【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及微生物培养领域，特别涉及o157:h7血清型大肠杆菌vbnc状态的诱导和抑制方法及其在水晶饼加工中的应用。
技术介绍
1、近年来，食源性致病菌的存在引起了广泛关注，其中o157:h7血清型大肠杆菌是典型的食源性致病菌之一，属于肠出血性大肠杆菌家族。o157:h7血清型大肠杆菌可以隐藏在多种食物中，包括剩菜、剩饭、未充分烹饪的牛肉制品、牛奶，甚至过夜的米面制品或糕点中。这种细菌引发的肠道疾病包括血性结肠炎、溶血性尿毒综合征和血栓性血小板减少性紫癜，对健康造成严重威胁，尤其危险的是对儿童和老年人。自1982年首次在美国报道以来，o157:h7血清型大肠杆菌引发的食品安全事故已在全球范围内引起广泛关注。这主要归因于o157:h7血清型大肠杆菌产生的志贺毒素或类志贺毒素，以及其他致病因子，如肠道聚集黏附耐热肠毒素和溶血素，这些毒素具有极强的毒性，可能导致严重的健康问题，甚至危及生命。
2、vbnc状态的大肠杆菌虽然无法通过传统培养方法检测和培养，但仍具有生存能力，这可能导致对致病菌数量的低估。vbnc状态的细菌体积较小，虽然代谢活性较弱，但仍能产生一些导致食品腐败变质的代谢产物，同时仍可能对人体健康构成潜在威胁。因此，了解水晶饼中大肠杆菌vbnc状态形成的诱因以及控制方法对食品安全具有重要的意义。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种o157:h7血清型大肠杆菌vbnc状态的诱导方法。
2、本专利技术的另一目的在于，
3、本专利技术的再一目的在于，提供上述诱导和抑制方法的应用。
4、本专利技术的目的通过下述技术方案实现：
5、一种o157:h7血清型大肠杆菌vbnc状态的诱导方法，包括如下步骤：
6、(1)大肠杆菌的活化
7、将甘油冻存的o157:h7血清型大肠杆菌划线接种于lb固体培养基上，过夜培养后，挑取单菌落接种于lb肉汤培养基中震荡培养，取对数期的o157:h7血清型大肠杆菌用作后续实验；
8、(2)vbnc状态的诱导和检测
9、将o157:h7血清型大肠杆菌接种于诱导培养基，低温培养，定期取样检测可培养活菌数，并使用荧光染料检测其vbnc状态。
10、步骤(1)所述的培养的条件为32～40℃培养；优选为37℃培养。
11、步骤(1)所述的对数期的o157:h7血清型大肠杆菌为培养至3～8h的o157:h7血清型大肠杆菌；优选为培养至4h。
12、步骤(2)所述的诱导培养基包括如下组分：
13、2.5～10g/l胰蛋白胨，1.25～5g/l酵母提取物，9～150g/l氯化钠，余量为水；优选的，还包括体积分数为0～1％的乙酸。
14、步骤(2)所述的低温培养为-30～10℃下培养；优选为-20～4℃。
15、步骤(2)所述的荧光染料为核酸染料syto 9和pi。
16、一种o157:h7血清型大肠杆菌vbnc状态的抑制方法，包括如下步骤：
17、在培养体系中加入体积分数为0.1～2％的乙酸，从而抑制o157:h7血清型大肠杆菌vbnc状态的形成。
18、所述的培养体系为lb培养基、诱导培养基或水晶饼。
19、一种抑制o157:h7血清型大肠杆菌形成vbnc状态的培养基，是在lb培养基中添加体积分数为0.1～2％的乙酸后得到。
20、上述o157:h7血清型大肠杆菌vbnc状态的诱导方法在食品检测中的应用。
21、上述o157:h7血清型大肠杆菌vbnc状态的抑制方法在食品加工中的应用。
22、所述的食品为水晶饼。
23、本专利技术相对于现有技术具有如下的优点及效果：
24、本专利技术首次在冷藏和冷冻条件下，对盐度、酸度和营养状态诱导o157:h7血清型大肠杆菌进入vbnc状态的影响进行探究，并得出在一定的酸度和营养浓度的条件下，可以消除vbnc状态的o157:h7血清型大肠杆菌，并成功对水晶饼中的vbnc状态o157:h7血清型大肠杆菌进行控制。应用于水晶饼实际生产可提高微生物检测结果的准确性和检测效率，有利于找到逃避检测的“隐形”污染源，为水晶饼中大肠杆菌的预防监控奠定基础。本专利技术还具有操作简单，效果明显等特点。
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1.一种O157:H7血清型大肠杆菌VBNC状态的诱导方法，其特征在于包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的诱导方法，其特征在于：
3.根据权利要求1所述的诱导方法，其特征在于：
4.根据权利要求1所述的诱导方法，其特征在于：
5.根据权利要求1所述的诱导方法，其特征在于：
6.一种O157:H7血清型大肠杆菌VBNC状态的抑制方法，其特征在于包括如下步骤：
7.根据权利要求6所述的抑制方法，其特征在于：
8.权利要求1～5任一所述的O157:H7血清型大肠杆菌VBNC状态的诱导方法在食品检测中的应用。
9.权利要求6～7任一所述的O157:H7血清型大肠杆菌VBNC状态的抑制方法在食品加工中的应用。
10.根据权利要求8或9所述的应用，其特征在于：
【技术特征摘要】
1.一种o157:h7血清型大肠杆菌vbnc状态的诱导方法，其特征在于包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的诱导方法，其特征在于：
3.根据权利要求1所述的诱导方法，其特征在于：
4.根据权利要求1所述的诱导方法，其特征在于：
5.根据权利要求1所述的诱导方法，其特征在于：
6.一种o157:h7血清型大肠杆菌vbnc状...
【专利技术属性】
技术研发人员：徐振波，钟菲凤，李雪杰，刘君彦，金河坡，
申请(专利权)人：华南理工大学，
类型：发明
国别省市：
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