本发明专利技术属于生物医药与生物检测技术领域，具体为一种人乳头瘤（ＨＰＶ）５８型致癌性Ｅ７蛋白的抗原表位（Ｂｃｅｌｌｅｐｉｔｏｐｅ）最小基序肽及其用途。本发明专利技术提供了８个可作为抗原单独或组合用于特异检测ＨＰＶ５８型病毒感染患者血清的含最小基序的表位肽（包括可与截断ＧＳＴ１８８等载体蛋白表达的８肽序列），以及用作研制同时诱导体液免疫的治疗性ＨＰＶ５８多表位肽疫苗的特异最小基序肽氨基酸序列。这些ＨＰＶ５８型Ｅ７抗原表位最小基序肽和短肽的氨基酸序列如ＳＥＱ?ＩＤ?Ｎｏ．１～ＳＥＱ?ＩＤ?Ｎｏ．１６所示。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药与生物检测
，具体涉及与妇女宫颈癌发生密切相关 的高危型人乳头瘤病毒(HPV) 58型E7致癌蛋白的全部线性B细胞表位(B cell epitope, BCE,或称抗原决定簇)及其最小基序肽，以及这些表位基序肽的应用。
技术介绍
人乳头状瘤病毒(human papillomavirus, HPV)是可感染女性生殖道等上皮组织 的一组病毒总称。已清楚超过100种以上的HPV病毒都编码6个E1、E2、E4 E7早期蛋白 禾口2个Ll禾口L2后其月蛋白(Stanley MA. Human papillomavirus vaccines. Rev Med Virol, 16: 139-149，2006)，其中持续感染可导致妇女子宫颈癌等高危型HPV (如HPV16和HPV18 等)编码的E7蛋白已被证明具有强致癌性。因此，高危型HPV的E7蛋白是目前研制宫颈癌 免疫治疗的重要靴点之一(Preville X，et al. Cancer Res, 65: 641-649，2005)。HPV58也是紧随16和18型之后的高危型HPV病毒之一(Lungu 0，et al. Obstet Gynecol, 47: 337-342，1995)。最近的研究资料表明HPV58型在我国江西、上海、河北、 北京、香港和台湾等地区等子宫颈癌患者中的检出阳性率也相当高(Lin QQ, et al. Int J Cancer, 75: 484-485， 1998; Huang S, et al. Int J Cancer, 70: 408-411， 1997; Cai HB, et al. Oncol, 76: 157—161，2009; Zhao R, et al. Br J Cancer, 101: 1635-1640， 2009; Lai HC, et al. Int J Cancer, 84: 553-557， 1999; Chan PK, et al. J Med Virol, 59: 232-238， 1999; Bao YP, et al. Int J STD AIDS, 19: 106-111， 2008)，有的地区检出率高于HPV18型，甚至与HPV16的相当(李洁等.中华实验和临床病 毒学杂志，10: 50-55, 1996;刘宝印等.中华实验和临床病毒学杂志，10: 118-121， 1996)。很显然，靶蛋白上线性抗原表位(BCE)的扫描作图定位是研制特异肽疫苗和特异 检测肽抗原的基础。但是，以往的E6和E7表位研究都主要集中于HPV16和HPV18(Dillner J, et al. Int J Cancer, 45: 529-535， 1990; Bleul C, et al. J Clin Microbiol, 29: 1579-1588， 1991; Gao L, et al. J Gen Virol, 75: 157-164， 1994)，而 HPV58 型E7蛋白线性表位鉴定一直未有开展。因此，基于上述HPV58型在我国妇女中的高流行性和这一病毒型表位鉴定的缺 失，以及为了研制具我国自主知识产权的HPV治疗性嵌合肽(组合细胞毒性T细胞表位和 BCEs)疫苗和可特异检测HPV58型病毒的诊断试剂盒，我们用大肠杆菌表达HPV58型E7蛋 白并制备了兔抗重组E6蛋白抗血清，结合采用申请人改良的生物合成肽策略(Xu，et al. Minimal motif mapping of a known epitope on human zona pellucida protein-4 using peptide biosynthesis strategy. J Reprod Immunol, 81: 9-16, 2009), X^t HPV58 M E7 蛋白进行了线性表位完整且精细的扫描作图定位。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供人乳头瘤病毒(HPV)58型E7蛋白的抗原表位最小基序肽， 并提供含有所述最小基序肽的短肽，同时提供所述基序肽含所述短肽的应用。本专利技术提供的人乳头瘤58型病毒E7蛋白上最小基序肽，具有SED. ID No. 1所示 氨基酸序列，记为HPV58E75—8 ；或者具有SED. ID No. 2所示氨基酸序列，记为HPV58E712—15 ； 或者具有SED. ID No. 3所示氨基酸序列，记为HPV58E718—23 ；或者具有SED. ID No. 4所示 氨基酸序列，记为HPV58E721—27 ；或者具有SED. ID No. 5所示氨基酸序列，记为HPV58E731—35 ； 或者具有SED. ID No. 6所示氨基酸序列，记为HPV58E736_4° ；或者具有SED. ID No. 7所示 氨基酸序列，记为HPV58E743—49 ；或者具有SED. ID No. 8所示氨基酸序列，记为HPV58E794—98。本专利技术提供的分别含有上述最小表位基序肽的短肽，具有SEQ. ID No. 9所示氨基 酸序列，记为HPV58E7-1，其序列中带下标的X编号为特定氨基酸残基，在化学合成或融合 表达最小基序或含最小基序8肽的场合，可删除或不删除和用其他残基替代X编号残基；具有SEQ. ID No. 10所示氨基酸序列，记为HPV58E7-2，其序列中带下标的X编号为特 定氨基酸残基，在化学合成或融合表达最小基序或含最小基序8肽的场合，可删除或不删 除和用其他残基替代C端X残基；具有SEQ. ID No. 11所示氨基酸序列，记为HPV58E7-3，其序列中带下标的X编号为特 定氨基酸残基，在化学合成或融合表达最小基序或含最小基序8肽的场合，可删除或不删 除和用其他残基替代X编号残基；具有SEQ. ID No. 12所示氨基酸序列，记为HPV58E7-4，其序列中带下标的X编号为特 定氨基酸残基，在化学合成或融合表达最小基序或含最小基序8肽的场合，可删除或不删 除和用其他残基替代X编号残基；具有SEQ. ID No. 13所示氨基酸序列，记为HPV58E7-5，其序列中带下标的X编号为特 定氨基酸残基，在化学合成或融合表达最小基序或含最小基序8肽的场合，可删除或不删 除和用其他残基替代X编号残基；具有SEQ. ID No. 14所示氨基酸序列，记为HPV58E7-6，其序列中带下标的X编号为特 定氨基酸残基，在化学合成或融合表达最小基序或含最小基序8肽的场合，可删除或不删 除和用其他残基替代X编号残基；具有SEQ. ID No. 15所示氨基酸序列，记为HPV58E7-7，其序列中带下标的X编号为特 定氨基酸残基，在化学合成或融合表达最小基序或含最小基序8肽的场合，可删除或不删 除和用其他残基替代X编号残基；具有SEQ. ID No. 16所示氨基酸序列，记为HPV58E7-8，其序列中带下标的X编号为特 定氨基酸残基，在化学合成或融合表达最小基序或含最小基序8肽的场合，可删除或不删 除和用其他残基替代X编号残基。本专利技术提供的人乳头瘤病毒(HPV) 58型E7蛋白上申请人第一次鉴定的八个BCE 肽的最小基序，以及它们可化学合成或与GST载体蛋白融合表本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种ＨＰＶ５８型Ｅ７蛋白上八个最小表位基序肽，其特征在于具有ＳＥＱ． ＩＤ Ｎｏ．１所示氨基酸序列，记为ＨＰＶ５８Ｅ７↑［５－８］；或者具有ＳＥＱ． ＩＤ Ｎｏ．２所示氨基酸序列，记为ＨＰＶ５８Ｅ７↑［１２－１５］；或者具有ＳＥＱ． ＩＤＮｏ．３所示氨基酸序列，记为ＨＰＶ５８Ｅ７↑［１８－２３］；或者具有ＳＥＱ． ＩＤ Ｎｏ．４所示氨基酸序列，记为ＨＰＶ５８Ｅ７↑［２１－２３］；或者具有ＳＥＱ． ＩＤ Ｎｏ．５所示氨基酸序列，记为ＨＰＶ５８Ｅ７↑［３１－３５］；或者具有ＳＥＱ． ＩＤ Ｎｏ．６所示氨基酸序列，记为ＨＰＶ５８Ｅ７↑［３６－４０］；或者具有ＳＥＱ． ＩＤ Ｎｏ．７所示氨基酸序列，记为ＨＰＶ５８Ｅ７↑［４３－４９］；或者具有ＳＥＱ． ＩＤ Ｎｏ．８所示氨基酸序列，记为ＨＰＶ５８Ｅ７↑［９４－９８］。
【技术特征摘要】
一种HPV58型E7蛋白上八个最小表位基序肽，其特征在于具有SEQ. ID No.1所示氨基酸序列，记为HPV58E75 8；或者具有SEQ. ID No.2所示氨基酸序列，记为HPV58E712 15；或者具有SEQ. ID No.3所示氨基酸序列，记为HPV58E718 23；或者具有SEQ. ID No.4所示氨基酸序列，记为HPV58E721 23；或者具有SEQ. ID No.5所示氨基酸序列，记为HPV58E731 35；或者具有SEQ. ID No.6所示氨基酸序列，记为HPV58E736 40；或者具有SEQ. ID No.7所示氨基酸序列，记为HPV58E743 49；或者具有SEQ. ID No.8所示氨基酸序列，记为HPV58E794 98。2. 一种含如权利要求1所述的最小表位基序肽的短肽，其特征在于具有SEQ. ID No. 9所示氨基酸序列，记为HPV58E7-1，其序列中带下标的X编号为特定 氨基酸残基，在化学合成或融合表达最小基序或含最小基序8肽的场合，可删除或不删除 和用其他残基替代X编号残基；或者具有SEQ. ID No. 10所示氨基酸序列，记为HPV58E7-2，其序列中带下标的X编号为特 定氨基酸残基，在化学合成或融合表达最小基序或含最小基序8肽的场合，可删除或不删 除和用其他残基替代C端X残基；或者具有SEQ. ID No. 11所示氨基酸序列，记为HPV58E7-3，其序列中带下标的X编号为特 定氨基酸残基，在化学合成或融合表达最小基序或含最小基序8肽的场合，可删除或不删 除和用其他残基替代X编号残基；或者具有SEQ. ID No. 12所示氨基酸序列，记为HPV58E7-4，其序列中带下标的X编号为特 定氨基酸残基，在化学合...
【专利技术属性】
技术研发人员：徐万祥，顾少华，何亚萍，季朝能，唐海平，王健，孙志达，谢毅，
申请(专利权)人：上海市计划生育科学研究所，复旦大学，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]
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