加纯水，在45℃水浴中搅拌溶解并使用氢氧化钠调节ph至8.5，加入甲酸脱氢酶突变体的粗酶液进行反应，并用氢氧化钠维持ph在...

【专利技术属性】
技术研发人员：丁雪峰，钱明，李佳松，
申请(专利权)人：南京诺云生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：