【技术实现步骤摘要】
本申请属于生物，具体涉及一种感受态细胞培养基及制备感受态细胞的方法。
技术介绍
1、感受态细胞是分子生物试验中进行dna转化不可或缺的、使用最频繁的一个媒介，通过感受态细胞可以进行质粒构建、dna克隆、蓝白斑筛选、文库构建、蛋白表达、转基因等，因此感受态细胞在分子生物学领域占据着重要的角色，它的使用量及使用频率都很高。
2、自1970年mandel和hige发现大肠杆菌细胞经cacl2溶液处理时能够吸收λ噬菌体dna，得出感受态细胞这一概念后，就出现了多种感受态细胞的制备方法，如常见的cacl2法、tss法、甘油聚乙二醇法、电转法、超声波转化法等。
3、例如，cacl2法为将快速生长的大肠杆菌置于经低温（0℃）预处理的低渗氯化钙溶液中，便会造成细胞膨胀，同时ca2+会使细胞膜磷脂双分子层形成液晶结构，促使细胞外膜与内膜间隙中的部分核酸酶解离开来，离开所在区域，诱导细胞成为感受态细胞，细胞壁通透性发生变化，极易与外源dna相粘附并在细胞表面形成抗脱氧核糖核酸酶的羟基－磷酸钙复合物，再联合其它的二价金属离子（如mn、co）、dmso或还原剂等物质处理细菌。此时，将该体系转移到42℃下做短暂的热刺激（90s），细胞膜的液晶结构会发生剧烈扰动，并随机出现许多间隙，外源dna就可能被细胞吸收，再进入细胞的外源dna分子，通过复制、表达，实现遗传信息的转移，使受体细胞出现新的遗传性状。将转化后的细胞在选择性培养基上培养，筛选出带有外源dna分子的阳性克隆。
4、虽然这些方法都有各自的优缺点，但是他们都有一
5、综上，传统技术制备感受态细胞存在工艺复杂，感受态细胞转化效率低的问题。
技术实现思路
1、基于此，本申请一实施例提供一种感受态细胞培养基及制备感受态细胞的方法以提升感受态的转化效率。
2、本申请一方面提供一种感受态细胞的培养基，所述培养基包括以下组分：5g/l~10g/l酵母粉、3g/l~5g/l蛋白胨、3g/l~5g/l葡萄糖、5g/l~10g/l硫酸铵、0.5g/l~1g/lnacl、0.1g/l~0.5g/l mgso4、0.5g/l~1g/l cacl2 、5g/l~10g/l cuso4。
3、在其中一个实施例中，所述培养基包括以下组分：6g/l~8g/l酵母粉、3g/l~4g/l蛋白胨、3g/l~4g/l葡萄糖、6g/l~8g/l硫酸铵、0.8g/l~1g/l nacl、0.2g/l~0.4g/l mgso4、0.6g/l~0.8g/l cacl2、6g/l~8g/l cuso4。
4、本申请另一方面提供一种制备感受态细胞的方法，包括用感受态细胞培养基对菌株进行培养，得菌液，使用所述菌液制备感受态细胞，所述感受态细胞培养基为组合型培养基或现配型培养基，且所述培养基满足所述的感受态细胞的培养基所定义。
5、在其中一个实施例中，所述感受态细胞包括克隆感受态细胞和表达感受态细胞及农杆菌感受态细胞中的一种或两种。
6、在其中一个实施例中，还包括以下步骤：
7、于切向流过滤装置中收集培养后的所述菌液，第一次通入缓冲液进行重悬，收集沉淀，得第一重悬菌液，将所述第一重悬菌液再置于切向流过滤装置中，第二次通入缓冲液进行重悬，得第二重悬菌液。
8、在其中一个实施例中，所述缓冲液包括以下组分：
9、0.5m~1.0m cacl2、0.1m~0.5m mncl2、0.1m~0.2m mgcl2、1m~2m ch3cook、2m~3m甘油、5mm~10mm mgso4、8mm~20mm、ph为6.4~6.6的hepes。
10、在其中一个实施例中，第一次通入缓冲液，所述缓冲液与所述菌液的体积比为(1~2.5):1。
11、第二次通入缓冲液，所述缓冲液与所述第一重悬菌液的体积比为(0.04~0.1):1。
12、在其中一个实施例中，切向流过滤装置中收集培养后的菌液，进料端流速为0.5mm/min~3mm/min。
13、第一次通入缓冲液，进料端流速为1 mm/min ~5 mm/min，回流端流速为0.2mm/min~1 mm/min。
14、第二次通入缓冲液，进料端流速为0.5 mm/min ~3 mm/min，回流端流速为0.2mm/min ~1 mm/min。
15、在其中一个实施例中，得第一重悬菌液后还包括第一次冰浴，得第二重悬菌液后还包括第二次冰浴。
16、可选地，第一次冰浴的时间为30min~60min；第二次冰浴的时间为5min~30min。
17、在其中一个实施例中，制备感受态细胞前还包括将所述第二重悬菌液进行过滤的步骤。
18、在其中一个实施例中，过滤采用的滤膜材质为陶瓷膜或中空纤维滤膜。
19、在其中一个实施例中，滤膜的孔径为0.22μm~0.45μm。
20、在其中一个实施例中，切向流过滤装置的跨膜压力值为0.1mpa~0.2mpa。
21、本申请还提供所述的制备感受态细胞的方法制备得到的感受态细胞。
22、本申请提供的感受态细胞的培养基包括5g/l~10g/l酵母粉、3g/l~5g/l蛋白胨、3g/l~5g/l葡萄糖、5g/l~10g/l硫酸铵、0.5g/l~1g/l nacl、0.1g/l~0.5g/l mgso4、0.5g/l~1g/l cacl2、5g/l~10g/l cuso4，通过酵母粉、蛋白胨、硫酸铵搭配其他组分相配合，形成特定配方的培养基，采用本申请的培养基制备感受态细胞的过程中，能够有效提升感受态细胞的转化效率，同时，还能使感受态细胞能够在-70℃及以下条件下稳定保存7~8个月。
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1.一种感受态细胞的培养基，其特征在于，所述培养基包括以下组分：5g/L~10g/L酵母粉、3g/L~5g/L蛋白胨、3g/L~5g/L葡萄糖、5g/L~10g/L硫酸铵、0.5g/L~1g/L NaCl、0.1g/L~0.5g/L MgSO4、0.5g/L~1g/L CaCl2、5g/L~10g/L CuSO4。
2.根据权利要求1所述的感受态细胞的培养基，其特征在于，所述培养基包括以下组分：6g/L~8g/L酵母粉、3g/L~4g/L蛋白胨、3g/L~4g/L葡萄糖、6g/L~8g/L硫酸铵、0.8g/L~1g/L NaCl、0.2g/L~0.4g/L MgSO4、0.6g/L~0.8g/L CaCl2、6g/L~8g/L CuSO4。
3.一种制备感受态细胞的方法，其特征在于，包括用感受态细胞培养基对菌株进行培养，得菌液；
4.根据权利要求3所述的制备感受态细胞的方法，其特征在于，所述感受态细胞包括克隆感受态细胞和表达感受态细胞及农杆菌感受态细胞中的一种或两种。
5.根据权利要求3~4任一项所述的制备感受态细胞的方法，其特征在
6.根据权利要求5所述的制备感受态细胞的方法，其特征在于，所述缓冲液包括以下组分：
7.根据权利要求5所述的制备感受态细胞的方法，其特征在于，
8.根据权利要求5所述的制备感受态细胞的方法，其特征在于，
9.根据权利要求5所述的制备感受态细胞的方法，其特征在于，制备感受态细胞前还包括将所述第二重悬菌液进行过滤的步骤；
10.权利要求3~9任一项所述的制备感受态细胞的方法制备得到的感受态细胞。
...【技术特征摘要】
1.一种感受态细胞的培养基，其特征在于，所述培养基包括以下组分：5g/l~10g/l酵母粉、3g/l~5g/l蛋白胨、3g/l~5g/l葡萄糖、5g/l~10g/l硫酸铵、0.5g/l~1g/l nacl、0.1g/l~0.5g/l mgso4、0.5g/l~1g/l cacl2、5g/l~10g/l cuso4。
2.根据权利要求1所述的感受态细胞的培养基，其特征在于，所述培养基包括以下组分：6g/l~8g/l酵母粉、3g/l~4g/l蛋白胨、3g/l~4g/l葡萄糖、6g/l~8g/l硫酸铵、0.8g/l~1g/l nacl、0.2g/l~0.4g/l mgso4、0.6g/l~0.8g/l cacl2、6g/l~8g/l cuso4。
3.一种制备感受态细胞的方法，其特征在于，包括用感受态细胞培养...
【专利技术属性】
技术研发人员：马石金，王媛媛，宋辉，曹文刚，
申请(专利权)人：湖北擎科生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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