【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
技术介绍
技术实现思路
【技术保护点】
1.一种病毒载体产生系统，其包括：
2.根据权利要求1所述的病毒载体产生系统，其中转移多核酸的中心核酸序列包含编码多克隆位点的核酸序列。
3.根据权利要求2所述的病毒载体产生系统，其中中心核酸序列包含侧翼有与第一表达盒编码的调节性RNA互补的靶核酸序列的多克隆序列。
4.根据权利要求3所述的病毒载体产生系统，其中多克隆序列侧翼有与第一表达盒编码的调节性RNA互补的靶核酸序列的串联重复。
5.根据权利要求3或权利要求4所述的病毒载体产生系统，其中多克隆序列在5’端和3’端上侧翼有与第一表达盒编码的调节性RNA互补的靶核酸序列。
6.根据权利要求2-5中任一项所述的病毒载体产生系统，其中中心核酸序列进一步包含启动子。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的病毒载体产生系统，其中转移多核酸序列的中心核酸序列包含第二表达盒，其中所述第二表达盒包含编码载荷分子的核酸序列，所述编码载荷分子的核酸序列可操作地连接至启动子和与第一表达盒编码的调节性RNA互补的靶核酸序列二者。
8.根据权利要求7所述的病毒载体产生系
9.根据权利要求7或权利要求8所述的病毒载体产生系统，其中载荷分子的核酸序列包含与第一表达盒编码的调节性RNA互补的靶核酸序列的串联重复。
10.根据权利要求1-9中任一项所述的病毒载体产生系统，其中第一表达盒包含编码调节性RNA的核酸序列的串联重复。
11.根据权利要求1-10中任一项所述的病毒载体产生系统，其中第一表达盒包含两种或多种不同调节性RNA的核酸序列。
12.根据权利要求1-11中任一项所述的病毒载体产生系统，其中第一表达盒进一步包含编码病毒载体产生组分的基因产物的核酸序列。
13.根据权利要求12所述的病毒载体产生系统，其中第一表达盒中编码基因产物的核酸序列具有：5’UTR，其包含编码调节性RNA的核酸序列；内含子，其包含编码调节性RNA的核酸序列；3’UTR，其包含编码调节性RNA的核酸序列；或其组合。
14.根据权利要求1-13中任一项所述的病毒载体产生系统，其中第一表达盒进一步包含编码可选标记的核酸序列。
15.根据权利要求14所述的病毒载体产生系统，其中可选标记包括荧光蛋白或抗生素抗性蛋白。
16.根据权利要求14或权利要求15所述的病毒载体产生系统，其中第一表达盒中编码可选标记的核酸序列具有：5’UTR，其包含编码调节性RNA的核酸序列；内含子，其包含编码调节性RNA的核酸序列；3’UTR，其包含编码调节性RNA的核酸序列；或其组合。
17.根据权利要求1-16中任一项所述的病毒载体产生系统，其中病毒载体产生系统是AAV病毒载体产生系统，其中病毒载体产生组分包含共同编码AAV载体的基因产物的一种或多种多核酸。
18.根据权利要求17所述的病毒载体产生系统，其中病毒载体组分包含Rep52或Rep40；Rep78或Rep68；E2A；E4Orf6；VARNA；VP1；VP2；VP3；和AAP的核酸序列。
19.根据权利要求17或权利要求18所述的病毒载体产生系统，其中转移多核酸的病毒末端重复是AAV反向串联重复。
20.根据权利要求1-16中任一项所述的病毒载体产生系统，其中病毒载体产生系统是慢病毒载体产生系统，其中病毒载体产生组分包含共同编码慢病毒载体的基因产物的一种或多种多核酸。
21.根据权利要求20所述的病毒载体产生系统，其中病毒载体组分包含VSV-G、Gag-Pol和Rev的核酸序列。
22.根据权利要求20或权利要求21所述的病毒载体产生系统，其中转移多核酸的病毒末端重复是慢病毒长末端重复。
23.根据权利要求1-22中任一项所述的病毒载体产生系统，其中病毒载体产生组分的一种或多种异源多核酸中的至少一种稳定整合到工程化细胞的基因组中。
24.根据权利要求1-23中任一项所述的病毒载体产生系统，其中病毒载体产生组分的一种或多种异源多核酸中的每一种稳定整合到工程化细胞的基因组中。
25.根据权利要求1-24中任一项所述的病毒载体产生系统，其中工程化细胞进一步包含编码第一表达盒的异源核酸序列。
26.根据权利要求1-25中任一项所述的病毒载体产生系统，其中工程化细胞源自HEK293细胞、HeLa细胞、BHK细胞或Sf9细胞。
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【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种病毒载体产生系统，其包括：
2.根据权利要求1所述的病毒载体产生系统，其中转移多核酸的中心核酸序列包含编码多克隆位点的核酸序列。
3.根据权利要求2所述的病毒载体产生系统，其中中心核酸序列包含侧翼有与第一表达盒编码的调节性rna互补的靶核酸序列的多克隆序列。
4.根据权利要求3所述的病毒载体产生系统，其中多克隆序列侧翼有与第一表达盒编码的调节性rna互补的靶核酸序列的串联重复。
5.根据权利要求3或权利要求4所述的病毒载体产生系统，其中多克隆序列在5’端和3’端上侧翼有与第一表达盒编码的调节性rna互补的靶核酸序列。
6.根据权利要求2-5中任一项所述的病毒载体产生系统，其中中心核酸序列进一步包含启动子。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的病毒载体产生系统，其中转移多核酸序列的中心核酸序列包含第二表达盒，其中所述第二表达盒包含编码载荷分子的核酸序列，所述编码载荷分子的核酸序列可操作地连接至启动子和与第一表达盒编码的调节性rna互补的靶核酸序列二者。
8.根据权利要求7所述的病毒载体产生系统，其中载荷分子的核酸序列包含：5’utr，其包含与第一表达盒编码的调节性rna互补的靶核酸序列；3’utr，其包含与第一表达盒编码的调节性rna互补的靶核酸序列；或
9.根据权利要求7或权利要求8所述的病毒载体产生系统，其中载荷分子的核酸序列包含与第一表达盒编码的调节性rna互补的靶核酸序列的串联重复。
10.根据权利要求1-9中任一项所述的病毒载体产生系统，其中第一表达盒包含编码调节性rna的核酸序列的串联重复。
11.根据权利要求1-10中任一项所述的病毒载体产生系统，其中第一表达盒包含两种或多种不同调节性rna的核酸序列。
12.根据权利要求1-11中任一项所述的病毒载体产生系统，其中第一表达盒进一步包含编码病毒载体产生组分的基因产物的核酸序列。
13.根据权利要求12所述的病毒载体产生系统，其中第一表达盒中编码基因产物的核酸序列具有：5’utr，其包含编码调节性rna的核酸序列；内含子，其包含编码调节性rna的核酸序列；3’utr，其包含编码调节性rna的核酸序列；或其组合。
14.根据权利要求1-13中任一项所述的病毒载体产生系统，其中第一表达盒进一步包含编码可选标记的核酸序列。
15.根据权利要求14所述的病毒载体产生系统，其中可选标记包括荧光蛋白或抗生素抗性蛋白。
16.根据权利要求14或权利要求15所述的病毒载体产生系统，其中第一表达盒中编码可选标记的核酸序列具有：5’utr，其包含编码调节性rna的核酸序列；内含子，其包含编码调节性rna的核酸序列；3’utr，其包含编码调节性rna的核酸序列；或其组合。
17.根据权利要求1-16中任一项所述的病毒载体产生系统，其中病毒载体产生系统是aav病毒载体产生系统，其中病毒载体产生组分包含共同编码aav载体的基因产物的一种或多种多核酸。
18.根据权利要求17所述的病毒载体产生系统，其中病毒载体组分包含rep52或rep40；rep78或rep68；e2a；e4orf6；varna；vp1；vp2；vp3；和aap的核酸序列。
19.根据权利要求17或权利要求18所述的病毒载体产生系统，其中转移多核酸的病毒末端重复是aav反向串联重复。
20.根据权利要求1-16中任一项所述的病毒载体产生系统，其中病毒载体产生系统是慢病毒载体产生系统，其中病毒载体产生组分包含共同编码慢病毒载体的基因产物的一种或多种多核酸。
21.根据权利要求20所述的病毒载体产生系统，其中病毒载体组分包含vsv-g、gag-pol和rev的核酸序列。
22.根据权利要求20或权利要求21所述的病毒载体产生系统，其中转移多核酸的病毒末端重复是慢病毒长末端重复。
23.根据权利要求1-22中任一项所述的病毒载体产生系统，其中病毒载体产生组分的一种或多种异源多核酸中的至少一种稳定整合到工程化细胞的基因组中。
24.根据权利要求1-23中任一项所述的病毒载体产生系统，其中病毒载体产生组分的一种或多种异源多核酸中的每一种稳定整合到工程化细胞的基因组中。
25.根据权利要求1-24中任一项所述的病毒载体产生系统，其中工程化细胞进一步包含编码第一表达盒的异源核酸序列。
26.根据权利要求1-25中任一项所述的病毒载体产生系统，其中工程化细胞源自hek293细胞、hela细胞、bhk细胞或sf9细胞。
27.根据权利要求1-26中任一项所述的病毒载体产生系统，其中调节性rna是shrna或amirna。
28.根据权利要求27所述的病毒载体产生系统，其中编码shrna的核酸序列包含seq idno:2-11的任一个的核酸序列。
29.根据权利要求27或权利要求28所述的病毒载体产生系统，其中第一表达盒包含编码可选标记的核酸序列，其中编码可选标记的核酸序列包含内含子，所述内含子从5’至3’具有：(i)内含子供体位点；(ii)编码shrna或amirna的核酸序列；和(iii)内含子受体位点。
30.根据权利要求29所述的病毒载体产生系统，其中内含子包含编码shrna或amirna的核酸序列的串联重复、shrna簇或amirna簇。
31.根据权利要求29或权利要求30所述的病毒载体产生系统，其中编码可选标记的核酸序列包含：5’utr，其中可选标记的内含子位于5’utr中；3’utr，并且其中可选标记的内含子位于3’utr中；或其组合。
32.根据权利要求29-31中任一项所述的病毒载体产生系统，其中可选标记的内含子位于编码可选标记的核酸序列的编码区中。
33.根据权利要求28-31中任一项所述的病毒载体产生系统，其中内含子包含seq idno:12的核酸序列。
34.根据权利要求1-26中任一项所述的病毒载体产生系统，其中调节性rna是cas13引导rna。
35.根据权利要求34所述的病毒载体产生系统，其中第一表达盒包含可操作地连接至编码两种或多种cas13引导rna的核酸序列的组成型启动子。
36.根据权利要求34或权利要求35所述的病毒载体产生系统，其进一步包含编码cas13的异源多核酸。
37.根据权利要求36所述的病毒载体产生系统，其中cas13是cas13d。
38.根据权利要求37所述的病毒载体产生系统，其中cas13d包含seq id no:1的氨基酸序列或与seq id no:1的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸序列。
39.根据权利要求36-38中任一项所述的病毒载体产生系统，其中编码cas13的异源多核酸进一步包含第一表达盒。
40.根据权利要求39所述的病毒载体产生系统，其中第一表达盒包含可操作地连接至编码cas13 grna的核酸序列和编码cas13的核酸序列二者的组成型启动子的核酸序列。
41.根据权利要求36-40中任一项所述的病毒载体产生系统，其中工程化细胞进一步包含编码cas13...
【专利技术属性】
技术研发人员：J·J·甘，C·S·斯塔奇，A·A·K·尼尔森，
申请(专利权)人：阿西莫夫公司，
类型：发明
国别省市：
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