【技术实现步骤摘要】
本申请涉及细胞转染，具体地，涉及一种聚乙烯亚胺(pei)介导的质粒转染方法。
技术介绍
1、hek293细胞、ne4细胞作为生物研究的重要工具细胞。由于其具有的扩增能力强，质粒转染效率高等特点，广泛用于基因治疗、蛋白治疗药物等领域，例如，慢病毒和腺相关病毒(aav)包装和真核蛋白表达系统的建立。这些实验的基础均建立在质粒的转染基础上。现在常见的质粒转染方法有higene、lipo系列、pei等阳离子转染试剂，其中pei兼顾了转染效率和转染成本，同时显示低细胞毒性，是最常用的转染试剂。那么，作为广泛应用的工具细胞，提高hek293细胞、ne4细胞等工具细胞的转染效率是一项非常关键的研究。
2、现有的pei介导的转染方法比较类似，普遍包括以下步骤：转染前培养细胞，稀释质粒，加入转染试剂pei，振荡混匀后静置得到pei-dna复合物，通常在室温条件下质粒和pei混匀后静置15～30分钟左右。用移液器轻轻吹打混合液，孵育培养。此方法下的慢病毒质粒转染效率大约在30％，转染方法仍有完善的空间。
技术实现思路
1、本申请的目的在于提供一种pei介导的质粒转染方法，以提高质粒转染效率。
2、本申请提供了一种pei介导的质粒转染方法，是将pei与质粒混匀，于55-80℃孵育25-35min后得到pei介导的质粒，并用于转染。
3、进一步地，所述细胞为hek293细胞或ne4细胞。
4、进一步地，转染hek293细胞时所述孵育温度为75℃，孵育时间为3
5、进一步地，转染ne4细胞时所述孵育温度为50-55℃，优选为55℃。
6、进一步地，所述方法包括以下步骤：
7、1)将细胞铺板孵育培养；
8、2)制备质粒混合物：当涉及慢病毒包装时，将包装质粒和表达质粒在opti-mem培养基中混匀，得到质粒混合物；当涉及腺相关病毒包装时，将表达质粒、衣壳质粒和helper质粒在opti-mem培养基中混匀，得到质粒混合物；
9、3)制备pei-dna混合物：将pei在opti-mem培养基中混匀，再将其与步骤2)所述质粒混合物混匀，以所述孵育温度和孵育时间进行孵育；
10、4)将所述pei-dna混合物加入待转染的细胞中，孵育培养。
11、进一步地，步骤1)使用的培养基为dmem高糖培养基。
12、进一步地，步骤1)细胞在5％co2、37℃条件下孵育16h-24h。
13、进一步地，步骤2)当涉及慢病毒包装时，将表达质粒、pmd2.g、vsvg和rev在opti-mem培养基中混匀，得到质粒混合物；当涉及腺相关病毒包装时，将表达质粒、aav衣壳质粒和helper质粒在opti-mem培养基中混匀，得到质粒混合物。
14、进一步地，当涉及慢病毒包装时，表达质粒、pmd2.g、vsvg和rev的质量比优选为10：7：5：4，质粒总量和opti-mem培养基的质量比为26：(10-30)。
15、进一步地，当涉及腺相关病毒包装时，表达质粒、aav衣壳质粒和helper质粒的质量比优选为35：35：100，质粒总量和opti-mem培养基的质量比为17：(10-30)。
16、进一步地，步骤3)所述质粒混合物与pei的质量比为1：(1-3)，如果超过该比例范围会影响转染效率。
17、进一步地，步骤4)将所述pei-dna混合物逐滴加入单层的待转染的细胞中，混匀，在5％-7％co2、37℃条件下孵育培养。
18、本申请提供的方法通过适当地提高转染温度提高了pei介导的质粒转染效率，继而提高了病毒包装效率。提高hek293细胞、ne4细胞等工具细胞的转染效率能够促进相关研究实验的高效进行。
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1.一种PEI介导的质粒转染方法，其特征在于，是将PEI与质粒混匀，于55-80℃孵育25-35min后得到PEI介导的质粒，并用于转染。
2.根据权利要求1所述的一种PEI介导的质粒转染方法，其特征在于，所述细胞为HEK293细胞或NE4细胞。
3.根据权利要求2所述的一种PEI介导的质粒转染方法，其特征在于，转染HEK293细胞时所述孵育温度为75℃，孵育时间为30min。
4.根据权利要求2所述的一种PEI介导的质粒转染方法，其特征在于，转染NE4细胞时所述孵育温度为50-55℃，优选为55℃。
5.根据权利要求1所述的一种PEI介导的质粒转染方法，其特征在于，包括以下步骤：
6.根据权利要求5所述的一种PEI介导的质粒转染方法，其特征在于，步骤1)使用的培养基为DMEM高糖培养基；
7.根据权利要求5所述的一种PEI介导的质粒转染方法，其特征在于，步骤2)当涉及慢病毒包装时，将表达质粒、pMD2.G质粒、VSVG质粒和REV质粒在Opti-MEM培养基中混匀，得到质粒混合物；当涉及腺相关病毒包装时，将
8.根据权利要求7所述的一种PEI介导的质粒转染方法，其特征在于，当涉及慢病毒包装时，质粒总量和Opti-MEM培养基的质量比为26：(10-30)；
9.根据权利要求5所述的一种PEI介导的质粒转染方法，其特征在于，步骤3)所述质粒混合物与PEI的质量比为1：(1-3)。
10.根据权利要求5所述的一种PEI介导的质粒转染方法，其特征在于，步骤4)将所述PEI-DNA混合物逐滴加入单层的待转染的细胞中，混匀，在5％-7％CO2、37℃条件下孵育培养。
...【技术特征摘要】
1.一种pei介导的质粒转染方法，其特征在于，是将pei与质粒混匀，于55-80℃孵育25-35min后得到pei介导的质粒，并用于转染。
2.根据权利要求1所述的一种pei介导的质粒转染方法，其特征在于，所述细胞为hek293细胞或ne4细胞。
3.根据权利要求2所述的一种pei介导的质粒转染方法，其特征在于，转染hek293细胞时所述孵育温度为75℃，孵育时间为30min。
4.根据权利要求2所述的一种pei介导的质粒转染方法，其特征在于，转染ne4细胞时所述孵育温度为50-55℃，优选为55℃。
5.根据权利要求1所述的一种pei介导的质粒转染方法，其特征在于，包括以下步骤：
6.根据权利要求5所述的一种pei介导的质粒转染方法，其特征在于，步骤1)使用的培养基为dmem高糖培养基；
7.根据权利要求5...
【专利技术属性】
技术研发人员：赵谦，卢惠迪，王韵婷，刘颖，顾雨春，吴理达，宋文鹏，王坚，
申请(专利权)人：呈诺再生医学科技北京有限公司，
类型：发明
国别省市：
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