一种便于CART检测的噬菌体展示抗体库及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种便于CART检测的噬菌体展示抗体库及其应用，包括以下步骤：S01、RNA提取与反转录：S11、加入0.3mL氯仿，摇匀后室温静置分层；S12、4℃下12000rpm离心10min；S13、转移上层水相于新的1.5ml离心管中，加入0.8倍体积预冷异丙醇混匀，4℃沉淀30min；S14、4℃下12000rpm离心10min；S15、弃上清，加入1.5mL70％乙醇洗涤沉淀，将洗液吸除干净，室温干燥5min；S16、加入20μL无RNA酶去离子水，吹吸使RNA沉淀充分溶解；S17、将总RNA加到1.5％argarose胶孔中，1×TAE电泳缓冲液中快速电泳分离。该发明专利技术提供的便于CART检测的噬菌体展示抗体库及其应用，能够与抗原结合，若用抗标签的抗体检测，其信号明显强于用抗原直接检测，结果更加直观、可靠。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及噬菌体抗体展示库，具体来说涉及一种便于cart检测的噬菌体展示抗体库及其应用。

技术介绍

1、噬菌体抗体展示库是将抗体与噬菌体的外壳蛋白的n末端融合表达，从而使抗体表达于噬菌体表面，若不同的噬菌体携带不同的抗体，多个不同的噬菌体则构成不同抗体的集合。在实际操作过程中，其可以以噬菌粒、噬菌体或携带噬菌粒的大肠杆菌三种形式存在。自1985年美国生物化学家乔治·史密斯(georgep.smith)博士专利技术噬菌体展示技术以来，噬菌体抗体展示库被广泛运用于抗体发现，大大加快了抗体开发的进程，被证明是十分行之有效的技术手段，特别是其可用于筛选全人源抗体、或者无法形成杂交瘤的b细胞抗体。

2、目前，噬菌体抗体展示库从所展示的抗体的结构来看有scfv(single-chainvariablefragment)、f(ab)(fragmentofantigenbinding)、f(ab')2(二价的fab)和sdab(singledomainantibody)，其中sdab包括驼类来源的vhh(variabledomainofheavychain本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种便于CART检测的噬菌体展示抗体库及其应用，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种便于CART检测的噬菌体展示抗体库及其应用，其特征在于，所述步骤21中的miniagar培养基平板包括1×M9盐，2％葡萄糖，2mMMgSO4，0.1mMCaCl2，1mM维生素B1。

3.根据权利要求1所述的一种便于CART检测的噬菌体展示抗体库及其应用，其特征在于，所述步骤50中重复执行步骤41到步骤50的过程中，所述1.5％BSA的封闭剂的容易位于第二轮、第三轮淘选时逐渐增加。

4.根据权利要求1所述的一种便于CART检测的噬菌体展示抗体库...

【技术特征摘要】

1.一种便于cart检测的噬菌体展示抗体库及其应用，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种便于cart检测的噬菌体展示抗体库及其应用，其特征在于，所述步骤21中的miniagar培养基平板包括1×m9盐，2％葡萄糖，2mmmgso4，0.1mmcacl2，1mm维生素b1。

3.根据权利要求1所述的一种便于cart检测的噬菌体展示抗体库及其应用，其特征在于，所述步骤50中重复执行步骤41到步骤50的过程中，所述1.5％bsa的封闭剂的容易位于第二轮、第三轮淘选时逐渐增加。

4.根据权利要求1所述的一种便于cart检测的噬菌体展示抗体库及其应用，其特征在于，所述步骤44中的1011pfu...

【专利技术属性】
技术研发人员：林渭金，王新平，
申请(专利权)人：南京康和细胞基因工程研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：