一种异丁香酚单加氧酶突变体及制备方法与应用技术

本发明专利技术提供了一种异丁香酚单加氧酶突变体及制备方法与应用，涉及发酵工程技术领域，所述突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，存在如下突变位点：第91位、第108位和第152位；所述第91位的精氨酸突变为亮氨酸，所述第108位的天冬氨酸突变为亮氨酸，所述第152位精氨酸突变为甲硫氨酸。通过基因工程手段定点突变异丁香酚单加氧酶基因序列，获得以异丁香酚为底物的具有高催化活性的异丁香酚单加氧酶突变体。该异丁香酚单加氧酶突变体相对于突变前，滴度及转化效率显著提高，解决了现有技术汇总用于生产香兰素的异丁香酚单加氧酶的滴度低，和且生物转化过程复杂导致的转化效率低的技术问题。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及发酵工程，尤其是涉及一种异丁香酚单加氧酶突变体及制备方法与应用。

技术介绍

1、香兰素(vani1lin)，又名香兰素，化学名称为4-羟基-3-甲氧基苯甲醛，其香气幽雅、持久，广泛的应用于食品、医药、日用化工等领域。因此近年来，消费者们对于天然香料的呼声越来越高，导致天然香兰素的需求量也在大幅增长。

2、目前生产香兰素的方法有植物提取法、化学合成法和生物合成法。植物提取法从香英兰豆中提取，但其产量较低且价格高昂；化学法合成的香兰素大剂量使用会导致头痛、呕吐，呼吸困难等不良反应，对人体危害较大；生物合成法在微生物细胞或酶的催化作用下，通过简单的生物转化或生物合成制备香兰素，与植物提取的香兰素等同，符合eu和fda对天然香精的使用安全要求。其转化前体主要有丁香酚、异丁香酚、香草醇、阿魏酸和芳香族氨基酸等天然化合物。异丁香酚是合成香兰素的最佳前体物质，而异丁香酚单加氧酶特异性转化异丁香酚为香兰素，是唯一关键酶，该方法合成出来的香兰素在香气上最接近于天然香兰素，因此引起广泛的关注。

3、异丁香酚单加氧酶(isoeugenol 本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种异丁香酚单加氧酶突变体，其特征在于，所述突变体的氨基酸序列如SEQ IDNO.1所示，存在如下突变位点：第91位、第108位和第152位；

2.编码权利要求1所述的异丁香酚单加氧酶突变体的多核苷酸；

3.一种重组载体，其特征在于，所述重组载体携带权利要求2所述的多核苷酸；

4.一种表达异丁香酚单加氧酶突变体的重组细胞，其特征在于，所述重组细胞含有权利要求2所述的多核苷酸或权利要求3所述的重组载体，异源过表达异丁香酚单加氧酶突变体；

5.权利要求4所述的重组细胞在发酵生产香兰素中的应用。

6.利用权利要求4所述的重组细胞发...

【技术特征摘要】

1.一种异丁香酚单加氧酶突变体，其特征在于，所述突变体的氨基酸序列如seq idno.1所示，存在如下突变位点：第91位、第108位和第152位；

2.编码权利要求1所述的异丁香酚单加氧酶突变体的多核苷酸；

3.一种重组载体，其特征在于，所述重组载体携带权利要求2所述的多核苷酸；

4.一种表达异丁香酚单加氧酶突变体的重组细胞，其特征在于，所述重组细胞含有权利要求2所述的多核苷酸或权利要求3所述的重组载体，异源过表达异丁香酚单加氧酶突变体；

5.权利要求4所述的重组细胞在发酵生产香兰素中的应用。

6.利用权利要求4所述的重组细胞发酵生产香兰素的方法，其特征在于，包括以下步骤：将权利要求4所述的重组细胞经活化后进行种子培养，得到种子液；将种子液接种至发酵培养基中发酵培养；流加异丁香酚生产香兰素；以及，从所述重组...

【专利技术属性】
技术研发人员：席道义，徐皓然，随树珍，李朝杰，李干，户超群，
申请(专利权)人：国药国际医药科技北京有限公司，
类型：发明
国别省市：