【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及中药材分析检测领域，更具体地，涉及一种基于代谢组学的鱼腥草质量分析方法。
技术介绍
1、鱼腥草为三白草科植物蕺菜houttuynia cordata thunb.，又名臭菜、侧耳根、猪鼻孔、臭腥草等，其资源十分丰富，广布于我国中部、东南部及西南各省区。鱼腥草具有清热解毒、抗肿瘤、提高免疫、抗辐射(李宗生,王洪生,洪佳璇等.鱼腥草总黄酮与利血生抗辐射功效的对比研究[j].航空航天医学杂志,2016,27(06):669-673.)等药理作用，被国家确定为“药食两用”品种之一，其地下根茎是一种深受老百姓喜食的蔬菜，同时地上干燥部分被作为中药材使用历史悠久，可谓全身是宝。随着鱼腥草价值的不断深入挖掘，已有多种以鱼腥草为主要原药材的相关药品、食品、兽药、饲料等产品开发上市，诸如鱼腥草破壁饮片、连花清瘟胶囊、急支糖浆、鱼腥草素片、鱼腥草茶等，消耗量逐年增大，些许农户、商家、企业将任意采收方式的鱼腥草进行混合售卖，以次充好。
2、目前，鱼腥草的采收方式主要有3种情况：(1)7月第一茬：于7月份(花果期)采收鱼腥草地上部分；(2)10月第一茬：鱼腥草生长势较弱，且7月份未采收过，于10月采收鱼腥草地上部分；(3)10月第二茬：7月份采收后重新长出的鱼腥草地上部分于10月采收。药典或现有文献验证无论是从中药安全性、有效性、还是产量方面综合考虑，7月第一茬(花果期)采收的效果比较好。
3、虽然7月第一茬采收的鱼腥草的质量是较好的，但是，一方面，鱼腥草经过加工之后，其采收方式是难以辨别的；另一方面，不同采收方式
技术实现思路
1、本专利技术的首要目的是克服上述现有技术难以辨别鱼腥草的采收方式以及全面、客观和准确地评价鱼腥草的质量的方法较为缺乏的问题，提供一种基于代谢组学的鱼腥草质量分析方法。
2、本专利技术的上述目的通过以下技术方案实现：
3、一种基于代谢组学的鱼腥草质量分析方法，包括如下步骤：
4、s1.取不同采收方式的鱼腥草样品，分别与甲醇溶液混合，提取，得到鱼腥草提取溶液；
5、s2.采用uplc-q-tof-ms技术对步骤s1得到的鱼腥草提取溶液进行检测，得到总离子流图；
6、s3.根据总离子流图对鱼腥草样品的化学成分进行鉴定；
7、s4.进行代谢组学分析，并筛选差异代谢物，得到不同采收方式的鱼腥草的代谢组差异；
8、步骤s1中所述甲醇溶液的体积浓度≥60％；步骤s2中所述uplc-q-tof-ms技术中，超高效液相色谱的流动相a为体积比为1:1的乙腈和甲醇混合溶液，流动相b为0.1％甲酸水；洗脱梯度为：0-5-13-15-27-36-38-40min，流动相a：0％-12％-19％-24％-38％-52％-0％-0％。
9、代谢组学常用于中药材的质量分析，但想利用代谢组学实现对鱼腥草的质量全面、客观和准确地评价，在进行代谢组学分析之前，对样品的前处理和色谱分析都很关键：一方面，在样品的前处理中，需能将不同的鱼腥草样品的差异代谢物提取出来，获得较好的提取效果，并有利于这些成分在后续的色谱中较好地出峰；另一方面，在色谱分析中，需要有效分离待测液中的各成分，使得得到的谱图具有出峰数目多、出峰时间适中、基线平稳、响应值高、各主要色谱峰分离度好的效果，进而为后续全面获得代谢组信息和差异代谢物的筛选提供基础。
10、本专利技术的专利技术人通过多次研究发现，选用特定体积浓度的甲醇溶液对鱼腥草样品进行提取，可以将鱼腥草样品的共有成分有效提取出来，且有利于后续色谱分离中成分峰的辨别；然后以特定的流动相和洗脱梯度的uplc-q-tof-ms技术对待测液进行分析，可以得到的出峰数目多、出峰时间适中、基线平稳、响应值高、各主要色谱峰分离度好的总离子流图；以得到的总离子流图为基础，进行化学成分鉴定，然后代谢组学分析，并筛选差异代谢物，得到代谢组差异，其不仅可以实现对不同采收方式的鱼腥草的质量分析，而且发现了不同化学成分在不同采收方式的鱼腥草中的分布特征，寻找到不同采收方式的鱼腥草之间的代谢组差异，揭示了不同采收方式鱼腥草的代谢组学特征和规律，实现了对鱼腥草全面、客观和准确的质量分析，为不同采收方式的鱼腥草的合理利用提供了重要依据。
11、提取溶剂甲醇溶液的浓度、流动相的种类和洗脱梯度的选用都很关键。如果甲醇溶液的浓度不合适(比如40％)，无法有效提取共有成分且导致后续色谱分离中的成分峰无法分辨、基线不平稳；如果选用其它的流动相(比如乙腈(a)-0.1％甲酸水(b))，则得到的总离子流图的成分峰难以分开，不利于进行后续的化学成分鉴定和代谢组学分析；如果洗脱梯度不合适，则会导致谱图整体峰型均较差、出现基线不平稳且大部分峰之间未独立分开，难以进行后续的化学成分鉴定和代谢组学分析。
12、一般地，步骤s1中所述不同采收方式为7月第一茬采收、10月第一茬采收和10月第二茬采收。
13、应当理解的是，7月第一茬采收是指鱼腥草的地上部分于7月采收，10月第一茬采收是指鱼腥草的地上部分在7月未采收而在10月采收，10月第二茬采收是指7月采收后重新长出的鱼腥草的地上部分于10月采收。
14、优选地，步骤s1中每种采收方式的鱼腥草样品的粉末状态为超微粉、粗粉或破壁粉中的至少一种，所述超微粉的粒径分布为125μm±5.8μm，所述粗粉的粒径分布为355μm±13μm，所述破壁粉的粒径分布为≤45μm。
15、本专利技术的鱼腥草质量分析方法还可以得到不同粉末状态的鱼腥草的化学成分的分布特征，从而实现针对不同粉末状态的鱼腥草的合理利用提供依据。
16、优选地，步骤s1中所述鱼腥草样品与甲醇溶液的混合质量比为1g：(100～150)ml。
17、应当理解的是，步骤s1中所述甲醇溶液的体积浓度是指甲醇的体积浓度。
18、优选地，步骤s1中所述甲醇溶液的体积浓度为80％。
19、优选地，步骤s1中所述提取的条件为：在40～100khz下超声30～60min。
20、优选地，步骤s1所述提取后之后还包括过滤的步骤；所述过滤采用的滤膜的孔径为0.22～0.25μm。
21、优选地，步骤s2中所述uplc-q-tof-ms技术中，超高效液相色谱的色谱柱为acquityuplc hss t3；柱温为35～40℃，优选为35℃。
22、更为优选地，所述色谱柱的规格为2.1mm×150mm，1.8μm。
23、优选地，步骤s2中所述uplc-q-tof-ms技术中，超高效液相色谱的流本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种基于代谢组学的鱼腥草质量分析方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述鱼腥草质量分析方法，其特征在于，步骤S1中所述不同采收方式为7月第一茬采收、10月第一茬采收和10月第二茬采收。
3.根据权利要求1所述鱼腥草质量分析方法，其特征在于，步骤S1中所述鱼腥草样品与甲醇溶液的混合质量体积比为1g:(100～150)mL。
4.根据权利要求1所述鱼腥草质量分析方法，其特征在于，步骤S1中所述提取的条件为：在40～100KHz下超声30～60min。
5.根据权利要求1所述鱼腥草质量分析方法，其特征在于，步骤S2中所述UPLC-Q-TOF-MS技术中，超高效液相色谱的色谱柱为ACQUITYUPLC HSS T3；柱温为35～40℃。
6.根据权利要求1所述鱼腥草质量分析方法，其特征在于，步骤S2中所述UPLC-Q-TOF-MS技术中，超高效液相色谱的流速为0.2～0.3mL/min；进样体积为1～3μL。
7.根据权利要求1所述鱼腥草质量分析方法，其特征在于，步骤S2中所述UPLC-Q-TOF
8.根据权利要求1所述鱼腥草质量分析方法，其特征在于，步骤S2中所述UPLC-Q-TOF-MS技术中，质谱的高能量通道碰撞电压为10-50eV。
9.根据权利要求1所述鱼腥草质量分析方法，其特征在于，步骤S3中所述差异代谢物为：Houttuynoside A、Quercetin、Cryptochlorogenic acid、Neochlorogenic acid、Laetanine、Laurolitsine、Pilloin、Roseoside、5-O-Caffeoylshikimic acid、Catechin、Kaempferol、Luteolin、Scutellarein、Asimilobine、Vitexin、Reynoutrin、Rutin和Neochlorogenic acid methyl ester。
10.根据权利要求1所述鱼腥草质量分析方法，其特征在于，步骤S1中每种采收方式的鱼腥草样品的粉末状态为超微粉、粗粉或破壁粉中的至少一种；所述超微粉的粒径分布为125μm±5.8μm，所述粗粉的粒径分布为355μm±13μm，所述破壁粉的粒径分布为≤45μm。
...【技术特征摘要】
1.一种基于代谢组学的鱼腥草质量分析方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述鱼腥草质量分析方法，其特征在于，步骤s1中所述不同采收方式为7月第一茬采收、10月第一茬采收和10月第二茬采收。
3.根据权利要求1所述鱼腥草质量分析方法，其特征在于，步骤s1中所述鱼腥草样品与甲醇溶液的混合质量体积比为1g:(100～150)ml。
4.根据权利要求1所述鱼腥草质量分析方法，其特征在于，步骤s1中所述提取的条件为：在40～100khz下超声30～60min。
5.根据权利要求1所述鱼腥草质量分析方法，其特征在于，步骤s2中所述uplc-q-tof-ms技术中，超高效液相色谱的色谱柱为acquityuplc hss t3；柱温为35～40℃。
6.根据权利要求1所述鱼腥草质量分析方法，其特征在于，步骤s2中所述uplc-q-tof-ms技术中，超高效液相色谱的流速为0.2～0.3ml/min；进样体积为1～3μl。
7.根据权利要求1所述鱼腥草质量分析方法，其特征在于，步骤s2中所述uplc-q-tof-ms技术中，质谱的扫描模式为负离子...
【专利技术属性】
技术研发人员：马宏亮，王吉文，何文秀，乔卫林，陈金梅，胡倩倩，杨联林，赵雨，马永霖，
申请(专利权)人：中山市中智药业集团有限公司，
类型：发明
国别省市：
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