MERTK肽及其用途制造技术

技术编号：40577954 阅读：4 留言：0更新日期：2024-03-06 17:19

本发明专利技术公开提供了包含人MERTK的氨基酸序列的肽及其用于产生和筛选抗体的用途。

全部详细技术资料下载

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】

1.本专利技术公开提供了包含人mertk的氨基酸序列的多肽及其用于产生和筛选抗体的用途。

技术介绍

0、2.
技术介绍

1、mer酪氨酸激酶(mertk)，也称为c-聚体、mer、原癌基因c-聚体、受体酪氨酸激酶mertk、酪氨酸-蛋白激酶mer stk激酶、rp38或mgc133349，它是受体酪氨酸激酶的tam家族成员，其还包括axl和tyro3激酶。mertk通过经由配体(最值得注意地，gas-6，可溶性蛋白)结合的激活，从细胞间隙转导信号。结合至mertk的gas-6诱导其胞内域上的mertk的自磷酸化，从而导致下游信号激活(cummings ct等人,(2013)clin cancer res 19:5275-5280；verma a等人,(2011)mol cancer ther 10:1763-1773)。

2、mertk以膜结合和可溶性形式两者存在。可以切割胞外域以产生可溶性胞外域，其假设起到诱骗受体的作用以通过降低可溶性gas-6配体结合膜-结合的mertk的能力和/或可用性来负调控细胞上的mertk受体的激活(sather s等人,(2007)blood 109:1026-1033)。因此，mertk具有与癌症发展、血管生成和转移有关的双重作用。一方面，内皮细胞上mertk的gas-6激活导致共培养系统中通过癌细胞的内皮细胞招募的抑制。内皮细胞招募是使得肿瘤血管生成、肿瘤生长和转移的癌细胞的关键特征。然而，另一方面，mertk在癌细胞中起相反作用，其中它的过表达导致了转移提高，这可能是通

3、在历史上，由于认为mertk仅作为致癌基因起作用，因此对于产生用于治疗癌症的mertk抑制剂(例如，化合物unc1062，它是作为抗癌化合物开发的有效的小分子mertk抑制剂)投入了工作(liu j等人,(2013)eur j med chem 65:83–93；cummings ct等人,(2013)clin cancer res 19:5275-5280；verma a等人,(2011)mol cancer ther 10:1763-1773)。近年来，抗体-药物缀合物(adc)已成为最快速发展的癌症治疗种类之一(beck a等人,(2017)nat rev drug discov 16:315-337；peters c and brown s,(2015)biosci rep35:art:e00225)。已描述了包含抗-mertk抗体的adc，参见，例如，国际专利申请公开no.wo2019/005756和wo 2020/176497。

4、已描述了抗-mertk抗体，参见，例如，国际专利申请公开no.wo 2016/106221、no.wo 2019/005756和no.wo 2020/176497。

5、本文中对参考文献的引用不应视为承认该参考文献是本专利技术公开的现有技术。

6、3.专利技术概述

7、本专利技术提供了多肽，所述多肽包含人mertk(seq id no：1)的邻接氨基酸序列或所述邻接氨基酸序列的变体，其中所述邻接氨基酸序列包含人mertk序列(seq id no：1)的氨基酸数目379-423和人mertk序列(seq id no：1)的不大于400个邻接氨基酸，并且其中所述变体(a)相对于seq id no：1在邻接氨基酸序列中具有一个或多个氨基酸替换、插入或缺失，且(b)相对于seq id no：1的氨基酸数目379-391和404-423中的每一个具有至少90％的序列同一性，或者相对于seq id no：1的氨基酸数目379-391和404-423仅具有保守替换并且相对于seq id no：1的氨基酸数目379-391和404-423具有不大于两个保守替换。

8、在具体的实施方式中，邻接氨基酸序列包含seq id no：1的氨基酸数目286-484。

9、在具体的实施方式中，所述多肽包含邻接氨基酸序列。

10、在具体的实施方式中，所述多肽包含变体。在具体的实施方式中，所述变体相对于seq id no：1的氨基酸数目379-391和404-423中的每一个具有至少90％的序列同一性。在具体的实施方式中，所述变体相对于seq id no：1的氨基酸数目379-391和404-423仅具有保守替换并且相对于seq id no：1的氨基酸数目379-391和404-423具有不大于两个保守替换。在具体的实施方式中，所述变体相对于seq id no：1的氨基酸数目286-484中的每一个具有至少90％的序列同一性。在具体的实施方式中，所述变体相对于seq id no：1的氨基酸数目286-484仅具有保守替换。

11、在具体的实施方式中，所述邻接氨基酸序列包含人mertk序列(seq id no：1)的不超过300个邻接氨基酸。

12、在具体的实施方式中，所述邻接氨基酸序列包含人mertk序列(seq id no：1)的不超过200个邻接氨基酸。

13、在具体的实施方式中，所述邻接氨基酸序列包含人mertk序列(seq id no：1)的不超过100个邻接氨基酸。

14、在具体的实施方式中，所述邻接氨基酸序列包含人mertk序列(seq id no：1)的不超过50个邻接氨基酸。

15、在具体的实施方式中，所述多肽由所述邻接氨基酸序列组成。

16、在具体的实施方式中，所述多肽是包含连接至第二氨基酸序列的邻接氨基酸序列的融合蛋白。在具体的实施方式中，所述第二氨基酸序列包含佐剂的氨基酸序列。在具体的实施方式中，所述佐剂是钥孔血蓝蛋白。在具体的实施方式中，所述第二氨基酸序列包含标签或标记。

17、在具体的实施方式中，所述多肽处于冻干形式。

18、本专利技术还提供了包含结合至分子的多肽的缀合物。在具体的实施方式中，所述分子是佐剂。在具体的实施方式中，所述分子共价结合至所述多肽。在具体的实施方式中，所述缀合物处于冻干形式。

19、本专利技术还提供了免疫原性组合物，其包含多肽或缀合物；和适合于免疫目的的载体。在具体的实施方式中，免疫原性组合物还包含佐剂。

20、本专利技术还提供了产生抗-mertk抗体的方法，所述方法包括(a)用所述多肽、缀合物或免疫原性组合物免疫非人哺乳动物；(b)使来自非人哺乳动物的抗体产生细胞永生化以产生永生化抗体产生细胞；(c)选择分泌免疫特异性结合mertk的抗体的永生化抗体产生细胞；和(d)在细胞培养物中培养所述永生化抗体产生细胞从本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.多肽，所述多肽包含人MERTK(SEQ ID NO：1)的邻接氨基酸序列或所述邻接氨基酸序列的变体，其中所述邻接氨基酸序列包含人MERTK序列(SEQ ID NO：1)的氨基酸数目379-423和人MERTK序列(SEQ ID NO：1)的不大于400个邻接氨基酸，并且其中所述变体(a)相对于SEQ ID NO：1在邻接氨基酸序列中具有一个或多个氨基酸替换、插入或缺失，且(b)相对于SEQ ID NO：1的氨基酸数目379-391和404-423中的每一个具有至少90％的序列同一性，或者相对于SEQ ID NO：1的氨基酸数目379-391和404-423仅具有保守替换并且相对于SEQID NO：1的氨基酸数目379-391和404-423具有不大于两个保守替换。

2.根据权利要求1所述的多肽，其中所述邻接氨基酸序列包含SEQ ID NO：1的氨基酸数目286-484。

3.根据权利要求1所述的多肽，其包含所述邻接氨基酸序列。

4.根据权利要求2所述的多肽，其包含所述邻接氨基酸序列。

5.根据权利要求1所述的多肽，其包含所述变体。

6.根据权利要求5所述的多肽，其中所述变体相对于SEQ ID NO：1的氨基酸数目379-391和404-423中的每一个具有至少90％的序列同一性。

7.根据权利要求5所述的多肽，其中所述变体相对于SEQ ID NO：1的氨基酸数目379-391和404-423仅具有保守替换并且相对于SEQ ID NO：1的氨基酸数目379-391和404-423具有不大于两个保守替换。

8.根据权利要求5所述的多肽，其中所述变体相对于SEQ ID NO：1的氨基酸数目286-484具有至少90％的序列同一性。

9.根据权利要求5所述的多肽，其中所述变体相对于SEQ ID NO：1的氨基酸数目286-484仅具有保守替换。

10.根据权利要求1-9中任一项所述的多肽，其中所述邻接氨基酸序列包含人MERTK序列(SEQ ID NO：1)的不超过300个邻接氨基酸。

11.根据权利要求1-9中任一项所述的多肽，其中所述邻接氨基酸序列包含人MERTK序列(SEQ ID NO：1)的不超过200个邻接氨基酸。

12.根据权利要求1、3和5-7中任一项所述的多肽，其中所述邻接氨基酸序列包含人MERTK序列(SEQ ID NO：1)的不超过100个邻接氨基酸。

13.根据权利要求1、3和5-7中任一项所述的多肽，其中所述邻接氨基酸序列包含人MERTK序列(SEQ ID NO：1)的不超过50个邻接氨基酸。

14.根据权利要求1-13中任一项所述的多肽，其由所述邻接氨基酸序列组成。

15.根据权利要求1-13中任一项所述的多肽，其中所述多肽是包含连接至第二氨基酸序列的所述邻接氨基酸序列的融合蛋白。

16.根据权利要求15所述的多肽，其中所述第二氨基酸序列包含佐剂的氨基酸序列。

17.根据权利要求16所述的多肽，其中所述佐剂是钥孔血蓝蛋白。

18.根据权利要求15所述的多肽，其中所述第二氨基酸序列包含标签或标记。

19.根据权利要求1-18中任一项所述的多肽，其中所述多肽处于冻干形式。

20.缀合物，其包含结合至分子的根据权利要求1-18中任一项所述的多肽。

21.根据权利要求20所述的缀合物，其中所述分子是佐剂。

22.根据权利要求20或21所述的缀合物，其中所述分子共价结合至所述多肽。

23.根据权利要求20-22中任一项所述的缀合物，其中所述缀合物处于冻干形式。

24.免疫原性组合物，其包含根据权利要求1-18中任一项所述的多肽或者根据权利要求20-22中任一项所述的缀合物；和适合于免疫目的的载体。

25.根据权利要求24所述的免疫原性组合物，其中所述组合物还包含佐剂。

26.产生抗-MERTK抗体的方法，所述方法包括(a)用根据权利要求1-18中任一项所述的多肽、根据权利要求20-22中任一项所述的缀合物或者根据权利要求24或25所述的免疫原性组合物免疫非人哺乳动物；(b)使来自所述非人哺乳动物的抗体产生细胞永生化以产生永生化抗体产生细胞；(c)选择分泌免疫特异性结合MERTK的抗体的永生化抗体产生细胞；和(d)在细胞培养物中培养所述永生化抗体产生细胞从而产生抗体。

27.根据权利要求26所述的方法，其中通过包括所述抗体产生细胞与骨髓瘤细胞融合以产生抗体产生杂交瘤的方法实施使抗体产生细胞永生化的步骤。...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

1.多肽，所述多肽包含人mertk(seq id no：1)的邻接氨基酸序列或所述邻接氨基酸序列的变体，其中所述邻接氨基酸序列包含人mertk序列(seq id no：1)的氨基酸数目379-423和人mertk序列(seq id no：1)的不大于400个邻接氨基酸，并且其中所述变体(a)相对于seq id no：1在邻接氨基酸序列中具有一个或多个氨基酸替换、插入或缺失，且(b)相对于seq id no：1的氨基酸数目379-391和404-423中的每一个具有至少90％的序列同一性，或者相对于seq id no：1的氨基酸数目379-391和404-423仅具有保守替换并且相对于seqid no：1的氨基酸数目379-391和404-423具有不大于两个保守替换。

2.根据权利要求1所述的多肽，其中所述邻接氨基酸序列包含seq id no：1的氨基酸数目286-484。

3.根据权利要求1所述的多肽，其包含所述邻接氨基酸序列。

4.根据权利要求2所述的多肽，其包含所述邻接氨基酸序列。

5.根据权利要求1所述的多肽，其包含所述变体。

6.根据权利要求5所述的多肽，其中所述变体相对于seq id no：1的氨基酸数目379-391和404-423中的每一个具有至少90％的序列同一性。

7.根据权利要求5所述的多肽，其中所述变体相对于seq id no：1的氨基酸数目379-391和404-423仅具有保守替换并且相对于seq id no：1的氨基酸数目379-391和404-423具有不大于两个保守替换。

8.根据权利要求5所述的多肽，其中所述变体相对于seq id no：1的氨基酸数目286-484具有至少90％的序列同一性。

9.根据权利要求5所述的多肽，其中所述变体相对于seq id no：1的氨基酸数目286-484仅具有保守替换。

10.根据权利要求1-9中任一项所述的多肽，其中所述邻接氨基酸序列包含人mertk序列(seq id no：1)的不超过300个邻接氨基酸。

11.根据权利要求1-9中任一项所述的多肽，其中所述邻接氨基酸序列包含人mertk序列(seq id no：1)的不超过200个邻接氨基酸。

12.根据权利要求1、3和5-7中任一项所述的多肽，其中所述邻接氨基酸序列包含人mertk序列(seq id no：1)的不超过100个邻接氨基酸。

13.根据权利要求1、3和5-7中任一项所述的多肽，其中所述邻接氨基酸序列包含人mertk序列(seq id no：1)的不超过50个邻接氨基酸。