【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分析化学，尤其涉及一种全自动二维液相/同位素比质谱法溯源检测尿液中阿卡地新的方法。
技术介绍
1、阿卡地新(即5-氨基，4-咪唑甲酰胺核苷，aicar)，一种核苷类似物。其结构式如下式所示：
2、
3、阿卡地新(aicar)是一种内源性的腺苷-磷酸活化蛋白激酶(ampk)激动剂，该酶在细胞代谢中起着至关重要的作用。在骨骼肌中，ampk的激活导致葡萄糖摄取增加，胰岛素敏感性增强，可以刺激脂肪酸氧化，促进肌肉重塑。同时还可以改善糖尿病患者的高血糖状态以及减轻肥胖和炎症，在运动代谢中也起着减缓疲劳等作用。aicar一定程度上可改善运动表现，尤其是耐力型运动，有研究表明，aicar可增强久坐小鼠的耐力，因此它被认为是一种运动模拟药物。鉴于此，世界反兴奋剂机构(wada)在2009年就已将其作为代谢调节剂列入其禁用清单。根据wada的技术文件，若尿液中的内源性物质及其代谢物的浓度超过限定阈值，则成为可疑样本。迄今为止，只有少数研究对aicar进行了系统的量化，aicar在人体内的自然浓度存在个体差异(性别、赛内/赛外采样方式，运动类型等是其影响因素)，因此不能仅凭尿液浓度确定其内外源性。因此，区别aicar的内外源性一直是兴奋剂检测的重点和难点。
4、同位素比质谱法(irms)在物质溯源方面有强大优势，利用物质的天然指纹图谱，测定其13c/12c的碳同位素比值(cir)，并与内源性参考化合物(erc)的cir做差值，作为阳性判据。但δ13c的准确度很大程度上依赖于分析物的纯度。由于尿液基质
技术实现思路
1、为解决上述技术问题，本专利技术提出了一种全自动二维液相/同位素比质谱法溯源检测尿液中阿卡地新的方法。
2、为实现上述目的，本专利技术提供了以下技术方案：
3、一种全自动二维液相/同位素比质谱法溯源检测尿液中阿卡地新的方法，包括以下步骤：
4、(1)将待测尿液进行spe处理，上样到第一维色谱系统；
5、(2)洗脱第一维色谱柱，检测器见峰切换阀，同时收集内源性参考化合物erc；
6、(3)切换阀，流出液进入第二维色谱系统；
7、(4)洗脱第二维色谱柱，检测器确定目标物收集窗口，得到目标组分aicar；
8、(5)采用lc-irms对aicar进行分析，获得δ13c值；
9、(6)根据aicar的δ13c值与erc的δ13c值的差值形成阳性判据，aicar的δ13c值与pd的δ13c值的差值大于4为阳性结果。
10、进一步的，步骤(1)中，所述待测尿液进行spe处理前，进行离心处理；
11、进行spe处理时，spe小柱为oais hlb 6cc(500mg)lp extraction cartridge。
12、进一步的，步骤(1)中，spe处理得到的洗脱液采用氮气吹干，水复溶后离心取上清。
13、进一步的，离心时间为25min，转速为12000rpm。
14、进一步的，步骤(1)中，所述第一维色谱系统中含有第一维色谱柱，所述第一维色谱柱为hypersil gold phenyl 250mm×4.6mm,5μm搭载保护柱；
15、上样到第一维色谱系统后，柱温为30℃，流动相为水和乙腈，流速为1ml/min，紫外检测器于195-244nm检测，收集含有erc的流出液。
16、进一步的，步骤(1)和(3)中，所述切换阀为六通阀，二维液相分离中心切割窗口为5.84-7.29min。
17、进一步的，步骤(3)中，所述第二维色谱系统中含有第二维色谱柱，所述第二维色谱柱为nucleodur 100-5nh2-rp 250mm×4.6mm,5μm；
18、所述流出液进入第二维色谱系统后，流动相为水和乙腈，流速1ml/min，紫外检测器于195-244nm检测，收集含有aicar的流出液。
19、进一步的，二维液相中组分aicar收集窗口为9.11-10.89min。
20、进一步的，步骤(5)中，lc-irms色谱柱采用phenomenex 00d-4723-an-kinetex2.6μmf5lc column 100×2.1mm，柱温为30℃。
21、进一步的，步骤(5)中，lc-irms的进样体积为20μl；流动相为纯水，流速0.1ml/min，反应助剂为0.2mol/l磷酸溶液和0.2mol/l过二硫酸钠溶液，流速0.120ml/min；样品反应温度为99.5℃。
22、与现有技术相比，本专利技术具有如下优点和技术效果：
23、本专利技术使用在线二维液相色谱系统，恒流泵通过切换阀连接到第一维色谱柱和第二维色谱柱，所述第一维色谱柱连接到检测器，再通过所述切换阀连接到所述第二维色谱柱/废液瓶/馏分收集器，所述第二维色谱柱连接到所述检测器，再通过所述切换阀连接到废液瓶/馏分收集器，物质在一维色谱柱上初步分离之后利用中心切割法将目标物截取保留到二维，在二维色谱柱上实现进一步分离，达到纯化目的。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种全自动二维液相/同位素比质谱法溯源检测尿液中阿卡地新的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的全自动二维液相/同位素比质谱法溯源检测尿液中阿卡地新的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述待测尿液进行SPE处理前，进行离心处理；
3.根据权利要求1所述的全自动二维液相/同位素比质谱法溯源检测尿液中阿卡地新的方法，其特征在于，步骤(1)中，SPE处理得到的洗脱液采用氮气吹干，水复溶后离心取上清。
4.根据权利要求3所述的全自动二维液相/同位素比质谱法溯源检测尿液中阿卡地新的方法，其特征在于，离心时间为25min，转速为12000rpm。
5.根据权利要求1所述的全自动二维液相/同位素比质谱法溯源检测尿液中阿卡地新的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述第一维色谱系统中含有第一维色谱柱，所述第一维色谱柱为Hypersil GOLD Phenyl 250mm×4.6mm,5μm搭载保护柱；
6.根据权利要求1所述的全自动二维液相/同位素比质谱法溯源检测尿液中阿卡地新的方法，其特征在于，步骤(1)和(3)中，
7.根据权利要求1所述的全自动二维液相/同位素比质谱法溯源检测尿液中阿卡地新的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述第二维色谱系统中含有第二维色谱柱，所述第二维色谱柱为NUCLEODUR 100-5NH2-RP 250mm×4.6mm,5μm；
8.根据权利要求1所述的全自动二维液相/同位素比质谱法溯源检测尿液中阿卡地新的方法，其特征在于，二维液相中组分AICAR收集窗口为9.11-10.89min。
9.根据权利要求1所述的全自动二维液相/同位素比质谱法溯源检测尿液中阿卡地新的方法，其特征在于，步骤(5)中，LC-IRMS色谱柱采用phenomenex 00D-4723-AN-Kinetex2.6μmF5LC Column 100×2.1mm，柱温为30℃。
10.根据权利要求1所述的全自动二维液相/同位素比质谱法溯源检测尿液中阿卡地新的方法，其特征在于，步骤(5)中，LC-IRMS的进样体积为20μL；流动相为纯水，流速0.1mL/min，反应助剂为0.2mol/L磷酸溶液和0.2mol/L过二硫酸钠溶液，流速0.120mL/min；样品反应温度为99.5℃。
...【技术特征摘要】
1.一种全自动二维液相/同位素比质谱法溯源检测尿液中阿卡地新的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的全自动二维液相/同位素比质谱法溯源检测尿液中阿卡地新的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述待测尿液进行spe处理前，进行离心处理；
3.根据权利要求1所述的全自动二维液相/同位素比质谱法溯源检测尿液中阿卡地新的方法，其特征在于，步骤(1)中，spe处理得到的洗脱液采用氮气吹干，水复溶后离心取上清。
4.根据权利要求3所述的全自动二维液相/同位素比质谱法溯源检测尿液中阿卡地新的方法，其特征在于，离心时间为25min，转速为12000rpm。
5.根据权利要求1所述的全自动二维液相/同位素比质谱法溯源检测尿液中阿卡地新的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述第一维色谱系统中含有第一维色谱柱，所述第一维色谱柱为hypersil gold phenyl 250mm×4.6mm,5μm搭载保护柱；
6.根据权利要求1所述的全自动二维液相/同位素比质谱法溯源检测尿液中阿卡地新的方法，其特征在于，步骤(1)和(3)中，所述切换阀为六通阀，二维液相分离中心切割窗口为5.8...
【专利技术属性】
技术研发人员：廖蕾，范婧怡，刘冰，卓悦，方娴，王宜让，向晓蒙，
申请(专利权)人：上海体育大学，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。