【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及有机化学领域，尤其涉及一种核苷酸类似物的制备方法。
技术介绍
1、在众多的核苷多磷酸生物分子中，核苷三磷酸（nucleoside triphosphate，ntp）是维持生命体系运转的一类重要物质，核苷三磷酸是基因复制、转录、翻译的物质基础，作为遗传信息的载体，rna和dna都是以核苷三磷酸和脱氧核苷三磷酸为底物和能量来源，由相应的聚合酶连结而成。核苷三磷酸包括天然的核苷酸及修饰的核苷三磷酸，主要用于pcr实验试剂盒。除天然的核苷三磷酸外，许多碱基修饰或者糖环修饰的核苷类似物及抗病毒核苷药物的三磷酸也在生物和医学中有着重要的应用，如生物素和荧光团标记的dutp被广泛应用于细胞凋亡和蛋白质与ntp的相互作用研究中，由哥伦比亚大学jingyue ju教授专利技术的四色dna聚合物底物生物芯片已广泛应用于高通量dna测序。
2、因具有重要的生物功能，核苷三磷酸具有广泛的应用及巨大的市场前景，然而目前只有少量的核苷三磷酸可以通过生物工程的方法进行工业化生产，这是造成大部分核苷三磷酸价格极其昂贵的直接原因。核苷三磷酸化学合成的研究难点在于核苷三磷酸自身和合成原料特殊的物理化学性质，具体包括以下几个方面：（1）反应物及产物均存在多个反应位点。核苷三磷酸合成反应中使用的极性亲核试剂通常带有多个负电荷和反应位点，同时反应中生成的核苷多磷酸中间体也因相似原因也具有一定的反应，因此整个合成反应的副反应较多，易生成各种多聚磷酸副产物；（2）反应物溶解性差异较大。核苷三磷酸合成反应中由于无机磷酸盐亲核试剂的脂溶性较差，而核苷部
3、目前核苷三磷酸的合成方法主要有dcc缩合法、一锅三步法、酶促合成法等，其中dcc缩合法会产生核苷二磷酸以及核苷多聚磷酸等大量副产物，在核苷三磷酸合成中几乎没有使用价值；一锅三步法通过核苷磷酰二氯中间体合成核苷三磷酸，其优点是不需要对核苷进行保护，但是对磷酰化的区域选择性有不确定因素，并对核苷的碱基有特异性，使用焦磷酸铵中含有剧毒的三正丁胺，难以购买获得，产率也相对较低，大概在30%左右；此外还可通过核苷亚磷酸酯中间体合成核苷三磷酸，该方法的问题在于水杨酸亚磷酰氯性质活泼，取用时易水解，反应中所形成的杂质较难去除，而且产率也较低（30%-50%）；最后关于酶促合成方法，虽然生物催化可用于非天然核苷三磷酸类化合物的制备，但必须花费大量的时间和精力通过筛选找到可以作用于非天然核苷底物的各种酶，同时极有可能根本无法找到能够作用于某些特殊非天然底物的酶。
4、因此，亟需提供一种收率高、副产物易去除、产物易纯化的核苷酸类似物的制备方法。
技术实现思路
1、本专利技术旨在至少一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此，本专利技术提供了一种核苷酸类似物的制备方法，通过该方法可实现核苷的二磷酸化或三磷酸化，具有产率高、产物易纯化、副产物易去除等优点。
2、为此，本专利技术提供了一种式（i）所示化合物的制备方法，包括：
3、将式（ii）所示化合物与式（iii）所示化合物接触，所得产物与式（ⅳ）所示化合物接触，得到式（i）所示化合物；
4、其中，b为碱基或碱基衍生物；
5、r1为第一磷酸基团；
6、r2为h或第一羟基保护基团；
7、r3为h、第二羟基保护基团或，其中r5为h或第三羟基保护基团；
8、r4为第四羟基保护基团；
9、r6选自卤素、no2、cn、无取代或被至少一个ra取代的下列基团：c1-c10烷基、c1-c10烷氧基；
10、ra独立地选自卤素；
11、r7选自h、oh、f、ome、omoe或o-propargyl；
12、
13、式（i）
14、
15、式（ii）
16、
17、式（iii）
18、
19、式（ⅳ）。
20、为解决现有技术中存在的不足，本专利技术将式（ii）所示化合物与式（iii）所示化合物接触，所得产物与式（ⅳ）所示化合物接触，由此制得式（i）所示的核苷酸类似物。其中式（ii）所示化合物与其他磷酸盐供体相比，其不易吸潮、性质稳定，适用于放大反应中；式（iii）所示化合物中包含具有对位结构的苯环，可作为较好的离去基团，实现磷转移。因本专利技术所选用的原料稳定性较好，避免了复杂的产物后处理，降低了杂质的产生，进一步提高了产率。
21、根据本专利技术的实施例，b选自胞嘧啶或其衍生物、胸腺嘧啶或其衍生物、腺嘌呤或其衍生物、鸟嘌呤或其衍生物、尿嘧啶或其衍生物，或假尿苷或其衍生物。
22、根据本专利技术的实施例，所述第一磷酸基团为双磷酸基团或三磷酸基团。
23、根据本专利技术的实施例，所述第一羟基保护基团、第四羟基保护基团独立地包括选自烷基类保护基团、硅烷类保护基团、缩醛类保护基团、酰基类保护基团中的至少一种。
24、根据本专利技术的实施例，所述烷基类保护基团包括选自甲基、叔丁基、苄基、对甲氧基苄基、三苯甲基、叠氮甲基中的至少一种。
25、根据本专利技术的实施例，所述硅烷类保护基团包括选自三甲基硅基、叔丁基二甲基硅基、叔丁基二苯基硅基中的至少一种。
26、根据本专利技术的实施例，所述缩醛类保护基团包括选自甲氧基甲基、甲氧基乙氧基甲基、苄氧甲基、三甲基硅基乙氧甲基、四氢呋喃基中的至少一种。
27、根据本专利技术的实施例，所述酰基类保护基团包括选自新戊酰基、苯甲酰基、乙酰基、卤乙酰基中的至少一种。
28、根据本专利技术的实施例，所述第一羟基保护基团为叠氮甲基。
29、根据本专利技术的实施例，所述第四羟基保护基团为乙酰基或苯甲酰基。
30、根据本专利技术的实施例，所述第二羟基保护基团包括选自fm、ac、bz、piv。
31、根据本专利技术的实施例，所述第三羟基保护基团包括选自fm、苄基、对甲氧基苄基、ms、ts、ns、tf。
32、根据本专利技术的实施例，r3为h、fm或。
33、根据本专利技术的实施例，r6选自f、cl、br、no2、cn、och3、ch3、cf3。
34、根据本专利技术的实施例，r6选自br。
35、根据本专利技术的实施例，式（ii）所示化合物、式（iii）所示化合物与式（ⅳ）所示化合物的摩尔比为（1-4）：（1-4）：（1-4）。
36、根据本专利技术的实施例，当r3为第二羟基保护基团或r5为第三羟基保护基团时，所述制备方法进一步包括：将式（ii）所示化合物、第一脱保护试剂、式（iii）所示化合物接触。
37、根据本专利技术的实施例，所述第一脱保护试剂包括选自dbu、et3n、dabco、tmg、kotbu、barton s、hunigs、phosphazene中的至少一种。
38、根据本专利技术的实施例，当r2为第一羟基保护基团，所述制本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种式（I）所示化合物的制备方法，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，B选自胞嘧啶或其衍生物、胸腺嘧啶或其衍生物、腺嘌呤或其衍生物、鸟嘌呤或其衍生物、尿嘧啶或其衍生物，或假尿嘧啶或其衍生物。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述第一磷酸基团为双磷酸基团或三磷酸基团。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述第一羟基保护基团、第四羟基保护基团独立地包括选自烷基类保护基团、硅烷类保护基团、缩醛类保护基团、酰基类保护基团中的至少一种；
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述第一羟基保护基团为叠氮甲基，所述第四羟基保护基团为乙酰基或苯甲酰基。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述第二羟基保护基团包括选自Fm、Ac、Bz、Piv；
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，R3为H、Fm或。
8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，R6选自F、Cl、Br、NO2、CN、OCH3、CH3、CF3。
9.根
10.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，当R3为第二羟基保护基团或R5为第三羟基保护基团时，所述制备方法进一步包括：将式（II）所示化合物、第一脱保护试剂、式（III）所示化合物接触；
11.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，当R2为第一羟基保护基团，所述制备方法进一步包括：将式（II）所示化合物与式（III）所示化合物接触，所得产物与式（Ⅳ）所示化合物、第二脱保护试剂接触；
...【技术特征摘要】
1.一种式（i）所示化合物的制备方法，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，b选自胞嘧啶或其衍生物、胸腺嘧啶或其衍生物、腺嘌呤或其衍生物、鸟嘌呤或其衍生物、尿嘧啶或其衍生物，或假尿嘧啶或其衍生物。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述第一磷酸基团为双磷酸基团或三磷酸基团。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述第一羟基保护基团、第四羟基保护基团独立地包括选自烷基类保护基团、硅烷类保护基团、缩醛类保护基团、酰基类保护基团中的至少一种；
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述第一羟基保护基团为叠氮甲基，所述第四羟基保护基团为乙酰基或苯甲酰基。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述第二羟基保护基团包括选自fm、ac、bz、piv；
<...【专利技术属性】
技术研发人员：徐杰成，刘二凯，陈德遐，王谷丰，赵陆洋，
申请(专利权)人：深圳赛陆医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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