【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
【】本专利技术涉及从组织片得到富集目的细胞或细胞核的试样的方法及利用由所述方法得到的试样对生物标志物进行分析的方法、以及用于实施这些方法的试剂盒、系统及程序。
技术介绍
0、
技术介绍
1、近年，非常地多的生物标志物在各种诊断中利用，用于对这些生物标志物进行分析的主要的受试体之一是从患者采集的组织。特别是，ffpe组织片在免疫组织化学(ihc)法中国际上广泛使用，最近，使得从组织片提取dna等的目的成分在各种分析中使用。
2、另一方面，从组织片提取目的成分而进行分析时的问题之一是，在采集的组织中不必然富含目的细胞或标志物，有不充分地得到目标标志物的检测灵敏度、或者检测率的情况。例如，在癌关联基因中，从ffpe组织片提取dna等的多核苷酸进行定量分析，作为进行适合的分析的条件，推荐组织含20％以上肿瘤细胞(非专利文献4)。但是，满足这样的条件实务上必然不容易。
3、从而，为了使用由组织调制的试样进行各种生物标志物的分析，只要是可简易并且确实地得到富集目的细胞或标志物的试样，就便利。
4、【
【技术保护点】
1.从组织片得到目的细胞或细胞核富集的试样的方法，其包括：
2.权利要求1所述的方法，其中所述预处理还包括用不分解对于保持细胞核的形态而言必要的蛋白质的水解酶处理。
3.权利要求2所述的方法，其中所述水解酶是不分解核纤层蛋白的酶。
4.权利要求2或3所述的方法，其中所述水解酶是凝血酶、脯氨酸端肽酶、或者透明质酸酶。
5.权利要求1～4之任一项所述的方法，其中所述水流破碎是破碎部件的转数以6000～13000rpm进行。
6.权利要求1～5之任一项所述的方法，其中所述超声波破碎以20～40％振幅进行。
<...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.从组织片得到目的细胞或细胞核富集的试样的方法，其包括：
2.权利要求1所述的方法，其中所述预处理还包括用不分解对于保持细胞核的形态而言必要的蛋白质的水解酶处理。
3.权利要求2所述的方法，其中所述水解酶是不分解核纤层蛋白的酶。
4.权利要求2或3所述的方法，其中所述水解酶是凝血酶、脯氨酸端肽酶、或者透明质酸酶。
5.权利要求1～4之任一项所述的方法，其中所述水流破碎是破碎部件的转数以6000～13000rpm进行。
6.权利要求1～5之任一项所述的方法，其中所述超声波破碎以20～40％振幅进行。
7.权利要求6所述的方法，其中所述超声波破碎进行30秒钟～3分钟。
8.权利要求1～7之任一项所述的方法，其中所述目的细胞是肿瘤细胞、淋巴细胞、或者非癌部组织来源的正常细胞。
9.权利要求1～8之任一项所述的方法，其中所述组织片用固定化剂固定。
10.权利要求9所述的方法，其中所述固定的组织片用包埋剂包埋。
11.权利要求10所述的方法，其中在所述预处理之前，从所述组织片除去所述包埋剂，使所述组织片亲水化。
12.权利要求9～11之任一项所述的方法，其中在所述预处理之前，包括由热处理除去由所述固定发生的交联结构。
13.权利要求1～12之任一项所述的方法，其中将由所述预处理得到的粒子群由流式细胞术分析，基于所述分析中得到的散点图中的前方散射(fsc)强度和/或侧方散射(ssc)强度而筛选或分取富集所述目的细胞或细胞核的粒子群。
14.权利要求13所述的方法，其中将已知的多个细胞种由流式细胞术分析，对于来源于各细胞种的细胞核制成前方散射(fsc)强度或侧方散射(ssc)强度和粒子数的直方图、或者前方散射(fsc)强度及侧方散射(ssc)强度的散点图，基于前方散射(fsc)强度和/或侧方散射(ssc)强度，对于各细胞种的核确定相对于其他细胞种的核以显著的数存在的范围或区域，
15.权利要求13所述的方法，其中将具有已知的不同的粒径的标准粒子用流式细胞术分析，用得到的前方散射(fsc)强度和标准物质的粒径制成校准曲线，
16.权利要求15所述的方法，其中选择由具有10μm以上的粒径的粒子群构成，具有11μm～20μm的粒径的粒子群占95％以上的区域，筛选或分取富集来源于肿瘤细胞的粒子的粒子群。
17.权利要求15所述的方法，其中选择由具有8μm以下的粒径的粒子群构成，具有4μm～7μm的粒径的粒子群占95％以上的区域，筛选或分取富集来源于淋巴细胞的粒子的粒子群。
<...
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。