一种华丽龙胆VIGS体系的构建方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种华丽龙胆VIGS体系的构建方法及其应用，涉及植物基因工程技术领域，本发明专利技术基于烟草脆裂病毒(TRV)的重组沉默载体，利用真空渗透处理方法成功创建了适合华丽龙胆的VIGS体系，以F3′5′H建的沉默载体，成功实现了华丽龙胆F3′5′H基因的沉默，有效降低了F3′5′H表达水平，导致华丽龙胆花瓣蓝色变浅，表明基于TRV的TRV2‑GsF3′5′H沉默载体成功构建了华丽龙胆VIGS体系，该体系的构建是研究华丽龙胆呈色基因功能的关键。以此通过F3′5′H保守域构建TRV2‑F3′5′H载体，利用农杆菌介导法侵染华丽龙胆盛花期植株，比较分析不同农杆菌侵染浓度、真空渗透法不同压力对TRV诱导的F3′5′H基因沉默的影响，为华丽龙胆花冠呈色关键基因的功能研究奠定基础。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及植物基因工程，尤其涉及一种华丽龙胆vigs体系的构建方法及其应用。

技术介绍

1、病毒诱导的基因沉默(virus induced gene silencing,vigs)是一种转录后基因沉默现象，可引起内源mrna序列特异性降解，相应表型发生变异，从而可以通过植物表型或生理指标上的变化反应该基因功能。该技术利用携带植物功能基因的cdna病毒，诱导植物产生基因沉默，进而导致表型变化。相对于转基因等方法，vigs技术具有简单、高效、周期短、能沉默基因家族、无需转基因植株以及通量高等特点。这种方法可以对不同遗传背景的植物进行基因功能比较，为功能基因组和特定基因功能的研究提供了一种有效的手段。此外，该技术甚至可以用于研究一些突变后可能致死的基因功能。因此，vigs技术在植物生长发育、抗病虫和代谢调控等方面的功能基因研究中得到了广泛应用。

2、华丽龙胆是龙胆科龙胆属多年生草本植物，具有较高的药用价值和观赏价值，主要分布在中国西南部，其根、花可作为药材，具有泻肺清热的功效，可治疗邪热壅肺之咳嗽、气喘、咳痰不爽等多种病症；其次，作为一种珍贵的野本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种沉默华丽龙胆F3′5′H基因的特异性核苷酸片段，其特征在于，序列如SEQ IDNO.1所示。

2.一种华丽龙胆F3′5′H基因的VIGS体系的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

3.如权利要求2所述的华丽龙胆F3′5′H基因的VIGS体系的构建方法，其特征在于，步骤(2)中所述TRV1农杆菌菌液、TRV2农杆菌菌液、TRV2-GsF3′5′H目的基因特异性片段农杆菌菌液的OD600＝1，TRV1农杆菌菌液分别与TRV2农杆菌菌液和TRV2-GsF3′5′H农杆菌菌液按体积比1:1混合为侵染液。

4.如权利要求2所述的华丽龙胆F3′5′H基因的...

【技术特征摘要】

1.一种沉默华丽龙胆f3′5′h基因的特异性核苷酸片段，其特征在于，序列如seq idno.1所示。

2.一种华丽龙胆f3′5′h基因的vigs体系的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

3.如权利要求2所述的华丽龙胆f3′5′h基因的vigs体系的构建方法，其特征在于，步骤(2)中所述trv1农杆菌菌液、trv2农杆菌菌液、trv2-gsf3′5′h目的基因特异性片段农杆菌菌液的od600＝1，trv1农杆菌菌液分别与trv2农杆菌菌液和trv2-gsf3′5′h农杆菌菌液按体积比1:1混合为侵染液。

4.如权利要求2所述的华丽龙胆f3′5′h基因的vigs体系的构建方法，...

【专利技术属性】
技术研发人员：金雪花，黄莎莎，孟晗，李嘉伟，
申请(专利权)人：昆明理工大学，
类型：发明
国别省市：