【技术实现步骤摘要】
本申请涉及分子生物学，具体而言，涉及一种钾离子微球、质粒提取试剂和应用。
技术介绍
1、质粒是存在于细菌等生物中的可独立复制的dna分子，可与细菌共生，并可随宿主的分裂而传给子代细胞，其在基因工程中具有广泛的应用，如用于构建表达载体，可实现目的基因转移、蛋白表达和疫苗制备等。
2、为了获得大量高纯度的质粒，传统方法采用以下方式，例如碱裂解法、煮沸法、cscl-eb密度梯度平衡离心法等进行质粒提取。目前采用较多的方法是碱裂解法，碱裂解法操作简单，质粒提取效率高，而且涉及到的试剂成本较低。但碱裂解法涉及多次离心，其中分离裂解杂质的离心时间较长，延长了整个方法的处理周期。
3、如何缩短碱裂解法的处理周期是优化质粒提取流程的难点。
技术实现思路
1、为了解决上述问题，本申请的第一目的在于提供一种钾离子微球，包括微球核，微球核表面修饰有不溶于水的钾离子层，微球核的密度为2.2～2.66g/cm3。
2、本申请创造性地选择在密度为2.2～2.66g/cm3微球表面修饰不溶于水的钾离子层，能够使钾离子微球和菌体裂解液在离心作用下快速分离，同时，微球表面的不溶于水的钾离子层可实现吸附大量的细胞裂解杂质，从而在缩短质粒提取时间的同时提高质粒纯化效果。
3、在其中一个实施方式中，钾离子微球满足以下特征(1)～(3)中的至少一个：
4、(1)微球核的粒径为0.5μm～2μm；
5、(2)微球核表面修饰有聚合物层，聚合物层表面结合有不
6、(3)微球核的组成成分为二氧化硅，钾离子微球的制备方法包括：
7、通过聚合接枝法在二氧化硅微球表面修饰聚合物层，制备聚合物层修饰的二氧化硅微球；
8、将聚合物层修饰的二氧化硅微球和可溶性钾盐混合在二氧化硅微球表面形成不溶于水的钾离子层，以制备钾离子微球。
9、本申请的第二目的在于提供一种钾离子微球的制备方法，制备方法包括：
10、在微球表面修饰不溶于水的钾离子层以制备钾离子微球，微球的密度为2.2～2.66g/cm3。
11、在其中一个实施方式中，在微球表面修饰不溶于水的钾离子层以制备钾离子微球具体包括：
12、通过聚合接枝法在二氧化硅微球表面修饰聚合物层修饰聚合物层，制备聚合物层修饰的二氧化硅微球；
13、将聚合物层修饰的二氧化硅微球和可溶性钾盐混合在二氧化硅微球表面形成不溶于水的钾离子层，以制备钾离子微球；
14、可选地，通过聚合接枝法在二氧化硅微球表面制备聚合物层修饰的二氧化硅微球具体包括：
15、将硅烷偶联剂修饰的二氧化硅微球和钾离子结合单体、聚合物单体、交联剂和引发剂混合，通过聚合反应制备聚合物层修饰的微球；
16、可选地，二氧化硅微球的粒径为0.5μm～2μm；
17、可选地，钾离子结合单体包括烷基磺酸盐；
18、可选地，钾离子结合单体包括2-丙烯酰胺基十六烷磺酸铵和2-丙烯酰胺基十六烷磺酸中的至少一种；
19、可选地，聚合物单体包括苯乙烯、甲基丙烯酸甲酯和甲基丙烯酸丁酯中的至少一种；
20、可选地，交联剂包括二乙烯苯和二甲基丙烯酸乙二醇酯中的至少一种；
21、可选地，引发剂包括过硫酸钾和过硫酸铵中的至少一种；
22、可选地，可溶性钾盐包括乙酸钾、氯化钾、硫酸钾、磷酸钾、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾中的至少一种，且不包括硝酸钾、碳酸钾或碳酸氢钾。
23、本申请的第三目的在于提供上述钾离子微球在制备质粒提取试剂中的用途。
24、在其中一个实施方式中，质粒提取试剂包括杂质助沉剂，杂质助沉剂包括钾离子微球；
25、可选地，杂质助沉剂还包括不含有游离钾离子的缓冲试剂；
26、可选地，缓冲试剂的ph为5～6；
27、可选地，缓冲试剂含有乙酸盐、乙酸和水且不含有游离钾离子；
28、可选地，乙酸盐包括乙酸钠和乙酸铵中的至少一种且不包括钾盐；
29、可选地，钾离子微球保存于缓冲试剂中；
30、可选地，杂质助沉剂中钾离子微球的浓度不低于5％；
31、可选地，质粒提取试剂还包括不含有游离钾离子的裂解试剂；
32、可选地，裂解试剂含有强碱、可溶性烷基硫酸盐和水且不含有游离的钾离子；
33、可选地，质粒提取试剂还包括不含有游离钾离子的分散试剂；
34、可选地，分散试剂含有tris-hcl、edta、葡萄糖和水且不含有游离钾离子。
35、本申请的第四目的在于提供一种质粒提取试剂，包括上述钾离子微球。
36、在其中一个实施方式中，质粒提取试剂包括杂质助沉剂，杂质助沉剂包括钾离子微球；
37、可选地，杂质助沉剂还包括不含有游离钾离子的缓冲试剂；
38、可选地，缓冲试剂的ph为5～6；
39、可选地，缓冲试剂含有乙酸盐、乙酸和水且不含有游离钾离子；
40、可选地，乙酸盐包括乙酸钠和乙酸铵中的至少一种且不包括乙酸钾；
41、可选地，钾离子微球保存于缓冲试剂中；
42、可选地，杂质助沉剂中钾离子微球的浓度不低于5％；
43、可选地，裂解试剂含有强碱、可溶性烷基硫酸盐和水且不含有游离钾离子；
44、可选地，可溶性烷基硫酸盐包括十二烷基硫酸钠和十二烷基磺酸钠中的至少一种且不包括可溶性烷基硫酸钾盐；
45、可选地，质粒提取试剂还包括不含有游离钾离子的分散试剂；
46、可选地，分散试剂含有tris-hcl、edta、葡萄糖和水且不含有游离钾离子。
47、本申请的第五目的在于提供一种质粒提取方法，提取方法包括：
48、将细胞裂解产物和上述钾离子微球混合，细胞裂解产物包括质粒和细胞裂解杂质；
49、对细胞裂解产物进行离心处理，使钾离子微球吸附并沉淀细胞裂解杂质，得到离心上清液中的质粒。
50、在其中一个实施方式中，对细胞裂解产物进行离心处理之前，提取方法还包括：
51、将悬浮于分散试剂中含有质粒的细胞与裂解试剂混合，以释放细胞裂解产物，分散试剂和裂解试剂不含有游离钾离子；及/或
52、将细胞裂解产物和缓冲试剂混合以调节细胞裂解产物的ph，缓冲试剂不含有游离钾离子；
53、可选地，细胞包括细菌；
54、可选地，裂解试剂含有强碱、可溶性烷基硫酸盐和水且不含有游离钾离子；
55、可选地，可溶性烷基硫酸盐包括十二烷基硫酸钠和十二烷基磺酸钠中的至少一种且不包括可溶性烷基硫酸钾盐；
56、可选地，质粒提取试剂还包括不含有游离钾离子的分散试剂；
57、可选地，分散试剂含有tris-hcl、edt本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种钾离子微球，其特征在于，包括微球核，所述微球核表面修饰有不溶于水的钾离子层，所述微球核的密度为2.2～2.66g/cm3。
2.根据权利要求1所述的钾离子微球，其特征在于，所述钾离子微球满足以下特征(1)～(3)中的至少一个：
3.一种钾离子微球的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，在微球表面修饰不溶于水的钾离子层以制备钾离子微球具体包括：
5.根据权利要求1或2所述的钾离子微球在制备质粒提取试剂中的用途。
6.根据权利要求5所述的用途，其特征在于，所述质粒提取试剂包括杂质助沉剂，所述杂质助沉剂包括所述钾离子微球；
7.一种质粒提取试剂，其特征在于，包括权利要求1或2所述的钾离子微球。
8.根据权利要求7所述的质粒提取试剂，其特征在于，所述质粒提取试剂包括杂质助沉剂，所述杂质助沉剂包括所述钾离子微球；
9.一种质粒提取方法，其特征在于，所述提取方法包括：
10.根据权利要求9所述的质粒提取方法，其特征在于，对细胞裂
...【技术特征摘要】
1.一种钾离子微球，其特征在于，包括微球核，所述微球核表面修饰有不溶于水的钾离子层，所述微球核的密度为2.2～2.66g/cm3。
2.根据权利要求1所述的钾离子微球，其特征在于，所述钾离子微球满足以下特征(1)～(3)中的至少一个：
3.一种钾离子微球的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，在微球表面修饰不溶于水的钾离子层以制备钾离子微球具体包括：
5.根据权利要求1或2所述的钾离子微球在制备质粒提取试剂中的用途。<...
【专利技术属性】
技术研发人员：肖晓文，喻春函，曹文刚，宋辉，周俊豪，
申请(专利权)人：湖北擎科生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。