【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及胆汁酸生物转化，特别是一种通过生物酶法转化别鹅去氧胆酸的工艺方法，是采用生物酶将别鹅去氧胆酸转化成3-酮-4，5烯键-胆烷酸这一鹅去氧胆酸中间体的工艺方法。
技术介绍
1、鹅去氧胆酸是一种从动物胆汁中提取的胆烷酸有机物，主要成分是3α,7α-二羟基-5β-胆烷酸，化学式为c24h40o4，无色针状结晶，几乎不溶于水，易溶于乙醇、冰乙酸、微溶于氯仿。鹅去氧胆酸经由鸡胆汁提取、加工制成，具有降血脂、祛痰、镇咳作用，能抑制胆酸的形成及溶解脂肪，降低血中胆固醇和甘油三脂，适用于ⅰa或ⅰb型高血脂症、动脉粥样硬化症。
2、别鹅去氧胆酸是鹅去氧胆酸的同分异构体，成分为3α，7α－二羟基－5α－胆烷酸，是鹅去氧胆酸生产过程中的一种杂质，二者的主要区别是5号位氢键构象的不同；目前通过化学法或生物酶法将别鹅去氧胆酸转化成鹅去氧胆酸的方法未见报道，别鹅去氧胆酸利用价值未被发现，不能使别鹅去氧胆酸得到有效利用。
3、鹅去氧胆酸的主要结构特征是：5位的β氢，3位的α羟基和7位的α羟基，其中5位的β氢键是区别于别鹅去氧胆酸 (3α，7α－二羟基－5α－胆烷酸) 的重要特征。若能在4、5位形成双键，就是合成鹅去氧胆酸的重要中间体3-酮-7α-羟基-4，5-烯键胆烷酸的关键，然而通过查阅相关文献，我们并未获取对5位的氢键进行构象转变的方法，研究人员致力于寻找更加快捷简便，稳定高效并且环境友好的甾体化合物的生产方式，如生物转化法，是目前亟需解决的问题。
技术实现思路
1、针对
2、为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
3、一种通过生物酶法转化别鹅去氧胆酸的工艺方法，其包括，制备转化酶，进行酶转化反应；将酶转化反应的反应液调ph后先煮沸，再冷却，调节ph后离心；将离心后的反应液先酸化，再过滤洗涤；将洗涤后的反应液浓缩干燥粉碎；再利用制备液相分离技术分离及干燥，得淡黄色粉末的产品。
4、作为本专利技术的一种优选方案，步骤1中所述制备转化酶，进行酶转化反应，包括：制备菌种培养基、接菌培养成菌种液、制备发酵培养基、接菌和发酵培养、放罐称量离心和酶收集保存，在常温，弱碱条件下溶剂中转化反应完全。
5、作为本专利技术的一种优选方案，所述制备菌种培养基，包括：液体培养基400ml，其制备过程包括用250ml锥形三角瓶每瓶装100ml，棉塞封口，外加报纸包扎,121℃加热,15分钟灭菌后用于培养菌种液；固体培养基为在液体培养基的基础上添加2%琼脂，其制备过程包括121℃加热,15分钟灭菌后冷却至50℃左右，无菌操作分装于90mm塑料培养皿中各15ml,冷却后作为检测菌种液染菌情况用；所述液体培养基的配比为：牛肉膏0.5%、蛋白胨1%、氯化钠0.5%、乳糖0.5%、磷酸氢二钾0.1%和水，ph7.0左右。
6、作为本专利技术的一种优选方案，所述接菌培养成菌种液，包括：将冻存的菌种液放于室温25℃以上洁净区，菌种液融化即可。在超净工作台上，无菌操作接菌于制备菌种培养基中，温度控制35-37℃，搅拌160r/min,避光培养18-22小时，无菌取样检测合格，存放于4℃冰箱中备用，所述菌种为细菌nrba3140。
7、作为本专利技术的一种优选方案，所述制备发酵培养基，包括：将液体培养基
8、配制于发酵罐中，加热121℃,30分钟灭菌后冷却，用于培养菌体，得到液体培养基12l。
9、作为本专利技术的一种优选方案，所述接菌和发酵培养，包括：通过控制系统自动控制和监测，其中初始条件为：温度37℃，ph值7.0,溶氧100%，转速200r/min，火焰封口无菌接入菌种液。开始发酵，控制发酵条件：温度35-37℃，ph值7.0-7.2,溶氧30-100%，转速200-600r/min。在发酵的过程中取样测菌浓，得到合符要求的发酵液；所述放罐称量离心包括将达到要求菌浓的发酵液放出，等量称量后离心取底部沉淀菌体即得酶泥；所述酶收集保存包括将酶泥用食品级内包材密封保存于带盖塑料桶内，置于-20℃冰箱或冻库内。
10、作为本专利技术的一种优选方案，所述酶转化反应, 包括控制水温至30℃，将别鹅去氧胆酸按1%的比例加入水中，用20%氢氧化钠水溶液调节ph至10左右完全溶解，加入别鹅去氧胆酸重量20%的上述酶泥，在30℃、160r/m的摇床上反应，间隔24小时取样检测液相色谱，至底物完全转化。
11、作为本专利技术的一种优选方案，步骤2中所述将酶转化反应的反应液先煮沸，再冷却，调节ph后离心，包括：将酶转化反应完全的反应液煮沸后冷却，用20%氢氧化钠水溶液调节ph至10左右,再等量称取后，用冷冻离心机在10℃、10000r/m的转速下离心10分钟，停止后收集上清液。
12、作为本专利技术的一种优选方案，步骤3中所述将离心后的反应液先酸化，再过滤洗涤，包括：在煮沸冷却离心的基础上，加入1mol/l盐酸酸化后，中性滤纸过滤后，去离子水洗涤。
13、作为本专利技术的一种优选方案，步骤4中所述将洗涤后的酸化物干燥粉碎,包括将洗涤后的酸化物，放于70℃烘箱中干燥至水分小于5%后粉碎成粉末；步骤5中所述制备液相分离及干燥，得淡黄色粉末的产品包括制备液相获取高纯度转化产物有机相，再低温50-60℃干燥后即得转化产物，外检核磁分析确认结构为3-酮-7α-羟基-4，5-烯键胆烷酸。
14、与现有技术相比，本专利技术有益效果为：
15、通过选用已有菌株自行发酵生产转化酶，采用生物酶法转化，能将别鹅去氧胆酸在温合条件下进行转化反应，并为进一步生产鹅去氧胆酸提供了可能。此工艺生产3-酮-4，5烯键-烯键胆烷酸这一鹅去氧胆酸中间体，生产工艺简单、耗时短、条件温和、能耗低，对环境友好，容易实现。
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1.一种通过生物酶法转化别鹅去氧胆酸的工艺方法，其特征在于，包括如下工艺步骤：
2.如权利要求1所述的通过生物酶法转化别鹅去氧胆酸的工艺方法，其特征在于，步骤1中所述制备转化酶，进行酶转化反应，包括：
3.如权利要求2所述的通过生物酶法转化别鹅去氧胆酸的工艺方法，其特征在于，所述制备菌种培养基，包括：
4.如权利要求2所述的通过生物酶法转化别鹅去氧胆酸的工艺方法，其特征在于，所述接菌培养成菌种液，包括：
5.如权利要求2所述的通过生物酶法转化别鹅去氧胆酸的工艺方法，其特征在于，所述制备发酵培养基，包括：
6.如权利要求2所述的通过生物酶法转化别鹅去氧胆酸的工艺方法，其特征在于，所述接菌和发酵培养，包括系统自动控制和监测，其中初始条件为：温度37℃，PH值7.0,溶氧100%，转速200R/Min，火焰封口无菌接入菌种液；开始发酵后，控制发酵条件：温度35-37℃，PH值7.0-7.2,溶氧30-100%，转速200-600R/Min；在发酵的过程中取样测菌浓，得到达标的发酵液；
7.如权利要求2所述的通过生物
8.如权利要求1所述的通过生物酶法转化别鹅去氧胆酸的工艺方法，其特征在于，步骤2中所述将酶转化反应的反应液先煮沸，再冷却，调节PH后离心，包括：
9.如权利要求1所述的通过生物酶法转化别鹅去氧胆酸的工艺方法，其特征在于，步骤3中所述将离心后的反应液先酸化，再过滤洗涤，包括：
10.如权利要求1所述的通过生物酶法转化别鹅去氧胆酸的工艺方法，其特征在于，步骤4中所述将洗涤后的酸化物干燥粉碎，包括将洗涤后的酸化物，放于70℃烘箱中干燥至水分小于5%后粉碎成粉末；步骤5中所述制备液相分离及干燥，得淡黄色粉末的产品，包括制备液相获取高纯度转化产物有机相，再低温50-60℃干燥后即得转化产物，外检核磁分析确认结构为3-酮-7α-羟基-4，5-烯键胆烷酸。
...【技术特征摘要】
1.一种通过生物酶法转化别鹅去氧胆酸的工艺方法，其特征在于，包括如下工艺步骤：
2.如权利要求1所述的通过生物酶法转化别鹅去氧胆酸的工艺方法，其特征在于，步骤1中所述制备转化酶，进行酶转化反应，包括：
3.如权利要求2所述的通过生物酶法转化别鹅去氧胆酸的工艺方法，其特征在于，所述制备菌种培养基，包括：
4.如权利要求2所述的通过生物酶法转化别鹅去氧胆酸的工艺方法，其特征在于，所述接菌培养成菌种液，包括：
5.如权利要求2所述的通过生物酶法转化别鹅去氧胆酸的工艺方法，其特征在于，所述制备发酵培养基，包括：
6.如权利要求2所述的通过生物酶法转化别鹅去氧胆酸的工艺方法，其特征在于，所述接菌和发酵培养，包括系统自动控制和监测，其中初始条件为：温度37℃，ph值7.0,溶氧100%，转速200r/min，火焰封口无菌接入菌种液；开始发酵后，控制发酵条件：温度35-37℃，ph值7.0-7.2,溶氧30-100%，转速200-600r/min；在发酵的过程中取样测菌浓，得到达标的发酵液；
7.如权利要求2所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：邓家国，李跃忠，李国军，曾辉，曾飞，唐雪文，李刚，肖国兴，崔武成，邱世龙，
申请(专利权)人：常德云港生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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