【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及植物基因工程，尤其涉及一种猕猴桃溃疡病抗性acmyb14基因及其编码蛋白与应用。
技术介绍
1、但近年来，随着猕猴桃种植面积和产量的大幅度增加，猕猴桃在种植过程中产生的病害也逐年增多，其中，猕猴桃细菌性溃疡病的发生尤为严重，在适宜的低温条件下，该病能快速侵染整株植株，最后导致整个果园被侵染。感染溃疡病的猕猴桃果皮变厚、果肉变酸，引起猕猴桃品质和产量严重降低，这是猕猴桃生产中一种毁灭性的细菌性疾病。猕猴桃溃疡病具有传播迅速、致病性强、发病率普遍、危害程度高以及预防和治疗困难的特点。
2、在田间，猕猴桃溃疡病表现有较长的潜伏期，植株枝条或叶片伤口处易造成溃疡病的侵害，人为分离发现病菌数量远大于其他肉眼观察起来完好的区域。因此当园区出现严重的猕猴桃溃疡病区域，一般整个园区只有通过砍伐整棵果树才能控制溃疡病扩散。前人对猕猴桃如何调控抗病的分子机理缺乏系统了解，因此，筛选猕猴桃抗病种质资源是解决猕猴桃溃疡病问题的关键，从而探究清楚猕猴桃溃疡病分子抗病机制。
3、就目前的研究而言，木质素生物合成的转录调控及其次生细胞壁增厚的潜在机制尚不清楚。
4、鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
1、为解决现有猕猴桃溃疡病的防治效率低、抗药性等问题，本专利技术提供一种猕猴桃溃疡病抗性acmyb14基因及其编码蛋白与应用。
2、本专利技术提供了一种猕猴桃溃疡病抗性acmyb14基因，所述acmyb14基因的核苷酸序列如seq id no:1所
3、本专利技术还提供了一种所述acmyb14基因的制备方法，所述制备方法包括：以红阳猕猴桃基因组dna为模板，acmyb14-f和acmyb14-r为引物进行pcr扩增得到所述acmyb14基因；
4、所述acmyb14-f的核苷酸序列如seq id no:3所示；
5、所述acmyb14-r的核苷酸序列如seq id no:4所示。
6、本专利技术提供了一种猕猴桃溃疡病抗性蛋白，由所述的猕猴桃溃疡病抗性acmyb14基因的核苷酸序列编码的氨基酸序列组成的蛋白质，如下(a)或(b)：
7、(a)由seq id no:2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
8、(b)seq id no:2所示序列经取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且与猕猴桃溃疡病抗性相关的由(a)衍生的蛋白质。
9、本专利技术提供了一种重组表达载体，所述重组表达载体含有所述猕猴桃溃疡病抗性acmyb14基因；
10、优选地，所述载体的骨架包括pcambia1300；
11、更优选地，所述载体附有egfp标签。
12、在一些实施例中，所述构建方法包括：使用限制性内切酶xbai和bamhi对空载质粒pcambia1300进行双酶切，获得线性化超表达载体；
13、使用加入了接头引物的acmyb14基因目的片段连接所述线性化超表达载体，得到的重组质粒。
14、本专利技术还提供了一种含有所述acmyb14基因的表达盒、转基因细胞系、重组菌或重组病毒。
15、本专利技术还提供了所述acmyb14基因或所述猕猴桃溃疡病抗性蛋白或所述重组表达载体或所述表达盒、转基因细胞系、重组菌或重组病毒的以下任一应用：
16、1)用于提高植物对溃疡病的抗性；
17、2)用于促进植物木质素的合成；
18、3)用于提高植物对丁香假单胞菌及其变种以及它们所致植物病害的抗性；
19、4)用于制备转基因植物；
20、5)用于植物育种；
21、6)用于降低植株高度；
22、7)用于培育具有红化枝叶和茎干的植物；
23、8)用于延长植物生长期。
24、所述植物为猕猴桃；
25、丁香假单胞菌的变种为丁香假单胞菌的猕猴桃致病变种(pseudomonas syringaepv.actinidiae，简称psa)。
26、本专利技术提供了一种抗溃疡病的植物的培育方法，包括如下步骤：将所述猕猴桃溃疡病抗性acmyb14基因导入植物中，获得抗溃疡病植物；或将植物的myb14基因过表达获得抗溃疡病植物。所述植物为猕猴桃。
27、本专利技术提供了一种培育转基因植物的方法，包括如下步骤：将所述猕猴桃溃疡病抗性acmyb14基因导入植物中，获得转基因植物；所述转基因植物具有溃疡病抗性、矮化和/或枝叶茎干红化的性状。所述植物为猕猴桃。
28、在一些实施例中，所述导入的方法包括通过导入所述重组表达载体或所述表达盒、转基因细胞系、重组菌或重组病毒实现。
29、在一些实施例中，抗溃疡病的植物或转基因植物的培育方法中，后期组培苗生根过程中，使用3mg/ml的iba促进其生根。
30、生根后将acmyb14转基因猕猴桃植株进行驯化后移栽至有机质土中；驯化过程中，驯化过程中先把组培苗从培养基中取出，根部浸泡于含有iba的溶液中(iba的浓度为3mg/l)三天后移栽到有机质土中，并用保鲜膜包裹顶部，保证生长环境湿润。
31、与现有技术相比，本专利技术的有益效果在于：
32、本专利技术对木质素生物合成的下游靶基因进行了荧光定量分析，并对其功能进行了进一步研究。这些发现确定了acmyb14转录因子通过多种机制具有调控木质素合成和茎强度的功能，并为猕猴桃的抗病分子工程和育种提供了资源。
33、本专利技术以“红阳”品种猕猴桃基因组dna为模板，采用特定引物进行pcr扩增得到所述acmyb14基因，通过植物转基因技术获得转基因植株，通过改良组培苗驯化试验获得生根苗，接种致病的猕猴桃病菌psa，与对照组对比，acmyb14转基因后的猕猴桃植株叶片抗病性明显增强。
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1.猕猴桃溃疡病抗性AcMYB14基因，其特征在于，所述AcMYB14基因含有如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列，或含有与SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列具有90％、95％、96％、97％、98％、99％同源性的核苷酸序列。
2.根据权利要求1所述AcMYB14基因的扩增方法，其特征在于，所述制备方法包括：以红阳猕猴桃基因组DNA为模板，AcMYB14-F和AcMYB14-R为引物进行PCR扩增得到所述AcMYB14基因；
3.一种猕猴桃溃疡病抗性蛋白，其特征在于，由权利要求1所述的猕猴桃溃疡病抗性AcMYB14基因的核苷酸序列编码的氨基酸序列组成的蛋白质，如下(a)或(b)：
4.一种重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体含有权利要求1所述猕猴桃溃疡病抗性AcMYB14基因；
5.权利要求4所述重组表达载体的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括：使用限制性内切酶XbaI和BamHI对空载质粒pCAMBIA1300进行双酶切，获得线性化超表达载体；
6.含有权利要求1所述AcMYB14基因的表达盒、转基
7.权利要求1所述AcMYB14基因或权利要求3所述猕猴桃溃疡病抗性蛋白或权利要求4所述重组表达载体或权利要求6所述表达盒、转基因细胞系、重组菌或重组病毒的以下任一应用：
8.一种抗溃疡病的植物的培育方法，其特征在于，包括如下步骤：将权利要求1所述猕猴桃溃疡病抗性AcMYB14基因导入植物中，获得抗溃疡病植物；或将植物的MYB14基因过表达获得抗溃疡病植物。
9.一种培育转基因植物的方法，其特征在于，包括如下步骤：将权利要求1所述猕猴桃溃疡病抗性AcMYB14基因导入植物中，获得转基因植物；所述转基因植物具有溃疡病抗性、矮化和/或枝叶茎干红化的性状。
10.根据权利要求8或9所述的方法，其特征在于，所述导入的方法包括通过导入权利要求4所述重组表达载体或权利要求6所述表达盒、转基因细胞系、重组菌或重组病毒实现。
...【技术特征摘要】
1.猕猴桃溃疡病抗性acmyb14基因，其特征在于，所述acmyb14基因含有如seq id no:1所示的核苷酸序列，或含有与seq id no:1所示的核苷酸序列具有90％、95％、96％、97％、98％、99％同源性的核苷酸序列。
2.根据权利要求1所述acmyb14基因的扩增方法，其特征在于，所述制备方法包括：以红阳猕猴桃基因组dna为模板，acmyb14-f和acmyb14-r为引物进行pcr扩增得到所述acmyb14基因；
3.一种猕猴桃溃疡病抗性蛋白，其特征在于，由权利要求1所述的猕猴桃溃疡病抗性acmyb14基因的核苷酸序列编码的氨基酸序列组成的蛋白质，如下(a)或(b)：
4.一种重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体含有权利要求1所述猕猴桃溃疡病抗性acmyb14基因；
5.权利要求4所述重组表达载体的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括：使用限制性内切酶xbai和bamhi对空载质粒pcambia1300进行...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘普，巫顺圆，岳文丽，许君茹，王晓雅，覃春怡，
申请(专利权)人：安徽农业大学，
类型：发明
国别省市：
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