一种非特异过氧化酶的组合表达系统及其应用技术方案

技术编号:40601176 阅读:15 留言:0更新日期:2024-03-12 22:05
本发明专利技术涉及生物工程技术领域,尤其涉及一种非特异过氧化酶的组合表达系统及其应用。该非特异过氧化酶的组合表达系统,包括宿主细胞和转化入所述宿主细胞的表达载体,所述表达载体包括插入有编码非特异过氧化酶蛋白UPO的基因的第一表达载体和插入有编码二硫键异构酶PDI的基因的第二表达载体,所述宿主细胞为毕赤酵母(Komagataellaphaffii)GS115。本发明专利技术构建二硫键异构酶与非特异过氧化酶共表达的组合表达系统,使得非特异过氧化酶的表达量显著提高,由于二硫键异构酶在宿主胞内表达,而非特异过氧化酶能够分泌表达到宿主细胞外,所以收集的培养基上清中非特异过氧化酶浓度增加的同时不会产生其他蛋白,最终在5升生物反应器中非特异过氧化酶蛋白浓度可以达到333.3mg/L。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物工程,尤其涉及一种非特异过氧化酶的组合表达系统及其应用


技术介绍

1、2004年,人们在茶树菇cyclocybeaegerita(以前称为agrocybeaegerita)中发现了非特异性过氧化物酶(upo,e.c.1.11.2.1),这是一种具有单(过)氧酶活性的新型血红素硫酸盐过氧化物酶。迄今为止,已报道的非特异过氧化酶底物超过300种,而且数量还在不断增加。值得注意的是,在特定氧化有机分子中的非活化c-h键时,非特异过氧化酶和细胞色素p450酶具有相似的性质。细胞色素p450酶不仅能催化单氧合反应,还能进行脱烷基、s-氧化、n-氧化、醇和醛氧化以及脱卤和脱氮。然而,由于分离制备的不稳定性和复杂性,细胞色素p450酶的商业应用仍局限于全细胞氧化程序。相比之下,非特异过氧化酶是一种相对稳定的细胞外酶,具有活性高,不需要昂贵或复杂的氧化还原伙伴等优势。此外,非特异过氧化酶以自给自足的方式运行,由适量的过氧化氢"驱动"。过氧化氢既是主要的电子受体,也是氧的来源。因此,非特异过氧化酶被认为是一种自给自足的过氧酶。

2、目前非特异本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种非特异过氧化酶的组合表达系统,包括宿主细胞和转化入所述宿主细胞的表达载体,其特征在于,所述表达载体包括插入有编码非特异过氧化酶蛋白UPO的基因的第一表达载体和插入有编码二硫键异构酶PDI的基因的第二表达载体,所述宿主细胞为毕赤酵母(Komagataellaphaffii)GS115。

2.如权利要求1所述的非特异过氧化酶的组合表达系统,其特征在于,所述编码非特异过氧化酶蛋白UPO的基因来自于茶树菇(Cyclocybe aegerita)TM-A1菌。

3.如权利要求1或2所述的非特异过氧化酶的组合表达系统,其特征在于,所述编码非特异过氧化酶蛋白UPO的基因...

【技术特征摘要】

1.一种非特异过氧化酶的组合表达系统,包括宿主细胞和转化入所述宿主细胞的表达载体,其特征在于,所述表达载体包括插入有编码非特异过氧化酶蛋白upo的基因的第一表达载体和插入有编码二硫键异构酶pdi的基因的第二表达载体,所述宿主细胞为毕赤酵母(komagataellaphaffii)gs115。

2.如权利要求1所述的非特异过氧化酶的组合表达系统,其特征在于,所述编码非特异过氧化酶蛋白upo的基因来自于茶树菇(cyclocybe aegerita)tm-a1菌。

3.如权利要求1或2所述的非特异过氧化酶的组合表达系统,其特征在于,所述编码非特异过氧化酶蛋白upo的基因的核苷酸序列如seq id no.1所示。

4.如权利要求1所述的非特异过氧化酶的组合表达系统,其特征在于,所述编码二硫键异构酶蛋白pdi的基因的核苷酸序列如seq id no.2所示...

【专利技术属性】
技术研发人员:薛亚平赵理想沈其邹树平郑裕国
申请(专利权)人:浙江工业大学
类型:发明
国别省市:

网友询问留言 已有0条评论
  • 还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。

1