【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药，具体是一种提高免疫细胞慢病毒转染效率的转染试剂及转染方法。
技术介绍
1、car全称是嵌合抗原受体，car-t或nk是嵌合抗原受体t或nk细胞即表达嵌合抗原受体(car)的nk淋巴细胞，目前car-t或nk治疗在血液系统肿瘤中取得了突破性进展，在car-t或nk制备过程中很重要的一个步骤中会使用到转染试剂。
2、慢病毒载体具有能感染非分裂期细胞、容纳外源性目的基因片段大、稳定性强、免疫原性小等特点。大量研究表明，相对其他病毒载体，慢病毒感染效率高，更容易感染一些较难感染的组织和细胞，其效率一般可以达到20％-80％之间。
3、现有市场常用的转染试剂是polybrene、human fibronectin及一些阳离子多肽，目前大部分的转染试剂存在成分复杂、保存条件严苛、使用操作步骤繁琐等缺陷，而且这些转染试剂的成份对细胞大多有害，即便提高转染效率，细胞的状态也会受损，此外，由于病毒质量的问题，需要求应用更高的病毒滴度，然而，增加病毒数量以促进表达可能会导致许多细胞类型的毒性副作用，并带来不必要的昂贵成本。在car领域，对于car-nk细胞和巨噬细胞，慢病毒转染的效率特别低，增加慢病毒的数量又会导致许多细胞类型的毒性副作用，严重影响最后生产出来的car-t或nk细胞的质量以及疗效并且给后续的实验评价带来新的技术难题，故提高转染效率显得尤为重要，另外应用于临床中的各种原辅料都需要严格控制，常规使用的转染试剂形成产品后都需要经常长期繁琐的程序去去除，并且残留量也需要经过严苛的标准去衡量是否
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种提高免疫细胞慢病毒转染效率的转染试剂及转染方法，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。
2、为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种提高免疫细胞慢病毒转染效率的转染试剂，所述转染试剂包括virushancer组合物，所述virushancer组合物包括鱼精蛋白和聚醚型非离子表面活性剂，所述鱼精蛋白和聚醚型非离子表面活性剂的质量比为1:10～50。
3、作为本专利技术进一步的方案：所述聚醚型非离子表面活性剂为泊洛沙姆。
4、一种提高免疫细胞慢病毒转染效率的转染试剂的应用，所述转染试剂在制备慢病毒载体或其他病毒载体转染免疫细胞或肿瘤细胞系的转染中作为提升剂的应用。
5、一种提高免疫细胞慢病毒转染效率的转染方法，基于上述的提高免疫细胞慢病毒转染效率的转染试剂，所述方法包括将目标细胞、慢病毒与转染试剂共同培养，得转染后的目标细胞。
6、作为本专利技术再进一步的方案：先对目标细胞进行活化，在目标细胞活化后，感染慢病毒时加入转染试剂，共同培养目标细胞，得转染后的目标细胞。
7、作为本专利技术再进一步的方案：所述目标细胞为t细胞或nk细胞或巨噬细胞中的任意一种或几种。
8、作为本专利技术再进一步的方案：所述慢病毒中携带有功能基因片段。
9、作为本专利技术再进一步的方案：所述功能基因片段来自于靶点cd19、cd123、psma、il13rα2、egfrviii、egfr、epcam、gd2、meso、cd133、nkg2d、cd138、bcma、cd30、cd20、cd22、psca、cd70、cd47或her-2中的功能基因片段中的任意一种或几种。
10、作为本专利技术再进一步的方案：所述慢病毒采用磷酸钙法进行包装。
11、一种重组细胞，由上述的提高免疫细胞慢病毒转染效率的转染方法获得。
12、与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：本专利技术公开了一种提高免疫细胞慢病毒转染效率的转染试剂及转染方法，
13、1、本专利技术通过在car-t或nk细胞培养活化时添加转染试剂，提高了病毒感染的阳性率，增加免疫细胞的car感染效率。
14、2、本专利技术转染试剂储存条件简单，无需放入-80℃冰箱保存，只需在常温下保存。
15、3、本专利技术在细胞感染状态下添加转染试剂，提高转染效率，且本专利技术对不同靶点以及同种靶点不同结构的car都适用，相对于各成分单独使用添加，后续细胞增殖效果更明显，操作更加简单，节约时间。
16、4、本专利技术在不提升慢病毒的绝对或相对数量时，能显著提升目标细胞转染率，有利于细胞增殖并且适用于临床研究。
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1.一种提高免疫细胞慢病毒转染效率的转染试剂，其特征在于：所述转染试剂包括VirusHancer组合物，所述VirusHancer组合物包括鱼精蛋白和聚醚型非离子表面活性剂，所述鱼精蛋白和聚醚型非离子表面活性剂的质量比为1:10～50。
2.根据权利要求1所述的一种提高免疫细胞慢病毒转染效率的转染试剂，其特征在于：所述聚醚型非离子表面活性剂为泊洛沙姆。
3.根据权利要求1～2中任一项所述的一种提高免疫细胞慢病毒转染效率的转染试剂的应用，其特征在于：所述转染试剂在制备慢病毒载体或其他病毒载体转染免疫细胞或肿瘤细胞系的转染中作为提升剂的应用。
4.一种提高免疫细胞慢病毒转染效率的转染方法，基于权利要求1～2中任意一项所述的提高免疫细胞慢病毒转染效率的转染试剂，其特征在于：所述方法包括将目标细胞、慢病毒与转染试剂共同培养，得转染后的目标细胞。
5.根据权利要求4所述的一种提高免疫细胞慢病毒转染效率的转染方法，其特征在于：先对目标细胞进行活化，在目标细胞活化后，感染慢病毒时加入转染试剂，共同培养目标细胞，得转染后的目标细胞。
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7.根据权利要求4所述的一种提高免疫细胞慢病毒转染效率的转染方法，其特征在于：所述慢病毒中携带有功能基因片段。
8.根据权利要求7所述的一种提高免疫细胞慢病毒转染效率的转染方法，其特征在于：所述功能基因片段来自于靶点CD19、CD123、PSMA、IL13Rα2、EGFRvIII、EGFR、EPCAM、GD2、Meso、CD133、NKG2D、CD138、BCMA、CD30、CD20、CD22、PSCA、CD70、CD47或Her-2中的功能基因片段中的任意一种或几种。
9.根据权利要求4所述的一种提高免疫细胞慢病毒转染效率的转染方法，其特征在于：所述慢病毒采用磷酸钙法进行包装。
10.一种重组细胞，其特征在于：由权利要求4～9中任一项所述的提高免疫细胞慢病毒转染效率的转染方法获得。
...【技术特征摘要】
1.一种提高免疫细胞慢病毒转染效率的转染试剂，其特征在于：所述转染试剂包括virushancer组合物，所述virushancer组合物包括鱼精蛋白和聚醚型非离子表面活性剂，所述鱼精蛋白和聚醚型非离子表面活性剂的质量比为1:10～50。
2.根据权利要求1所述的一种提高免疫细胞慢病毒转染效率的转染试剂，其特征在于：所述聚醚型非离子表面活性剂为泊洛沙姆。
3.根据权利要求1～2中任一项所述的一种提高免疫细胞慢病毒转染效率的转染试剂的应用，其特征在于：所述转染试剂在制备慢病毒载体或其他病毒载体转染免疫细胞或肿瘤细胞系的转染中作为提升剂的应用。
4.一种提高免疫细胞慢病毒转染效率的转染方法，基于权利要求1～2中任意一项所述的提高免疫细胞慢病毒转染效率的转染试剂，其特征在于：所述方法包括将目标细胞、慢病毒与转染试剂共同培养，得转染后的目标细胞。
5.根据权利要求4所述的一种提高免疫细胞慢病毒转染效率的转染方法，其特征在于：先对目标细胞进行活化，在目标细胞活化后，感染慢病毒时加入转染试...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈正亮，张照，黄庭晖，
申请(专利权)人：南京康和细胞基因工程研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：
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