【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于多肽药物领域，具体涉及一种可以在模板多肽的基础上提高抗革兰氏阳性和革兰氏阴性菌抗菌活性的订书肽及其制备方法和应用。
技术介绍
1、抗生素滥用导致耐药菌株的出现，由耐药菌株引起的感染疾病已成为全球公共卫生的严重威胁。临床上的耐药菌株，如金黄色葡萄球菌，铜绿假单胞菌，鲍曼不动杆菌等能在自身表面形成一层生物被膜，生物膜包裹的细菌对常规抗生素的耐受性是其他细菌的10～1000倍，致使临床上可用的抗生素在对抗耐药菌方面存在一定的局限性。近年来，抗菌药物开发进展缓慢，且部分上市抗生素药物在较短时间就出现了耐药菌性。估计到2050年全球因耐药菌导致的死亡人数可达到1000万，造成的经济损失可达1005万亿美元，细菌感染已经成为紧随缺血性心脏病之后的人类第二大致死因素。为此，迫切需要寻找新型的治疗药物来应对耐药菌造成的感染性疾病。
2、抗菌肽(amp)是一类宿主防御肽，可通过多种途径杀伤细菌，如菌膜裂解、氧化损伤、抑制生物被膜形成等，不涉及特定蛋白的结合，不易产生耐药性，可对抗传统抗生素无效的细菌感染，因此amp具有作为治疗耐药菌感染性疾病的新一代抗生素的潜力。但大部分amp为线性多肽，在体内易被蛋白酶降解，结构不稳定，极大地限制其临床应用。前人通过对amp进行化学改造，如骨架改变、d型和非天然氨基酸替换等，提高了多肽的结构稳定性并取得了一定的进展。但在过去的几十年中，amp的结构稳定性仍是阻碍该类药物进入临床应用的重要因素，因此亟需寻找更有效地策略对amp进行改造，从而更好地解决耐药菌感染的问题。
3、l
技术实现思路
1、本专利技术的目的是针对现有技术中的不足，提供一种提高抗耐药菌活性及稳定性的订书肽。
2、本专利技术的另一的目的是，提供所述订书肽的制备方法。
3、本专利技术的另一的目的是，提供所述订书肽的用途。
4、为实现上述第一个目的，本专利技术采取的技术方案是：
5、一种订书肽，所述订书肽选自下列中的一种：
6、a)以ac-lkrvwkrvfkllkrywrqlkkpvr-nh2为肽链模板，其中氨基酸残基1l和5w被s5替换并环合；
7、b)以ac-lkrvwkrvfkllkrywrqlkkpvr-nh2为肽链模板，其中氨基酸残基4v和8v被s5替换并环合；
8、c)以ac-lkrvwkrvfkllkrywrqlkkpvr-nh2为肽链模板，其中氨基酸残基5w和9f被s5替换并环合；
9、d)以ac-lkrvwkrvfkllkrywrqlkkpvr-nh2为肽链模板，其中氨基酸残基7r和11l被s5替换并环合；
10、e)以ac-lkrvwkrvfkllkrywrqlkkpvr-nh2为肽链模板，其中氨基酸残基8v和12l被s5替换并环合；
11、f)以ac-lkrvwkrvfkllkrywrqlkkpvr-nh2为肽链模板，其中氨基酸残基9f和13k被s5替换并环合；
12、g)以ac-lkrvwkrvfkllkrywrqlkkpvr-nh2为肽链模板，其中氨基酸残基11l和15y被s5替换并环合；
13、h)以ac-lkrvwkrvfkllkrywrqlkkpvr-nh2为肽链模板，其中氨基酸残基12l和16w被s5替换并环合；
14、i)以ac-lkrvwkrvfkllkrywrqlkkpvr-nh2为肽链模板，其中氨基酸残基14r和18q被s5替换并环合；
15、j)以ac-lkrvwkrvfkllkrywrqlkkpvr-nh2为肽链模板，其中氨基酸残基15y和19l被s5替换并环合；
16、k)以ac-lkrvwkrvfkllkrywrqlkkpvr-nh2为肽链模板，其中氨基酸残基16w和20k被s5替换并环合；
17、l)以ac-lkrvwkrvfkllkrywrqlkkpvr-nh2为肽链模板，其中氨基酸残基18q和22p被s5替换并环合；
18、m)以ac-lkrvwkrvfkllkrywrqlkkpvr-nh2为肽链模板，其中氨基酸残基19l和23v被s5替换并环合。
19、本专利技术中模板多肽及改造的订书肽的序列如下表：
20、表1本专利技术中模板多肽及改造的订书肽的序列
21、
22、为实现上述第二个目的，本专利技术采取的技术方案是：
23、上述的订书肽的制备方法，包括如下步骤：
24、(1)以rink amide mbha氨基树脂为载体，其载样量为0.30mmol/g，在活化剂活化的dic/oxyme缩合剂的作用下分别使c端首个氨基酸与固相载体偶联；
25、(2)使用脱保护试剂脱去氨基酸上的fmoc保护基；
26、(3)使用缩合剂进行氨基酸的缩合；
27、(4)重复进行保护基的脱除-氨基酸缩合的操作，按照氨基酸序列合成肽链；其中，环合位点以s5来取代i和i+4位氨基酸；
28、(5)最后一个氨基酸使用脱fmoc保护基后，然后进行乙酰化；
29、(6)在环合剂的作用下使i和i+4位s5氨基酸发生烯烃复分解反应，合成订书肽；
30、(7)使用切割试剂将肽链从载体上切割下来，通过反相高效制备液相纯化得相应订书肽。
31、其中，作为本专利技术的另一优选例，步骤(7)中所述反相高效制备液相的色谱条件如下：色谱柱：ultimatexb-c18柱；流动相：流动相a为0.1％tfa/乙腈，流动相b为0.1％tfa/水；梯度洗脱程序：90％b洗脱0～3min，90％b～50％b洗脱40min；流速为8ml/min，进样体积为3ml，检测波长214nm和254nm。
32、作为本专利技术的另一优选例，步骤(1)中所述的缩合剂为dic-oxyme缩合体系，缩合体系的活化剂为dic，以dmf为溶剂。
33、作为本专利技术的另一优选例，步骤(2)中所述脱保护试剂为哌啶和dmf的混合溶液，所述哌啶和dmf的体积比为1:4。
34、作为本专利技术的另一优选例，骤(5)中所述乙酰化步骤的乙酰化试剂为ac2o,diea,dmf的混合液，所述ac2o,diea,dmf的体积比为1:1:8。
35、作为本专利技术的另一优选例，步骤(6)中所述环合剂为grubbsⅰ试剂的1,2-二氯乙烷的溶液，所述grubbsⅰ试剂与1,2-二氯乙烷的用量比为60:本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种订书肽，其特征在于，所述订书肽为：
2.权利要求1所述的订书肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述的订书肽的制备方法，其特征在于，步骤(7)中所述反相高效制备液相的色谱条件如下：色谱柱：UltimateXB-C18柱；流动相：流动相A为0.1％TFA/乙腈，流动相B为0.1％TFA/水；梯度洗脱程序：90％B洗脱0～3min，90％B～50％B洗脱40min；流速为8ml/min，进样体积为3ml，检测波长214nm和254nm。
4.根据权利要求2所述的订书肽的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述的缩合剂为DIC-Oxyme缩合体系，缩合体系的活化剂为DIC，以DMF为溶剂。
5.根据权利要求2所述的订书肽的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述脱保护试剂为哌啶和DMF的混合溶液，所述哌啶和DMF的体积比为1:4。
6.根据权利要求2所述的订书肽的制备方法，其特征在于，步骤(5)中所述乙酰化步骤的乙酰化试剂为Ac2O,DIEA,DMF的混合液，所述Ac2O,DIEA,DMF的体积比为
7.根据权利要求2所述的订书肽的制备方法，其特征在于，步骤(6)中所述环合剂为GrubbsⅠ试剂的1,2-二氯乙烷的溶液，所述GrubbsⅠ试剂与1,2-二氯乙烷的用量比为60:7，单位为mg/ml。
8.根据权利要求2所述的订书肽的制备方法，其特征在于，步骤(7)中，所述切割试剂为TFA、H2O、苯酚和TIPS的混合溶液，所述TFA、H2O、苯酚和TIPS的体积比为88.75:0.5:0.5:0.25；所述切割试剂与所述载体用量比为1:20，单位为mL/mg。
9.权利要求1所述的订书肽在制备抑制金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌及鲍曼不动杆菌药物中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种订书肽，其特征在于，所述订书肽为：
2.权利要求1所述的订书肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述的订书肽的制备方法，其特征在于，步骤(7)中所述反相高效制备液相的色谱条件如下：色谱柱：ultimatexb-c18柱；流动相：流动相a为0.1％tfa/乙腈，流动相b为0.1％tfa/水；梯度洗脱程序：90％b洗脱0～3min，90％b～50％b洗脱40min；流速为8ml/min，进样体积为3ml，检测波长214nm和254nm。
4.根据权利要求2所述的订书肽的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述的缩合剂为dic-oxyme缩合体系，缩合体系的活化剂为dic，以dmf为溶剂。
5.根据权利要求2所述的订书肽的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述脱保护试剂为哌啶和dmf的混合溶液，所述哌啶和dmf的体积比为1:4...
【专利技术属性】
技术研发人员：丁艳娇，卢志远，李玉磊，薛晶文，付银雪，杨路平，窦春慧，程瑞雪，
申请(专利权)人：山东第一医科大学山东省医学科学院，
类型：发明
国别省市：
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