本发明专利技术属于生物领域，公开了一种提高猪瘟疫苗产能的生产工艺，将细胞、微载体混合后在转瓶中进行流动悬浮培养，培养成微载体单层细胞后接种猪瘟病毒毒种；所述转瓶包括瓶体；所述瓶体的内壁设有多条沿内壁凸起的凸条，相邻两条凸条构成一条沿瓶体轴向延伸的凹槽；在垂直于瓶体的轴线方向上，所述瓶体的内壁的截面展开后构成一条连续起伏的曲线。该工艺采用微载体培养扩繁病毒所用的细胞，而实施该工艺的容器为适配此工艺的单独开发的转瓶，该转瓶具有多条轴向延伸的凹槽，相比传统的皱壁细胞培养转瓶、直壁细胞转瓶，由此扩繁的病毒滴度更高。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物领域，具体涉及一种提高猪瘟疫苗产能的生产工艺。
技术介绍
1、猪瘟是由猪瘟病毒引起的一种急性、发热和接触性传染病，在环境的突变或环境的恶化情况下，猪瘟极易爆发并传播，且在任何季节都可发生，且死亡率高，免疫猪瘟疫苗是预防猪瘟最有效的手段。
2、猪瘟病毒对细胞伤害较小，且为细胞分泌型病毒，具有无细胞病变的特点，相对传统转瓶培养，采用微载体培养具有一定的优势。
3、目前世界上微载体已广泛应用于疫苗、重组蛋白和单克隆抗体等研究领域，但采用微载体培养技术繁殖猪瘟病毒的报道较少。
4、因此，现阶段研发人员的目标在于：利用微载体培养技术积极探索猪瘟病毒的繁殖工艺，优化出一切可降本增效的生产技术。
技术实现思路
1、本专利技术的目的之一在于，提供一种提高猪瘟疫苗产能的生产工艺，该工艺采用微载体培养扩繁病毒所用的细胞，而实施该工艺的容器为适配此工艺的单独开发的转瓶，该转瓶具有多条轴向延伸的凹槽，相比传统的皱壁细胞培养转瓶、直壁细胞培养转瓶，由此扩繁的病毒滴度高。
2、为实现上述目的，本专利技术提供了一种提高猪瘟疫苗产能的生产工艺，将细胞、微载体混合后在转瓶中进行流动悬浮培养，培养成微载体单层细胞后接种猪瘟病毒毒种；
3、所述转瓶包括瓶体；
4、所述瓶体的内壁设有多条沿内壁凸起的凸条，相邻两条凸条构成一条沿瓶体轴向延伸的凹槽；在垂直于瓶体的轴线方向上，所述瓶体的内壁的截面展开后构成一条连续起伏的曲线。
>5、由于猪瘟病毒弱毒为细胞分泌型病毒，具有对细胞的伤害较小，无细胞病变的特点，致使本专利技术的微载体转瓶工艺更具优势，最后一代细胞培养在微载体上无需消化和传代，繁殖病毒后只需收取上清，无需冻融细胞或微载体，更加方便微载体的回收和利用，使用本工艺涉及的转瓶可反复利用，且价格低廉，使用的转瓶机价格较其他工艺的仪器设备更为便宜，且我国大部分企业均已购置大量的转瓶机，因此本专利技术无需配置新的设备即可实现细胞培养和病毒扩繁。6、在上述的生产工艺中，所述凹槽为10～40条，所述凹槽的深度为瓶体半径的5%～15%。
7、在本专利技术的一些实施案例中，所述凹槽的数量为10条、11条、12条、13条、14条、15条、16条、17条、18条、19条、20条、21条、22条、23条、24条、25条、26条、27条、28条、29条、30条、31条、32条、33条、34条、35条、36条、37条、38条、39条或40条；
8、所述凹槽的深度为瓶体半径的5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%或15%。
9、在上述的生产工艺中，所述凹槽为15～30条，所述凹槽的深度为瓶体半径的8%～12%。
10、在上述的生产工艺中，所述凸条由瓶体的壁向内凹陷形成，和/或，所述凸条的表面为弧面；和/或，所述凹槽的底面为平面或弧面。
11、在上述的生产工艺中，所述凸条的横截面为半圆形或半椭圆形。
12、在上述的生产工艺中，所述瓶体包括瓶身、与瓶身连接的瓶颈、连接在瓶颈上的瓶口；所述凹槽延伸至瓶颈位置，所述凹槽延伸至瓶颈靠近瓶口的位置。
13、在上述的生产工艺中，所述瓶体的材质为玻璃。
14、在上述的生产工艺中，包括以下步骤：
15、步骤1：细胞经传代放大至所需数量；
16、步骤2：将步骤1的细胞消化并与微载体一同转移至所述转瓶内，补加营养液；
17、步骤3：步骤2的细胞培养成微载体单层细胞后，换液培养并接种猪瘟病毒；
18、步骤4：收获猪瘟病毒，换液培养后继续收获病毒。
19、步骤5：重复步骤4。
20、在上述的生产工艺中，所述微载体在步骤2中补加营养液后的溶液中的浓度为1.25g/l～3.75g/l。
21、在本专利技术的一些实施案例中，所述微载体在步骤2中补加营养液后的溶液中的浓度为1.25g/l、1.5g/l、1.75g/l、2g/l、2.5g/l、3g/l、3.25g/l、3.5g/l、3.75g/l。
22、在上述的生产工艺中，所述细胞为猪睾丸st传代细胞和/或猪肾pk-15传代细胞；
23、在上述的生产工艺中，所述转瓶使用的细胞培养转瓶机转速的转速为200～800r/h。
24、在本专利技术的一些实施案例中，所述转瓶使用的细胞培养转瓶机转速的转速为200r/h、300r/h、400r/h、500r/h、600r/h、700r/h或800r/h；
25、在上述的生产工艺中，所述转瓶中溶液的体积相当于转瓶体积的8～12%。
26、在本专利技术的一些实施案例中，所述转瓶中溶液的体积相当于转瓶体积的8%、9%、10%、11%或12%。
27、本专利技术的有益效果如下：
28、本专利技术的生产工艺在转瓶生产工艺上进行专利技术创新，培养出高效价的猪瘟病毒液，更换的瓶子价格低廉，也无需额外购买仪器设备，以此实现高度降本增效的生产工艺优化。
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【技术保护点】
1.一种提高猪瘟疫苗产能的生产工艺，其特征在于，将细胞、微载体混合后在转瓶中进行流动悬浮培养，培养成微载体单层细胞后接种猪瘟病毒毒种；
2.根据权利要求1所述的生产工艺，其特征在于，所述凹槽为10～40条，所述凹槽的深度为瓶体半径的5%～15%。
3.根据权利要求2所述的生产工艺，其特征在于，所述凹槽为15～30条，所述凹槽的深度为瓶体半径的8%～12%。
4.根据权利要求1所述的生产工艺，其特征在于，所述凸条由瓶体的壁向内凹陷形成，和/或，所述凸条的表面为弧面；和/或，所述凹槽的底面为平面或弧面。
5.根据权利要求4所述的生产工艺，其特征在于，所述凸条的横截面为半圆形或半椭圆形。
6.根据权利要求1所述的生产工艺，其特征在于，所述瓶体包括瓶身、与瓶身连接的瓶颈、连接在瓶颈上的瓶口；所述凹槽延伸至瓶颈位置，所述凹槽延伸至瓶颈靠近瓶口的位置。
7.根据权利要求1所述的生产工艺，其特征在于，所述瓶体的材质为玻璃。
8.根据权利要求1～7任一所述的生产工艺，其特征在于，包括以下步骤：
9.根据权利要求8所述的生产工艺，其特征在于，所述微载体在步骤2中补加营养液后的溶液中的浓度为1.25g/L～3.75g/L。
10.根据权利要求1～7任一所述的生产工艺，其特征在于，所述细胞为猪睾丸ST传代细胞和/或猪肾PK-15传代细胞。
11.根据权利要求1～7任一所述的生产工艺，其特征在于，所述转瓶使用的细胞培养转瓶机转速为200～800r/h。
12.根据权利要求1～7任一所述的生产工艺，其特征在于，所述转瓶中溶液的体积相当于转瓶体积的8～12%。
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【技术特征摘要】
1.一种提高猪瘟疫苗产能的生产工艺，其特征在于，将细胞、微载体混合后在转瓶中进行流动悬浮培养，培养成微载体单层细胞后接种猪瘟病毒毒种；
2.根据权利要求1所述的生产工艺，其特征在于，所述凹槽为10～40条，所述凹槽的深度为瓶体半径的5%～15%。
3.根据权利要求2所述的生产工艺，其特征在于，所述凹槽为15～30条，所述凹槽的深度为瓶体半径的8%～12%。
4.根据权利要求1所述的生产工艺，其特征在于，所述凸条由瓶体的壁向内凹陷形成，和/或，所述凸条的表面为弧面；和/或，所述凹槽的底面为平面或弧面。
5.根据权利要求4所述的生产工艺，其特征在于，所述凸条的横截面为半圆形或半椭圆形。
6.根据权利要求1所述的生产工艺，其特征在于，所述瓶体包括瓶身、与瓶身连接的瓶颈、连接在瓶颈上...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈坚，赖月辉，穆光慧，张东卓，李复坤，涂玉蓉，林德锐，杨傲冰，齐冬梅，江梦雅，周晓敏，樊全宝，冯钰鑫，
申请(专利权)人：广东永顺生物制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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