【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及细胞免疫治疗领域，特别是涉及一种单克隆抗gprc5d抗体和抗gprc5d-car-nk细胞。
技术介绍
1、多发性骨髓瘤（mm）是仅次于非霍奇金淋巴瘤的第二大常见血液学恶性肿瘤。治疗mm的传统方法包括使用免疫调节剂、蛋白酶体抑制剂和抗cd38抗体。然而，这些治疗方法对mm患者疗效比较有限，而且总体预后通常较差。近年来，尽管在化疗、蛋白酶体抑制剂和免疫调节剂沙利度胺衍生物方面取得了很大的进展，但绝大多数患者最终仍会复发。因此，对新治疗方案存在着迫切需求。
2、与bcma相比，gprc5d具有更好的特异性，而且其表达不会随着时间减少，同时两者表达独立，既可单靶向也可以双靶向开发治疗药物，gprc5d的过表达与多发性骨髓瘤患者的不良预后和肿瘤负荷有关，这种关联使其成为治疗多发性骨髓瘤的潜在候选靶点。国内外已有企业利用领先的技术，入局gprc5d抗体和细胞治疗类药物的研制。
3、他克塔单抗是由强生研发的gprc5d x cd3双特异性抗体，在众多gprc5d靶向药中遥遥领先。gprc5d是表达在多发性骨髓瘤细胞上的靶标，其表达不会随着时间而减少，而cd3则是t细胞受体，与活化t细胞有关。
4、oric-321和oricar-017是原启生物针对适应症多发性骨髓瘤的两款gprc5d car-t产品。原启生物利用其专有的car-t技术平台，构建了独特信号激活域元件ori。该原件插入新一代 car结构后，能成倍提升记忆性免疫细胞的扩增效率，有效突破tme中的细胞外基质的物理屏障，显著增强car
5、mcarh109是由纪念斯隆凯瑟琳中心（mskcc）与优瑞科（eureka therapeutics）联合研发的另一款gprc5d car-t产品。在体外研究中，mcarh109展现了良好的疗效，同时其也在bcma耐药模型展现了较好的活性。该项ⅰ期剂量扩增研究入组多线治疗失败的mm患者（包括接受bcma car t细胞治疗后复发的患者），给予4个剂量水平的mcarh109治疗。
6、rg6234（gprc5dxcd3）是罗氏研发的一款gprc5d的t细胞衔接双特异性抗体，包含两个与靶点结合的蛋白域和一个与cd3结合的蛋白域。罗氏表示，这款双特异性抗体“最具潜力”。在治疗多发性骨髓瘤患者的早期临床试验中，orr超过71%，cr超过35%。
7、lm-305是一种新型的靶向gprc5d抗体偶联药物（adc），由一个抗gprc5d单克隆抗体、一个可降解的蛋白酶连接子和一个细胞毒素载荷单甲基奥瑞他汀e（mmae）组成。它是礼新医药基于独家adc平台自主研发的第二款产品。lm-305是全球首款进入临床阶段的gprc5d-adc。
8、目前对于gprc5d的药物，无论是car-t还是adc，或者双特异性抗体都是以gprc5d的特异性靶向mm肿瘤，以带来杀伤达到临床治疗效果。亲和力低使得治疗效果不佳，增大了肿瘤逃逸的风险，所以筛选出高亲和力的gprc5d序列是提高治疗效果的有效办法。
技术实现思路
1、专利技术要解决的问题
2、本专利技术旨在解决多发性骨髓瘤由于靶蛋白亲和力低，而造成的治疗效果不佳，复发率高的现状。
3、用于解决问题的方案
4、本专利技术提供了一种单克隆抗gprc5d抗体，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中，所述重链可变区包含以下序列中的一种或多种：
5、（1）如seq id no.1-3中任一项所示的氨基酸序列；
6、（2）与seq id no.1-3中任一项所示的氨基酸序列具有至少80%、82%、85%、87%、90%、92%、95%、96%、97%、98%、99%同一性的氨基酸序列，并且其保留如seq id no.1-3中任一项所示的氨基酸序列的活性；
7、（3）在seq id no.1-3中任一项所示的氨基酸序列中添加、取代、缺失或插入1个或多个氨基酸残基的氨基酸序列，并且其保留如seq id no.1-3中任一项所示的氨基酸序列的活性；
8、所述轻链可变区的氨基酸序列包含以下序列中的一种或多种：
9、（1）如seq id no.8-10中任一项所示的氨基酸序列；
10、（2）与seq id no.8-10中任一项所示的氨基酸序列具有至少80%、82%、85%、87%、90%、92%、95%、96%、97%、98%、99%同一性的氨基酸序列，并且其保留如seq id no.8-10中任一项所示的氨基酸序列的活性；
11、（3）在seq id no.8-10中任一项所示的氨基酸序列中添加、取代、缺失或插入1个或多个氨基酸残基的氨基酸序列，并且其保留如seq id no.8-10中任一项所示的氨基酸序列的活性；
12、其中，所述seq id no.1与seq id no.8成对，所述seq id no.2与seq id no.9成对，所述seq id no.3与seq id no.10成对。
13、优选地，所述抗体为结合于细胞表面gprc5d蛋白的单链抗体和/或双链抗体。
14、本专利技术还提供了一种单链可变区片段scfv，所述scfv包含重链可变区和轻链可变区；其中，所述重链可变区包含以下序列中的一种或多种：
15、（1）如seq id no.1-3中任一项所示的氨基酸序列；
16、（2）与seq id no.1-3中任一项所示的氨基酸序列具有至少80%、82%、85%、87%、90%、92%、95%、96%、97%、98%、99%同一性的氨基酸序列，并且其保留如seq id no.1-3中任一项所示的氨基酸序列的活性；
17、（3）在seq id no.1-3中任一项所示的氨基酸序列中添加、取代、缺失或插入1个或多个氨基酸残基的氨基酸序列，并且其保留如seq id no.1-3中任一项所示的氨基酸序列的活性；
18、所述轻链可变区的氨基酸序列包含以下序列中的一种或多种：
19、（1）如seq id no.8-10中任一项所示的氨基酸序列；
20、（2）与seq id no.8-10中任一项所示的氨基酸序列具有至少80%、82%、85%、87%、90%、92%、95%、96%、97%、98%、99%同一性的氨基酸序列，并且其保留如seq id no.8-10中任一项所示的氨基酸序列的活性；
21、（3）在seq id no.8-10中任一项所示的氨基酸序列中添加、取代、缺失或插入1个或多个氨基酸残基的氨基酸序列，并且其保留如seq id no.8-10中任一项所示的氨基酸序列的活性；
22、其中，所述seq id no.1与seq id no.8成对，所述seq id no.2与seq id no.9成对，所述seq id no.3与s本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种单克隆抗GPRC5D抗体，其特征在于，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中，所述重链可变区包含以下序列中的一种或多种：
2.根据权利要求1所述的抗体，其特征在于，所述抗体为结合于细胞表面GPRC5D蛋白的单链抗体和/或双链抗体。
3.一种单链可变区片段scFv，其特征在于，所述scFv包含重链可变区和轻链可变区；其中，所述重链可变区包含以下序列中的一种或多种：
4.根据权利要求3所述的scFv，其特征在于，所述scFv还包含连接肽；其中，所述连接肽的序列如SEQ ID NO.15所示，所述scFv包含以下序列中的一种或多种：
5.一种嵌合抗原受体CAR，其特征在于，所述CAR包含：
6.根据权利要求5所述的CAR，其特征在于，所述CAR具有下式I的结构：
7.一种药物偶联物，其特征在于，所述药物偶联物包含：
8.一种多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸编码根据权利要求1-2中任一项所述的抗体、或根据权利要求3-4中任一项所述的scFv、或根据权利要求5-6中任一项所述的CAR。
<...【技术特征摘要】
1.一种单克隆抗gprc5d抗体，其特征在于，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中，所述重链可变区包含以下序列中的一种或多种：
2.根据权利要求1所述的抗体，其特征在于，所述抗体为结合于细胞表面gprc5d蛋白的单链抗体和/或双链抗体。
3.一种单链可变区片段scfv，其特征在于，所述scfv包含重链可变区和轻链可变区；其中，所述重链可变区包含以下序列中的一种或多种：
4.根据权利要求3所述的scfv，其特征在于，所述scfv还包含连接肽；其中，所述连接肽的序列如seq id no.15所示，所述scfv包含以下序列中的一种或多种：
5.一种嵌合抗原受体car，其特征在于，所述car包含：
6.根据权利要求5所述的car，其特征在于，所述car具有下式i的结构：
7.一种药物偶联物，其特征在于，所述药物偶联物包含：
8.一种多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸编码根据权利要求1-2中任一项所述的抗体、或根据权利要求3-4中任一项所述的scfv、或根据权利要求5-6中任一项所述的car。
9.一种载体，其特征在于，所述载体包含根据权利要求8所述的多核苷酸；其中，所述载体选自dna、rna、质粒、慢病毒载体、腺病毒载体、逆转录病毒载...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘晓东，贺智勇，张晓芳，赵彩芝，孙莎，
申请(专利权)人：苏州艾凯利元生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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