【技术实现步骤摘要】
：本专利技术属于工业微生物领域，具体涉及一种能产生多环氧杂蒽酮类抗生素的红树林来源放线菌菌株链霉菌(streptomyces sp.)scsio 40068及其利用该菌发酵制备多环氧杂蒽酮类抗生素fd594b、fd594c、fd594d、fd594e、fd-594和其苷元的方法。
技术介绍
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技术介绍
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1、多环氧杂蒽酮类化合物的骨架类型丰富多样，生物活性优良，主要包括albofungin，fd-594，xantholipin，arixanthomycin b，kigamicin d，lysolipin i和simaomicinα等。多环氧杂蒽酮类化合物主要有抗肿瘤细胞增殖、抑菌、抗球虫和蛋白抑制剂等活性，如nm浓度的simaomicinα可以抑制肿瘤细胞增殖，xantholipin抑制肿瘤细胞hl60和kb增殖的ic50值分别小于0.3μm和2nm，抑制胶原蛋白的ic50值为27nm，可作为纤维化疾病治疗的先导药物。fd-594(5)类多环氧杂蒽酮类化合物，具备独特的吡喃萘杂蒽连接2,6-二脱氧糖的三糖结构单元、高度氧化还原的cdef环及六元内酯化a环。报道显示fd-594(5)对多株肿瘤细胞具有弱的细胞毒性，对金黄色葡萄球菌等革兰氏阳性病原指示菌具有中等程度的抑制作用[y f qiao,t okazaki,t ando,k mizoue.isolation andcharacterization of a new pyrano[4',3':6,7]naphtho[1,2-b]xanthene antibioti
技术实现思路
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技术实现思路
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1、本专利技术的第一个目的是提供一种能产多环氧杂蒽酮类抗生素fd594b(1)、fd594c(2)、fd594d(3)、fd594e(4)、fd-594(5)和fd-594苷元(6)的红树林来源放线菌菌株链霉菌(streptomyces sp.)scsio 40068，该菌的16s rdna在ncbi编号为：mz833403。
2、本专利技术的链霉菌(streptomyces sp.)scsio 40068是从湛江高桥红树林(东经109.7595°，北纬21.5676°)植物拉关木的根际沉积物中分离获得，该菌的气生菌丝白色，孢子呈灰色，孢子丰富。通过常规方法pcr扩增该菌的16s rdna，并测序，其序列如seq idno.1所示，提交到genbank中，得到序列号mz833403。16s rdna基因序列分析结果显示该菌株与streptomyces kebangsaanensis的相似度达到99％，通过邻接法清晰地揭示了该菌与一组链霉菌属物种的系统进化关系(图2)，表明该菌株属于streptomyces属的一种。将该菌命名为链霉菌(streptomyces sp.)scsio 40068。
3、本专利技术的第二个目的是提供抗生素fd594b(1)、fd594c(2)、fd594d(3)、fd594e(4)、fd-594(5)和fd-594苷元(6)，结构如下所示：
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5、本专利技术的第三个目的是提供一种制备抗生素fd594b(1)、fd594c(2)、fd594d(3)、fd594e(4)、fd-594(5)和fd-594苷元(6)的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
6、a、制备链霉菌streptomyces sp.scsio 40068的发酵培养物，将该发酵培养物的发酵液和菌丝体分离开，发酵液用丁酮萃取，丁酮层经蒸馏浓缩后得到浸膏a；菌丝体先用丙酮浸提，浸取液回收丙酮后剩余的水混合液再用丁酮萃取，丁酮层经蒸馏浓缩后得到浸膏b；
7、b、将浸膏a和浸膏b合并为浸膏c，后经硅胶柱层析，用氯仿/甲醇作为洗脱剂，从体积比100：0～0：100进行梯度洗脱，得到7个馏分fr.a-g；
8、收集氯仿/甲醇体积比95:5梯度洗脱下来的馏分fr.b，将馏分fr.b经中压反相色谱以a相/b相＝水/乙腈(v/v)进行梯度洗脱，得到15个馏分fr.b1-fr.b15；对馏分fr.b5用sephadex lh-20凝胶柱层析以氯仿/甲醇1:1，v/v进行分离，经tlc点板合并得到13个组分fr.b5-l0–fr.b5-l12，组分fr.b5-l2用半制备hplc纯化得到化合物1和5；
9、将馏分fr.b6到fr.b15合并后经sephadex lh-20凝胶柱层析以氯仿/甲醇1:1，v/v进行分离，根据tlc和hplc分析结果合并馏分，得到9个组分fr.b6-l1–fr.b6-l9；
10、组分fr.b6-l8经半制备hplc纯化得到化合物4；
11、收集氯仿/甲醇体积比70:30梯度洗脱下来的馏分fr.c，用sephadex lh-20凝胶柱层析以氯仿/甲醇1:1，v/v进行分离，经tlc点板结果合并得到10个组分fr.c-l1–fr.c-l10，组分fr.c-l3、fr.c-l4、fr.c-l5经半制备hplc纯化后分别得到化合物2、3、6。
12、所述的a)步骤的制备链霉菌streptomyces sp.scsio 40068的发酵培养物优选通过以下方法制备：将活化的链霉菌streptomyces sp.scsio 40068接入种子培养基，28℃，200rpm，培养3d得种子液，将种子液以体积比10％的接种量接入到发酵培养基中，28℃，200rpm，振荡培养7-9d，而制得发酵培养物，所述的种子培养基和发酵培养基的配方均为每升培养基中含有：可溶性淀粉20g，甘油10g，酵母提取粉5g，caco35g，海盐15g，余量为水，ph＝7.0。
13、本专利技术的第四个目的是提供红树林链霉菌streptomyces sp.scsio 40068在制备多环氧杂蒽酮类抗生素fd594b(1)、fd594c(2)、fd594d(3)、fd594e(4)、fd-594(5)和fd-594苷元(6)中的应用。
14、本专利技术的第五个目的是提供上述多环氧杂蒽酮类抗生素fd594b(1)、fd594c(2)、fd594d(3)、fd594e(4)、fd-594(5)和fd-594苷元(6)在制备抗菌或抗肿瘤药物中的应用。
15、优选，所述的抗菌药物是抗金黄色葡萄球菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、溶藻弧菌或鲍曼不动杆菌的药物。
16、优选，所述的抗肿瘤药物是治疗肝癌或乳腺癌的药物。
17、本专利技术的链霉菌strepto本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.链霉菌(Streptomyces sp.)SCSIO 40068。
2.抗生素FD594 B(1)、FD594 C(2)、FD594 D(3)、FD594E(4)、FD-594(5)和FD-594苷元(6)，结构如下所示：
3.一种制备权利要求2所述的抗生素FD594 B(1)、FD594 C(2)、FD594 D(3)、FD594E(4)、FD-594(5)和FD-594苷元(6)的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述的a)步骤的制备链霉菌Streptomycessp.SCSIO 40068的发酵培养物优选通过以下方法制备：将活化的链霉菌Streptomyces sp.
5.权利要求1所述的红树林链霉菌Streptomyces sp.SCSIO 40068在制备权利要求2所述的多环氧杂蒽酮类抗生素FD594 B(1)、FD594 C(2)、FD594 D(3)、FD594E(4)、FD-594(5)和FD-594苷元(6)中的应用。
6.权利要求2所述的多环氧杂蒽
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述的抗菌药物是抗金黄色葡萄球菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌或溶藻弧菌的药物。
8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述的抗肿瘤药物是治疗肝癌或乳腺癌的药物。
...【技术特征摘要】
1.链霉菌(streptomyces sp.)scsio 40068。
2.抗生素fd594 b(1)、fd594 c(2)、fd594 d(3)、fd594e(4)、fd-594(5)和fd-594苷元(6)，结构如下所示：
3.一种制备权利要求2所述的抗生素fd594 b(1)、fd594 c(2)、fd594 d(3)、fd594e(4)、fd-594(5)和fd-594苷元(6)的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述的a)步骤的制备链霉菌streptomycessp.scsio 40068的发酵培养物优选通过以下方法制备：将活化的链霉菌streptomyces sp.
5.权利要求1所述的...
【专利技术属性】
技术研发人员：张长生，杨春芳，张文军，赵梦冉，张丽萍，
申请(专利权)人：三亚海洋生态环境工程研究院，
类型：发明
国别省市：
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