【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及检验检测，具体为一种肉类食品中牛、猪、鸡、鸭源性成分的四重实时荧光pcr定性检测方法及应用。更具体地，本申请能够实现牛肉食品中猪、鸡、鸭源性成分的定性检测，为牛肉食品造假事件提供技术支撑，有利于保证食品安全。
技术介绍
1、
2、肉源真实性鉴定是对肉类食品中的动物源性成分进行检测，从而达到对原料真假进行鉴别的目的。我国现行动物源性成分检测标准都为定性检测方法。此外，国、内外文献报道了大量的动物源性成分的定性检测方法。随着分子生物学技术的进步，研究方法正在从普通pcr向实时荧光pcr和多重实时荧光pcr发展。多重实时荧光pcr方法的优点为在同一反应体系中，实现对多种动物源性成分进行定性检测，节约人力、物力，大大提高检测效率。
3、目前，我国的检测标准体系尚无多重实时荧光pcr定性检测动物源性成分的相关标准，仅少数文献报道了多重实时荧光pcr定性检测动物源性成分的方法。已有研究结果显示，根据不同的目的，可以采用双重、三重、四重、五重、六重实时荧光pcr检测不同的动物种类组合。通过调查发现，市场上肉类食品掺假方式主要为，在牛羊肉中掺入猪肉、鸡肉、鸭肉，而牛、猪、鸡、鸭源性成分的四重实时荧光pcr定性检测方法未见报道。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于：针对肉类市场上肉类食品掺假方式主要为，在牛羊肉中掺入猪肉、鸡肉、鸭肉，而牛、猪、鸡、鸭源性成分的四重实时荧光pcr定性检测方法未见报道的问题，提供一种肉类食品中牛、猪、鸡、鸭源性成分的四重实时荧光
2、为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
3、在一个实施方式中，本专利技术提供一种鉴定牛、猪、鸡、鸭源性成分的引物及探针，其包含牛的上游引物序列、下游引物序列、探针，猪的上游引物序列、下游引物序列、探针，鸡的上游引物序列、下游引物序列、探针，以及鸭的上游引物序列、下游引物序列、探针：
4、牛的上游引物bos-f：ccctcgcccgcattg，
5、牛的下游引物bos-r：agcgacaggtcaagggagtca，
6、牛的探针bos-p：vic-cagctcaactcttagcc-bhq1，
7、扩增产物片段大小为80bp。
8、猪的上游引物sus-f：gcaaggccagggatcga，
9、猪的下游引物sus-r：agcagaaaccagccatggatt，
10、猪的探针sus-p：fam-ccgcgtcctcatgg-bhq1，
11、扩增产物片段大小为59bp。
12、鸡的上游引物gal-f：cgtccctcacttccatattgatg，
13、鸡的下游引物gal-r：atcttcactgtcaatgccttcaca，
14、鸡的探针gal-p：cy5-cctctttgtggatcctgt-bhq3，
15、扩增产物片段大小为71bp。
16、鸭的上游引物ana-f：cagtcccccctgcctagga，
17、鸭的下游引物ana-r：tcagtgtacaggtagcccctctct，
18、鸭的探针ana-p：texas-aagtgccagtatgcggg-bhq2，
19、扩增产物片段大小为63bp。
20、所述牛的上游引物序列如seq id no.1，所述牛的下游引物序列如seq id no.2，所述牛的探针的序列如seq id no.3；
21、所述猪的上游引物序列如seq id no.4，所述猪的下游引物序列如seq id no.5，所述猪的探针的序列如seq id no.6；
22、所述鸡的上游引物序列如seq id no.7，所述鸡的下游引物序列如seq id no.8，所述鸡的探针的序列如seq id no.9；
23、所述鸭的上游引物序列如seq id no.10，所述鸭的下游引物序列如seq idno.11，所述鸭的探针的序列如seq id no.12。
24、在一个实施方式中，本专利技术提供一种鉴定牛、猪、鸡、鸭成分的分子标记在鉴定肉类食品中牛、猪、鸡、鸭成分的用途，分子标记包含牛的上游引物序列、下游引物序列、探针，猪的上游引物序列、下游引物序列、探针，鸡的上游引物序列、下游引物序列、探针，以及鸭的上游引物序列、下游引物序列、探针：
25、牛的上游引物bos-f：ccctcgcccgcattg
26、牛的下游引物bos-r：agcgacaggtcaagggagtca
27、牛的探针bos-p：vic-cagctcaactcttagcc-bhq1
28、扩增产物片段大小为80bp。
29、猪的上游引物sus-f：gcaaggccagggatcga
30、猪的下游引物sus-r：agcagaaaccagccatggatt
31、猪的探针sus-p：fam-ccgcgtcctcatgg-bhq1；
32、扩增产物片段大小为59bp。
33、鸡的上游引物gal-f：cgtccctcacttccatattgatg
34、鸡的下游引物gal-r：atcttcactgtcaatgccttcaca
35、鸡的探针gal-p：cy5-cctctttgtggatcctgt-bhq3
36、扩增产物片段大小为71bp。
37、鸭的上游引物ana-f：cagtcccccctgcctagga
38、鸭的下游引物ana-r：tcagtgtacaggtagcccctctct
39、鸭的探针ana-p：texas-aagtgccagtatgcggg-bhq2
40、扩增产物片段大小为63bp。
41、在一个实施方式中，本专利技术提供一种试剂盒，所述试剂盒包含前述的鉴定牛、猪、鸡、鸭源性成分的引物及探针。
42、在一个实施方式中，本专利技术提供所述鉴定牛、猪、鸡、鸭源性成分的分子标记在鉴定肉类食品中牛、猪、鸡、鸭源性成分的试剂盒中的用途。
43、在一个实施方式中，本专利技术提供一种鉴定牛、猪、鸡、鸭源性成分的方法，包括如下步骤：
44、(1)提取测试样品的基因组dna；
45、(2)采用前述引物及探针对步骤(1)中提取的基因组dna进行扩增；
46、(3)出现特异性的牛、猪、鸡、鸭源性成分扩增信号的一种或几种，表明含有对应的动物源性成分。
47、作为优选地，所述步骤(2)采用荧光定量pcr进行扩增，兼容权利要求1所有引物、探针，权利要求2所有分子标记的荧光定量pcr的反应体系为：qpcr taqman probe mastermix 12.50μl，牛、鸡的上、下游引物各0.20本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种鉴定牛、猪、鸡、鸭源性成分的引物及探针，在鉴定肉类食品中牛、猪、鸡、鸭源性成分的用途，其特征在于，其包含牛的上游引物序列、下游引物序列、探针，猪的上游引物序列、下游引物序列、探针，鸡的上游引物序列、下游引物序列、探针，以及鸭的上游引物序列、下游引物序列、探针；
2.一种鉴定牛、猪、鸡、鸭源性成分的分子标记，在鉴定肉类食品中牛、猪、鸡、鸭源性成分的用途，其特征在于，分子标记包含牛的上游引物序列、下游引物序列、探针，猪的上游引物序列、下游引物序列、探针，鸡的上游引物序列、下游引物序列、探针，以及鸭的上游引物序列、下游引物序列、探针；
3.一种试剂盒，所述试剂盒包含前述权利要求1所述的鉴定牛、猪、鸡、鸭源性成分的引物及探针。
4.前述权利要求2所述鉴定牛、猪、鸡、鸭源性成分的分子标记在鉴定肉类食品中牛、猪、鸡、鸭源性成分的试剂盒中的用途。
5.一种鉴定牛、猪、鸡、鸭源性成分的方法，其特征在于，包括如下步骤：
6.根据权利要求5所述鉴定牛、猪、鸡、鸭源性成分的方法，其特征在于，所述步骤(2)采用荧光定量PCR进行扩增，兼
7.根据权利要求5所述鉴定牛、猪、鸡、鸭源性成分的方法，其特征在于，所述步骤(2)采用荧光定量PCR进行扩增，兼容权利要求1所有引物、探针，权利要求2所有分子标记的荧光定量PCR的反应条件为：95℃预变性5min；95℃变性10s，62℃退火和延伸30s，循环数为40；在第二阶段的退火和延伸时段，收集荧光信号。
...【技术特征摘要】
1.一种鉴定牛、猪、鸡、鸭源性成分的引物及探针，在鉴定肉类食品中牛、猪、鸡、鸭源性成分的用途，其特征在于，其包含牛的上游引物序列、下游引物序列、探针，猪的上游引物序列、下游引物序列、探针，鸡的上游引物序列、下游引物序列、探针，以及鸭的上游引物序列、下游引物序列、探针；
2.一种鉴定牛、猪、鸡、鸭源性成分的分子标记，在鉴定肉类食品中牛、猪、鸡、鸭源性成分的用途，其特征在于，分子标记包含牛的上游引物序列、下游引物序列、探针，猪的上游引物序列、下游引物序列、探针，鸡的上游引物序列、下游引物序列、探针，以及鸭的上游引物序列、下游引物序列、探针；
3.一种试剂盒，所述试剂盒包含前述权利要求1所述的鉴定牛、猪、鸡、鸭源性成分的引物及探针。
4.前述权利要求2所述鉴定牛、猪、鸡、鸭源性成分的分子标记在鉴定肉类食品中牛、猪、鸡、鸭源性成分的试剂盒中的用途。
5.一种鉴定牛、猪、鸡、鸭源性成分的方法，其特征在于，...
【专利技术属性】
技术研发人员：常丽娟，黄平，李源洪，付成平，王思，刘泳伶，隆艾琳，
申请(专利权)人：四川省农业科学院遥感与数字农业研究所成都农业遥感分中心，
类型：发明
国别省市：
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