猪瘟、高致病性猪繁殖与呼吸综合征二联耐热保护剂活疫苗及其制备方法技术

通过设计和优化冻干保护剂配方，并对冻干工艺进行优化，制备得到了猪瘟、高致病性猪繁殖与呼吸综合征二联耐热保护剂活疫苗(C株+GDr180株)，该疫苗经冻干后仍保持了较高的病毒存活率，经耐热试验后，其也保持较高的病毒滴度，表明所述耐热冻干保护剂对于病毒具有很好的冻干保护作用，且短时间的常温运输、贮存均不会对疫苗活性产生大的影响。均不会对疫苗活性产生大的影响。

【技术实现步骤摘要】
猪瘟、高致病性猪繁殖与呼吸综合征二联耐热保护剂活疫苗及其制备方法


[0001]本专利技术属于兽用生物制品
，具体涉及猪瘟、高致病性猪繁殖与呼吸综合征（CSF
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PRRS）二联耐热保护剂活疫苗及其制备方法。

技术介绍

[0002]猪瘟（Classical swine fever，CSF）和高致病性猪繁殖与呼吸综合征(俗称蓝耳病，Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS)是危害集约化养猪业的两大重要传染病，在我国猪群中广泛存在，给养猪业造成巨大的经济损失。猪瘟是由猪瘟病毒（Classical swine fever virus，CSFV）引起的猪的一种急性败血性、高度接触性传染类疾病，以出现高热、全身组织弥散性出血为其典型症状与病理特征。CSF 曾经给全世界养猪业造成重大经济损失，世界动物卫生组织将其规定为必须报告的动物传染病，我国也已将猪瘟定为一类烈性传染病，它属于危害严重、控制和扑灭的动物疫病、并且也需要采取紧急严厉、强制预防的疾病。猪繁殖与呼吸综合征是由PRRS病毒(PRRSV)引起的一种以妊娠母猪繁殖障碍以及仔猪呼吸道疾病为主要特征的重要传染病，主要临床症状是妊娠母猪繁殖障碍，表现为流产、产死胎、木乃伊胎、弱胎，各龄猪尤其是小猪出现呼吸道疾病，哺乳仔猪高死亡率、免疫抑制和持续性感染等，是目前严重影响世界养猪业健康发展的重要传染病之一，特别是2006年以来，我国及周边国家出现以高热、高发病率和高死亡率为主要特征的高致病性猪繁殖与呼吸综合征(HP PRRS)，给我国的养猪业造成了重大的经济损失。
[0003]调查发现，猪养殖业发展中猪病的单一典型病例在逐渐减少，而混合感染逐渐增加，混合感染疾病发生率不断的提高和猪场卫生条件差、消毒不规范和病死猪没有无害化处理有很大的关系，猪瘟和猪蓝耳病同时发生的话将严重影响猪养殖业的发展。大部分猪在患有该 2 种病混合感染后体温会升高至 40℃以上，病猪会精神萎靡、绝食、便秘等，病猪的眼屎会增加，而且腹部以及耳尖等部位会出现不同程度的蓝紫斑，在病情严重恶化时，病猪会有尖叫声出现，按压会有血斑病出现，而且淋巴结肿胀，用手触摸时患猪会有疼痛感，而且会发出尖叫声。怀孕母猪出现流产、弱胎等情况，甚至会发生难产。病猪的脾部会出现针尖状的出血等，这些都是混合感染的典型症状。
[0004]免疫接种是猪瘟和高致病性猪繁殖与呼吸综合征防制的重要措施。目前应用猪瘟兔化弱毒疫苗和高致病性猪繁殖与呼吸综合征疫苗对这两种疫病的防制起了很大的作用，如我公司的晶制
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猪瘟活疫苗（细胞源）、ST猪瘟活疫苗（传代细胞源）、高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗（GDr180株）、高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗（JXA1
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R株）等均受到养殖者的欢迎，在两者传染病的防控中发挥了重要作用。但猪用疫苗品种很多，在实际操作中，多针次、多剂量、多种免疫程序难以合理安排，既繁琐、费时、费力、增加成本，且容易造成漏种，直接影响预防效果。采用多联(或多价)疫苗免疫接种，以达到预防多种传染病的目的，同时，这两种疫病采取的免疫程序比较接近，这为猪瘟与高致病性猪繁殖与呼吸综合征二联活疫苗的研制提供了可能。为了达到一次免疫可有效预防和控制CSF与PRRS两种疫病
的发生与流行，减轻免疫接种的工作量，减少免疫次数，避免因频繁免疫所造成的免疫麻痹，相应减少了对猪群的应激。目前市场上仅有中牧实业生产的威联
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高致病性猪繁殖与呼吸综合征、猪瘟二联活疫苗（TJM
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F92株+C株），而我公司的猪瘟、高致病性猪繁殖与呼吸综合征耐热保护剂二联活疫苗(C株+GDr180株) 也已进入新兽药注册阶段。
[0005]在生产过程中，活疫苗通常以真空冷冻干燥的方法进行冻干处理，因此在生产过程中需要使用冻干保护剂，冻干保护剂对活疫苗的效价、储存、运输和使用过程均有至关重要的影响。普遍使用的保护剂有牛奶蔗糖保护剂、蔗糖明胶保护剂等常规保护剂，传统的冻干保护剂冻干后需要在
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15℃保存。在实际的临床使用中，运输和正规供应站可较好执行保存条件，养殖户或养殖企业多存在室温操作，接种用苗时间过长等问题，在此过程易造成少部分失效。对此，有必要完善猪瘟、高致病性猪繁殖与呼吸综合征耐热保护剂二联活疫苗的生产技术，能够适当提高疫苗保存温度，减少使用过程的损失，提高疫苗的稳定性具有重要的意义。

技术实现思路

[0006]为了满足养殖业对于良好运输和保存特性的猪瘟、高致病性猪繁殖与呼吸综合征二联活疫苗的市场需求，本专利技术旨在提供一种猪瘟、高致病性猪繁殖与呼吸综合征二联耐热保护剂活疫苗及其制备方法，通过添加耐热保护剂能够提高疫苗保存温度，减少使用过程的损失，提高疫苗的稳定性。
[0007]为解决以上技术问题，本专利技术采用如下技术方案：一种猪瘟、高致病性猪繁殖与呼吸综合征二联耐热保护剂活疫苗，包括猪瘟半成品、高致病性猪繁殖与呼吸综合征半成品和耐热保护剂，其中所述耐热保护剂由以下成分组成：蔗糖12%、明胶2%、酶解酪蛋白11%、海藻糖3%、D
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山梨醇2%、右旋糖苷1.5%、L
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谷氨酸钠2%、L
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精氨酸盐酸盐2%、乳糖酸钙0.5%、甘氨酸2%，余量为注射用水，其中百分含量为质量体积百分含量。
[0008]优选的，所述猪瘟半成品为病毒含量≥5
×
105RID/ml的猪瘟病毒兔化弱毒病毒液，所述猪瘟病毒兔化弱毒病毒为猪瘟病毒兔化弱毒C株。
[0009]优选的，所述高致病性猪繁殖与呼吸综合征半成品为病毒含量≥10
7.5
TCID
50
/ml的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒GDr180株病毒液。
[0010]优选的，所述耐热保护剂的制备方法为：1）以配制1000mL耐热冻干保护剂为例，按百分含量（w/v）称取各活性成分；2）将称取的蔗糖、明胶、酶解酪蛋白、海藻糖和右旋糖苷于注射用水中加热溶解，冷却至室温后调节pH=7.2并用注射用水定容至800mL，而后121℃ 30 min高压灭菌，得到甲液；3）将称取的D
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山梨醇、乳糖酸钙、L
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谷氨酸钠、L
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精氨酸盐酸盐、甘氨酸用适量注射用水溶解后，调节pH=7.2并定容至200mL，过滤除菌得到乙液；4）使用时，将甲液和乙液混合即得到所述的耐热冻干保护剂。
[0011]所述猪瘟、高致病性猪繁殖与呼吸综合征二联耐热保护剂活疫苗中猪瘟半成品、高致病性猪繁殖与呼吸综合征半成品和耐热保护剂的体积比为1:2:2。
[0012]所述猪瘟、高致病性猪繁殖与呼吸综合征二联耐热保护剂活疫苗的制备方法为：将猪瘟半成品、高致病性猪繁殖与呼吸综合征半成品和耐热保护剂按1:2:2的体积比例混合均匀，分装后进行冻干，冻干曲线为：产品预冻阶段：常温进箱，1 h内将板层温度降至
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种猪瘟、高致病性猪繁殖与呼吸综合征二联耐热保护剂活疫苗，包括猪瘟半成品、高致病性猪繁殖与呼吸综合征半成品和耐热保护剂，其中所述耐热保护剂由以下成分组成：蔗糖12%、明胶2%、酶解酪蛋白11%、海藻糖3%、D
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山梨醇2%、右旋糖苷1.5%、L
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谷氨酸钠2%、L
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精氨酸盐酸盐2%、乳糖酸钙0.5%、甘氨酸2%，余量为注射用水，其中百分含量为质量体积百分含量；所述耐热保护剂的制备方法为：1）以配制1000mL耐热冻干保护剂为例，按百分含量（w/v）称取各活性成分；2）将称取的蔗糖、明胶、酶解酪蛋白、海藻糖和右旋糖苷于注射用水中加热溶解，冷却至室温后调节pH=7.2并用注射用水定容至800mL，而后121℃ 30 min高压灭菌，得到甲液；3）将称取的D
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山梨醇、乳糖酸钙、L
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谷氨酸钠、L
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精氨酸盐酸盐、甘氨酸用适量注射用水溶解后，调节pH=7.2并定容至200mL，过滤除菌得到乙液；4）使用时，将甲液和乙液混合即得到所述的耐热冻干保护剂；所述猪瘟、高致病性猪繁殖与呼吸综合征二联耐热保护剂活疫苗中猪瘟半成品、高致病性猪繁殖与呼吸综合征半成品和耐热保...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈坚，侯高伟，俞昭旸，林德锐，赖月辉，穆光慧，吴文福，周晓敏，严思亮，樊全宝，张敬，
申请(专利权)人：广东永顺生物制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：