一种快速精准检测稻瘟病菌的引物和探针组合及其应用制造技术

本发明专利技术属于稻瘟病菌检测技术领域，提供了一种快速精准检测稻瘟病菌的引物和探针组合，所述引物包括正向引物和反向引物，同时，还提供了包含引物和探针组合的RPA‑LFD试剂盒以及利用该引物和探针组合或RPA‑LFD试剂盒对稻瘟病菌进行检测的方法。与常规PCR相比，本发明专利技术的检测速度快，不必经过变性、退火、延伸三个步骤，只要有稳定的热源RPA反应就可以发生，摆脱了对热循环仪器的依赖，可以真正实现便携式的现场快速的稻瘟病菌检测。此外，本发明专利技术提供的检测引物和探针试剂盒，对稻瘟病菌的检测灵敏度可以达到10pg/μL，且具有特异性，对于确定防治适期、有效防治稻瘟病害具有十分重要的意义。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于稻瘟病菌检测，具体涉及一种快速精准检测稻瘟病菌的引物探针组及其应用。

技术介绍

1、水稻是人类重要的粮食作物之一，耕种与食用的历史都相当悠久。全世界有一半的人口食用稻，主要在亚洲、欧洲南部和热带美洲及非洲部分地区。中国是水稻的原产地之一，中国南方地区农田多以水田为主，粮食作物以种植水稻为主。

2、稻瘟病是由稻瘟病原菌引起的、发生在水稻上的一种病害，流行年份，一般减产10-20％，重的达40-50％，局部田块甚至颗粒无收。稻瘟病在水稻整个生育期中都可发生，危害秧苗、叶片、穗、节等，分别称为苗瘟、叶瘟、穗瘟和节瘟。苗瘟多由种子带菌引起，致秧苗变褐枯死；叶瘟指田期稻株叶片发病，一般在水稻分蘖盛期盛发，病菌侵染叶片初期产生水溃状褐点，感病品种很快形成大的圆形或椭圆形褐斑，严重时病斑密布，叶片枯焦，全株中毒萎缩，根腐枯死；穗瘟发生于穗颈、穗轴、枝梗和谷粒上，病斑初期暗褐色，逐渐向上下扩展，形成水渍状褪绿病斑，最后变黑褐色，也有的后期呈枯白色，病斑长可达3-4厘米，穗颈瘟严重影响产量，始穗期发病的常造成白穗，全不结实；患节瘟水稻病节初为黑褐色本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.检测稻瘟病菌的引物和探针组合，其特征在于，所述引物包括正向引物和反向引物，所述正向引物为RPA-MGG_15975F，其核苷酸序列为：

2.根据权利要求1所述的引物和探针组合，其特征在于，所述RPA-MGG_15975R 5’端添加有生物素Biotin，所述探针第30位碱基C与第31位碱基G之间添加有THF修饰，5’端添加有FAM，3’端添加有C3-spacer。

3.一种快速精准检测稻瘟病菌的RPA-LFD试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括至少1次用量的权利要求2所述的引物和探针组合。

4.根据权利要求3所述的RPA-LFD试剂盒，其特征在于，所...

【技术特征摘要】

1.检测稻瘟病菌的引物和探针组合，其特征在于，所述引物包括正向引物和反向引物，所述正向引物为rpa-mgg_15975f，其核苷酸序列为：

2.根据权利要求1所述的引物和探针组合，其特征在于，所述rpa-mgg_15975r 5’端添加有生物素biotin，所述探针第30位碱基c与第31位碱基g之间添加有thf修饰，5’端添加有fam，3’端添加有c3-spacer。

3.一种快速精准检测稻瘟病菌的rpa-lfd试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括至少1次用量的权利要求2所述的引物和探针组合。

4.根据权利要求3所述的rpa-lfd试剂盒，其特征在于，所述rpa-lfd试剂盒中还包括标准阳性dna、缓冲液、无菌双蒸水、反应驱动液、产物稀释液和侧流层析试剂。

5.一种快速精准检测稻瘟病菌的rpa-lfd方法，其特征在于，包括以下步骤：

6.根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：杜艳，刘永锋，齐中强，
申请(专利权)人：江苏省农业科学院，
类型：发明
国别省市：