一种含多巴的重组IV型人源化胶原蛋白的纯化生产方法技术

本发明专利技术公开了一种含多巴的重组IV型人源化胶原蛋白的纯化生产方法，将巴斯德毕赤酵母工程菌发酵液经固液分离、过滤澄清、超滤浓缩后进行酶促反应与复合阳离子填料捕获，再经过浸洗、超滤浓缩、强阴离子层析、冷冻干燥，获得纯度大于95％、多巴含量大于0.3％、内毒素含量小于1EU/mg的重组IV型人源化胶原蛋白。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于蛋白工程，涉及经发酵获得的重组iv型人源化胶原蛋白粗品料液的工业化分离纯化及多巴修饰方法。

技术介绍

1、胶原蛋白(collagen)是体内含量最多的一种蛋白质，约占蛋白质总量的25％～33％，其广泛分布于机体各个组织器官，如皮肤、骨骼、角膜、血管等，尤其在人体的皮肤和结缔组织中，含有大量的胶原蛋白。胶原蛋白作为一种结缔组织的粘合物质，对维护细胞、组织、器官的正常生理功能有重要作用。重组胶原蛋白以其低毒性、低抗原性、低免疫性，能引导细胞再生以及与人体相容的优点，而广泛应用于生物医药、化妆品、食品等行业中。

2、3,4-二羟基苯丙氨酸(dopa，多巴)，是贻贝粘蛋白所具有的结构成分，是利用酪氨酸酶对酪氨酸残基的修饰作用而形成。dopa残基由于氧化反应而相互交联，导致了贻贝粘蛋白和表面纤维形成强而持久的胶接，结合能力和寿命不受水的影响，且粘附作用对人没有毒性和免疫原性，具备广泛应用前景。iv型胶原蛋白氨基酸组成中含有酪氨酸残基，因此对来源于天然iv型胶原蛋白序列结构的表达产物进行多巴修饰再加工以获取含有dopa残基的重组iv型胶原蛋白本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种含多巴的重组IV型胶原蛋白的纯化生产方法，其特征在于：包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述一种含多巴的重组IV型胶原蛋白的纯化生产方法，其特征在于：所述预处理具体包括以下步骤：发酵结束后放罐，得到含有毕赤酵母工程菌表达所得重组IV型胶原蛋白的发酵液，将所述发酵液依次进行固液分离、过滤澄清及超滤浓缩。

3.根据权利要求1所述一种含多巴的重组IV型胶原蛋白的纯化生产方法，其特征在于：所述毕赤酵母工程菌表达的重组IV型胶原蛋白包括一个或多个由选取自天然IV型胶原蛋白中的肽段构成的融合序列单元。

4.根据权利要求1所述一种含多巴的重组IV型胶原蛋白的...

【技术特征摘要】

1.一种含多巴的重组iv型胶原蛋白的纯化生产方法，其特征在于：包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述一种含多巴的重组iv型胶原蛋白的纯化生产方法，其特征在于：所述预处理具体包括以下步骤：发酵结束后放罐，得到含有毕赤酵母工程菌表达所得重组iv型胶原蛋白的发酵液，将所述发酵液依次进行固液分离、过滤澄清及超滤浓缩。

3.根据权利要求1所述一种含多巴的重组iv型胶原蛋白的纯化生产方法，其特征在于：所述毕赤酵母工程菌表达的重组iv型胶原蛋白包括一个或多个由选取自天然iv型胶原蛋白中的肽段构成的融合序列单元。

4.根据权利要求1所述一种含多巴的重组iv型胶原蛋白的纯化生产方法，其特征在于：所述预处理中，超滤浓缩采用≤6kd卷式滤膜超滤系统，截留液电导率小于0.5ms/cm。

5.根据权利要求1所述一种含多巴的重组iv型胶原蛋白的纯化生产方法，其特征在于：所述磷酸盐为十二水合磷酸氢二钠和二水合磷酸二氢钠，所述硫酸铜、酪氨酸酶、mmc复合阳离子交换填料、十二水合磷酸氢二钠及二水合磷酸二氢钠在所述中间品料液中的添加量依次为0.01～0.02g/l、100～200u/l、25％～30％、0.9～1.1g/l及0.32～0.35g/l；所述酶促反应的具体条件为：于22～28℃下搅拌3～4h。

6...

【专利技术属性】
技术研发人员：郝东，侯增淼，赵硕文，魏文培，周浩，李敏，乔莎，张立峰，
申请(专利权)人：西安德诺海思医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：