【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药，尤其涉及到肿瘤疫苗设计，具体是涉及到一种survivin疫苗核酸序列、survivin疫苗及其应用。
技术介绍
1、肿瘤疫苗是一种重要的抗肿瘤药物形式。目前肿瘤免疫治疗的疫苗主要有细胞疫苗、dna疫苗、多肽疫苗和树突状细胞疫苗等四类。肿瘤疫苗通过激活患者自身免疫系统以清除或控制肿瘤，是治疗肿瘤的理想方法，其优势在于特异性抗肿瘤效应强，安全性相对较高，并能诱导免疫应答。
2、survivin(生存素)是凋亡抑制蛋白家族的新成员，survivin具有肿瘤特异性，高表达于多种肿瘤，但在正常细胞低表达或不表达，且与肿瘤细胞的分化增殖及浸润转移密切相关，是一种较为突出并广泛存在的肿瘤相关抗原。随着对survivin的深入研究，发现在多种恶性肿瘤中survivin的表达量都高于正常组织，如肺癌、乳腺癌、结肠癌、胃癌、卵巢癌、宫颈癌、前列腺癌等。其中最显著的是survivin在肝癌中的表达，其高表达率达到了90％以上。同时，survivin在肿瘤恶性程度的评价、预后及治疗方案的制定等方面也有着重要作用。
3、这种肿瘤特异性高表达分子使其成为了良好的肿瘤疫苗靶点。使用疫苗表达survivin，使抗原提呈细胞得到survivin抗原信息，并激活识别survivin的t细胞，可以实现对肿瘤细胞的杀伤。
4、在细胞内，核酸(dna或mrna)通过转录/翻译等步骤产生出可以作为抗原的蛋白。肿瘤疫苗由几百到几千个氨基酸组成，而每一种氨基酸对应多种不同的密码子，于是肿瘤疫苗的核酸序列可能的密码子组
技术实现思路
1、基于此，本专利技术的目的是提供一种高表达、具有强大激活特异性t细胞和诱导免疫记忆能力的survivin疫苗核酸序列。其是survivin蛋白表达量最高的最佳序列。利用该survivin疫苗序列制备的核酸疫苗有良好抗肿瘤效果。
2、实现上述目的的技术方案包括如下。
3、本专利技术的第一方面，在于提供一种survivin疫苗的核酸序列，其dna序列如seq idno.4所示。
4、一种survivin疫苗的核酸序列，其rna序列如seq id no.11所示。
5、本专利技术将野生型survivin核酸序列优化得到10条优化核酸序列如seq id no.1-10所示，将所述survivin优化核酸序列和野生型survivin核酸序列通过体外转录的方式制备成mrna，转染ct26细胞后，通过western blot的方法测定目标蛋白表达量，经过多方筛选，获得蛋白表达量最高的survivin疫苗核酸序列，所述survivin疫苗核酸序列的dna如seq id no.4所示。
6、本专利技术的第二方面，在于提供含有上述survivin疫苗核酸序列的survivin疫苗，其由上述survivin疫苗核酸序列和药学上可接受的载体制备而成。
7、在其中的一些实施例中，所述survivin疫苗是由本专利技术的survivin mrna序列和包封所述mrna的载体材料制备而成的颗粒，所述载体材料可以选自鱼精蛋白、脂质纳米颗粒(lnp)、高分子材料和无机纳米颗粒。在优选的实施方案中，所述载体材料是脂质纳米颗粒((lipid nanoparticles)。
8、在一些实施方案中，lnp可以包含离子化脂质、聚乙二醇化脂质、胆固醇及衍生物和中性辅助磷脂中的一种或多种。例如，lnp可以包含阳离子磷脂(ionizable lipids)，中性辅助磷脂，胆固醇，聚乙二醇修饰的磷脂(pegylated lipid)的任一种，其中任意两种、任意三种或全部四种的组合。
9、在其中一些实施方案中，所述脂质纳米颗粒包括sm102或mc3。
10、在其中一些优选的实施方案中，所述脂质纳米颗粒为sm102。
11、在其中一些优选的实施方案中，所述脂质纳米颗粒包载的survivin mrna的疫苗中：所述脂质纳米颗粒的材料为：质量比50±2：10±1：38.5±1：1.5±0.1的sm102或dlin-mc3-dma：dspc：胆固醇：dmg-peg2000；
12、当survivin mrna的浓度为100ng/μl、脂质纳米颗粒中sm102浓度为5.62mg/ml，总脂质体浓度为10.28mg/ml时，survivin mrna溶液与脂质纳米颗粒溶液的用量比为3:1。
13、本专利技术的第三方面，在于提供上述survivin疫苗的核酸序列或上述survivin疫苗在制备防治肿瘤的药物中的应用。
14、所述肿瘤是survivin蛋白在瘤内高表达的肿瘤或是导致survivin基因表达上调的肿瘤，例如是肺癌、乳腺癌、结肠癌、胃癌、卵巢癌、宫颈癌、前列腺癌、肝癌等。
15、在其中一些实施方案中，所述应用包括任一上述survivin疫苗的核酸序列或上述疫苗在诱导哺乳动物产生特异性t细胞和/或免疫记忆t细胞。
16、与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
17、本专利技术对以survivin为靶点的肿瘤疫苗进行密码子优化，从优化的10条序列中再筛选出蛋白表达量最高的序列survivin-038作为靶点的最优序列。通过实验证明该最佳survivin-038疫苗序列具有强大的激活特异性t细胞和诱导免疫记忆的能力，具有很好的免疫原性和疫苗效力。利用该survivin-038疫苗序列制备的核酸疫苗有良好抗肿瘤效果，为此靶点开发治疗肿瘤的药物提供依据。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种Survivin疫苗的核酸序列，其DNA序列如SEQ ID NO.4所示。
2.一种Survivin疫苗的核酸序列，其mRNA序列如SEQ ID NO.11所示。
3.一种Survivin疫苗，其特征在于，其由权利要求1或2所述的核酸序列和药学上可接受的载体制备而成。
4.根据权利要求3所述的Survivin疫苗，其特征在于，所述Survivin疫苗由权利要求2中所述的mRNA序列和包封所述mRNA的载体材料制备而成的颗粒，所述载体材料选自鱼精蛋白、脂质纳米颗粒、高分子材料和无机纳米颗粒。
5.根据权利要求4所述的Survivin疫苗，其特征在于，所述载体材料是脂质纳米颗粒。
6.根据权利要求5所述的Survivin疫苗，其特征在于，所述脂质纳米颗粒是SM102或MC3。
7.根据权利要求6所述的Survivin疫苗，其特征在于，所述脂质纳米颗粒为SM102。
8.权利要求1或2所述Survivin的核酸序列在制备防治肿瘤的疫苗中的应用。
9.权利要求所3-7任一项所述Surv
10.根据权利要求8或9所述的应用，其特征是，所述应用包括所述Survivin的核酸序列或所述Survivin疫苗在诱导哺乳动物产生特异性T细胞和/或免疫记忆T细胞。
...【技术特征摘要】
1.一种survivin疫苗的核酸序列，其dna序列如seq id no.4所示。
2.一种survivin疫苗的核酸序列，其mrna序列如seq id no.11所示。
3.一种survivin疫苗，其特征在于，其由权利要求1或2所述的核酸序列和药学上可接受的载体制备而成。
4.根据权利要求3所述的survivin疫苗，其特征在于，所述survivin疫苗由权利要求2中所述的mrna序列和包封所述mrna的载体材料制备而成的颗粒，所述载体材料选自鱼精蛋白、脂质纳米颗粒、高分子材料和无机纳米颗粒。
5.根据权利要求4所述的survivin疫苗，其特征在于...
【专利技术属性】
技术研发人员：潘有东，马璐，车令君，张梦雅，卫静，朱蕾，王弈，万季，赵钊，
申请(专利权)人：北京新合睿恩生物医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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