【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物化工，具体涉及一种脂肪酶甘油解酶活力的检测方法。
技术介绍
1、脂肪酶(lipase,ec 3.1.1.3)也被称为脂肪裂解酶、甘油酯水解酶或三酰基甘油酰基水解酶，属于催化水解反应的酶类，具有广泛的官能团特异性、化学生物活性、底物特异性、对映选择性，因此被用作如酯化、酯交换、酸解、醇解和氨基解等多种反应的生物催化剂。脂肪酶的特异性和高效性使其成为生物催化领域中备受青睐的催化剂之一，被广泛应用在食品、洗涤剂、化妆品、有机合成和制药等工业中。
2、脂肪酶催化甘油解反应属于上述醇解反应的一种，它能够催化植物油甘油解反应生成单甘脂，甘油二酯等甘油酯类化合物。甘油二酯能够调节体内的血脂、缓解、缩短糖尿病及其他肾脏疾病病程、预防血栓的形成等。单甘脂因其具有乳化、塑化和质地化的特性被广泛用于食品、药品等生产工业。可见，对脂肪酶甘油解反应的研究具有重要意义。
3、然而目前缺乏一种对甘油解反应过程中甘油解酶活力的有效检测方法。大部分脂肪酶的酶活测定方法都是根据其水解活性的特性，比如常见的橄榄油乳化滴定法，以对硝基苯酚酯为底物分光光度计法等。但是脂肪酶的甘油解活性与其水解活性并非完全可以对应，并不能真实的检测出脂肪酶的甘油解能力。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种脂肪酶甘油解酶活力的检测方法，具体通过以下技术方案实现：
2、一种脂肪酶甘油解酶活力的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：
3、s1、甘油标准曲线的绘制
4、s2、酶活力检测：以大豆油和甘油为底物，以脂肪酶为催化剂，进行甘油解反应，获得反应液；向反应液中加入无水乙醇，振荡洗脱后，取上清液加入无水乙醇稀释，得到稀释反应液；取稀释反应液至离心管中，加入乙醇水溶液和高碘酸钠醋酸铵溶液，振荡使之反应；而后加入乙酰丙酮醋酸铵溶液，进行反应，得到待测反应液；用紫外分光光度计于410nm处测定所述待测反应液的吸光度；对照所述标准曲线计算，得到脂肪酶甘油解酶活力。
5、本专利技术提供了一种通过测定甘油含量来检测脂肪酶甘油解酶活力的检测方法，所述方法是以大豆油和甘油为底物，以脂肪酶为催化剂进行甘油解反应生成单甘脂，甘油二酯等甘油酯类化合物的模式反应。其检测机理是反应液中的甘油可以被高碘酸氧化生成甲醛，甲醛在醋酸铵溶液中与两分子的乙酰丙酮发生汉奇吡啶合成反应(hantzsch反应)，生成黄色衍生物3，5-二乙酰-1，4-二氢二甲基吡啶，该物质在410nm处有特征吸收峰。通过在410nm处测定吸光度变化来确定3,5-二乙酰-1,4-二氢二甲基吡啶的含量，从而得到甘油的转化量，最后通过甘油的转化量计算出脂肪酶的甘油解酶活力。
6、作为优选，所述脂肪酶甘油解酶活力的定义(u)为：在特定反应条件下，每分钟转化1μmol的甘油所需的酶量为一个单位。
7、作为优选，脂肪酶甘油解酶活力的计算公式为：其中，c0为初始时加入的甘油浓度(μg/ml)，c为通过标准曲线计算出的反应结束后的甘油的浓度(μg/ml)；d为稀释倍数；v为反应体系的体积(ml)；m为甘油的相对分子质量；w为催化剂干物质的量(g)；t为反应的时间(min)。
8、作为优选，所述甘油解反应的条件为：转速200r/min，温度40～70℃，时间0.5～12h。
9、作为优选，所述甘油解反应的条件为：转速200r/min，温度60℃，时间1h。
10、作为优选，所述大豆油和甘油的摩尔比为(1～2):(1～2)。
11、作为优选，所述大豆油和甘油的摩尔比为2:1。
12、与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
13、本申请构建了一种通过测定甘油含量来检测脂肪酶甘油解酶活力的检测方法，所述甘油解酶活力的检测方法针对的反应体系为以大豆油和甘油为底物，以脂肪酶为催化剂进行甘油解反应生成单甘脂，甘油二酯等甘油酯类化合物的模式反应。通过绘制甘油标准曲线，并将待测反应液的紫外吸光度对甘油标准曲线的紫外吸光度相对比，可以通过测定甘油含量来快速确定脂肪酶甘油解酶活力的检测方法。检测方法简单可行，原料成本低，检测耗时少，仪器要求不高，适合常规生化实验室应用。
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1.一种脂肪酶甘油解酶活力的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种脂肪酶甘油解酶活力的检测方法，其特征在于，所述脂肪酶甘油解酶活力的定义(U)为：在特定反应条件下，每分钟转化1μmol的甘油所需的酶量为一个单位。
3.根据权利要求1所述的一种脂肪酶甘油解酶活力的检测方法，其特征在于，脂肪酶甘油解酶活力的计算公式为：其中，
4.根据权利要求1所述的一种脂肪酶甘油解酶活力的检测方法，其特征在于，所述甘油解反应的条件为：转速200r/min，温度40～70℃，时间0.5～12h。
5.根据权利要求4所述的一种脂肪酶甘油解酶活力的检测方法，其特征在于，所述甘油解反应的条件为：转速200r/min，温度60℃，时间1h。
6.根据权利要求1所述的一种脂肪酶甘油解酶活力的检测方法，其特征在于，步骤S2中，所述大豆油和甘油的摩尔比为(1～2):(1～2)。
7.根据权利要求6所述的一种脂肪酶甘油解酶活力的检测方法，其特征在于，步骤S2中，所述大豆油和甘油的摩尔比为2:1。
【技术特征摘要】
1.一种脂肪酶甘油解酶活力的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种脂肪酶甘油解酶活力的检测方法，其特征在于，所述脂肪酶甘油解酶活力的定义(u)为：在特定反应条件下，每分钟转化1μmol的甘油所需的酶量为一个单位。
3.根据权利要求1所述的一种脂肪酶甘油解酶活力的检测方法，其特征在于，脂肪酶甘油解酶活力的计算公式为：其中，
4.根据权利要求1所述的一种脂肪酶甘油解酶活力的检测方法，其特征在于，所述甘油解反应的条件为...
【专利技术属性】
技术研发人员：郑建永，魏萬，刘佳乐，章银军，汪钊，
申请(专利权)人：浙江工业大学，
类型：发明
国别省市：
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