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【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物检测领域,尤指一种用于副流感病毒快速分型检测试剂盒及其用法。
技术介绍
1、副流感病毒(piv)属副粘病毒科,副粘病毒亚科。piv根据基因型和抗原性的不同可分为4个不同型,分别为piv1型~piv-4型,piv1型和piv-3型属于呼吸道病毒属,piv-2型和piv-4型属于腮腺炎病毒属。piv1型~piv-4型是引起人类(尤其是在婴幼儿中)上下呼吸道感染的重要病原体,是婴儿与幼年儿童呼吸道的重要病原体,6个月以内婴儿肺炎和细支气管炎的第二位常见病原体。引起感冒症状如:发烧、喉咙痛等。导致反复感染的下呼吸道疾病,如肺炎、支气管炎和细支气管炎,特别是在婴幼儿、老年人和有免疫缺陷人群中。许多其他的呼吸道病毒包括鼻病毒、流感病毒、偏肺病毒等感染引起的症状与副流感病毒的症状类似,难以明确区分,仅依靠临床症状及常规的检测方法进行病毒病原的确定并不可靠。因此早期快速诊断呼吸道病毒感染能够及时指导临床治疗,为合理选择抗病毒、抗细菌药物提供依据,并在避免滥用抗生素方面具有重要意义。本试剂盒用于定性检测上、下呼吸道样本中副流感病毒1、2、3、4型核酸。
技术实现思路
1、本专利技术提供一种用于副流感病毒快速分型检测试剂盒及其用法。在同一反应管中同时对副流感病毒1、2、3、4亚型进行特异性快速、便捷、高效的方法进行分型快速检测,时对扩增体系增加了内质控,监控采样和核酸提取,并具有良好的灵敏度和特异性。
2、本专利技术提供了一种引物探针组合物,包括选自如下的引物探针组:
...【技术保护点】
1.引物探针组合物,其特征在于,包括选自如下的引物探针组:
2.根据权利要求1所述的引物探针组合,其特征在于,所述引物探针组合物还包括内标引物探针组E,包括SEQ ID NO.13所示的上游引物,SEQ ID NO.14所示的下游引物,SEQ IDNO.15所示的探针。
3.根据权利要求2所述的试剂盒,其特征在于:所述副流感病毒1型、副流感病毒2型、副流感病毒3型、副流感病毒4型以及内标的特异性探针两端分别连接荧光基团和淬灭基团,其中荧光基团选自FAM、VIC、ROX、TAMRA或CY5;淬灭基团选自BHQ1、BHQ2、BHQ3和DABCYL中的任意一种或几种。
4.一种用于副流感病毒快速分型检测试剂盒,其特征在于:所述试剂盒包括核酸扩增反应液,所述核酸扩增反应液包括如权利要求1-3所述的引物探针组合物。
5.根据权利要求4所述的试剂盒,其特征在于:所述试剂盒还包括酶混合液、阳性对照、阴性对照和空白对照。
6.根据权利要求4所述的一种用于副流感病毒快速分型检测试剂盒,其特征在于:所述核酸扩增反应液还包括:Tris缓冲液、
7.根据权利要求5一种用于副流感病毒快速分型检测试剂盒,其特征在于:所述核酸扩增反应液中,所述特异性引物SEQ ID NO.1-2,SEQ ID NO.4-5,SEQ ID NO.7-8,SEQ IDNO.10-11和SEQ ID NO.13-14的浓度为350-450nM,所述特异性探针SEQ ID NO.3,SEQ IDNO.6,SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.12的浓度为150-250nM,所述内源性内标引物探针SEQ IDNO.15的浓度均为75-125nM。
8.根据权利要求5一种用于副流感病毒快速分型检测试剂盒,其特征在于:所述核酸扩增反应液中Tris缓冲液的浓度为20-40mM,pH为8.8、钾离子的浓度为20-40mM、硫酸铵的浓度为20-40mM、镁离子的浓度为4-6mM、dA/G/C/UTPs的浓度为0.2-0.6mM、四甲基氯化铵的浓度为30-70mM、海藻糖的浓度为0.32%-0.64%、二甲基亚砜的浓度为0.2%-0.8%。
9.根据权利要求5所述的一种用于副流感病毒快速分型检测试剂盒,其特征在于:所述酶混合液包括:逆转录酶、热启动DNA聚合酶、RNA酶抑制剂、UDG酶和牛血清白蛋白。
10.一种用于副流感病毒快速分型检测试剂盒的使用方法,其特征在于,包括如下步骤:
...【技术特征摘要】
1.引物探针组合物,其特征在于,包括选自如下的引物探针组:
2.根据权利要求1所述的引物探针组合,其特征在于,所述引物探针组合物还包括内标引物探针组e,包括seq id no.13所示的上游引物,seq id no.14所示的下游引物,seq idno.15所示的探针。
3.根据权利要求2所述的试剂盒,其特征在于:所述副流感病毒1型、副流感病毒2型、副流感病毒3型、副流感病毒4型以及内标的特异性探针两端分别连接荧光基团和淬灭基团,其中荧光基团选自fam、vic、rox、tamra或cy5;淬灭基团选自bhq1、bhq2、bhq3和dabcyl中的任意一种或几种。
4.一种用于副流感病毒快速分型检测试剂盒,其特征在于:所述试剂盒包括核酸扩增反应液,所述核酸扩增反应液包括如权利要求1-3所述的引物探针组合物。
5.根据权利要求4所述的试剂盒,其特征在于:所述试剂盒还包括酶混合液、阳性对照、阴性对照和空白对照。
6.根据权利要求4所述的一种用于副流感病毒快速分型检测试剂盒,其特征在于:所述核酸扩增反应液还包括:tris缓冲液、钾离子、硫酸铵、镁离子、da/g/c/utps、四甲基氯化铵(tmac)、海藻糖、二甲基亚砜(dmso)。
7.根据权利要求5一种...
【专利技术属性】
技术研发人员:李丹,董晋涛,杜赞花,金捷,
申请(专利权)人:上海思路迪生物医学科技有限公司,
类型:发明
国别省市:
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