【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于蛋白质组学方向功能蛋白质组的研究领域，具体涉及在细胞或组织裂解液等复杂蛋白质混合物中检测能量状态发生变化的蛋白或鉴定配体的结合蛋白或测定配体与蛋白质的局部亲和力。
技术介绍
1、蛋白质是生命活动的主要承担者，传统的定量蛋白质组学多用于评价不同样品中蛋白质丰度的差异，而众多疾病的发生(例如帕金森综合征和阿尔兹海默症)或配体(包含药物，内源性代谢物等)与蛋白相互作用，特定蛋白质的丰度并没有发生改变，主要是蛋白的折叠状态，蛋白质的翻译后修饰或蛋白质的功能发生了改变(de souza n，et al,curropin struct biol,2020,60:57-65；cappelletti v，et al,cell,2021,184(2):545-559)。而这些丰度外的蛋白质性质的改变，则会影响蛋白质的热力学稳定性也即能量状态，因此发展能探测蛋白质能量状态变化的方法在疾病的诊断，代谢分子作用通路的分析，药物靶标的发现等领域均有重要意义。
2、自上而下(top-down)的质谱分析手段可以对完整蛋白直接分析进而监测蛋...
【技术保护点】
1.一种探测能量状态发生变化的蛋白的方法，其特征在于，该方法包含以下步骤：
2.根据权利要求1所述方法，其特征在于：所述蛋白的不同能量状态包含但不局限于通过下述一种或两种以上方式引起的能量状态的变化：
3.一种探测配体与蛋白亲和力的方法，其特征在于，该方法包含以下步骤：
4.根据权利要求3所述方法，其特征在于：配体可以是药物分子、体内代谢物、植物提取物、核酸分子、金属离子、肽段、抗体、蛋白质或其他可以和蛋白发生相互作用的各类物质中的一种或两种以上。
5.根据权利要求1或3所述方法，其特征在于：蛋白溶液包括含有一种蛋白质的...
【技术特征摘要】
1.一种探测能量状态发生变化的蛋白的方法，其特征在于，该方法包含以下步骤：
2.根据权利要求1所述方法，其特征在于：所述蛋白的不同能量状态包含但不局限于通过下述一种或两种以上方式引起的能量状态的变化：
3.一种探测配体与蛋白亲和力的方法，其特征在于，该方法包含以下步骤：
4.根据权利要求3所述方法，其特征在于：配体可以是药物分子、体内代谢物、植物提取物、核酸分子、金属离子、肽段、抗体、蛋白质或其他可以和蛋白发生相互作用的各类物质中的一种或两种以上。
5.根据权利要求1或3所述方法，其特征在于：蛋白溶液包括含有一种蛋白质的单一蛋白溶液或含有两种以上蛋白质的混合蛋白溶液；混合蛋白溶液包含来源于人、动物、植物或细菌的细胞或组织提取液；
6.根据权利要求1所述方法，其特征在于：将处于不同能量状态的蛋白溶液在其待测构象下，采用相同的酶切条件，按照酶和蛋白的质量比例加入酶，使处于不同能量状态的蛋白有不同的酶切程度，同时应能使得多数蛋白产生直接用于质谱鉴定的小肽段(分子量<5kda)；可选择的酶包括胰蛋白酶、谷氨酰蛋白内切酶、嗜热菌蛋白酶、蛋白酶k以及其他具有位点特异性或者非位点特异性酶的一种或两种以上；所用酶与蛋白的质量比例应在1:1-1:50之间，其中存在体积分数为1％-2％的蛋白酶抑制剂的情况下，优选1:1-1:10；同时应调整酶切时间在0.5-60min；根据不同酶保持活性的温度范围选择合适的酶切温度。
7.根据权利要求3所述方法，其特征在于：将多个配体浓度处理的配体组和对照组，分别按照酶和蛋白的质量比例加入酶，使结合配...
【专利技术属性】
技术研发人员：叶明亮，李柯佳，
申请(专利权)人：中国科学院大连化学物理研究所，
类型：发明
国别省市：
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