【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于发酵，具体涉及一种耐低温、耐高糖、耐酒精、可沉降分离的酿酒酵母及其在冰葡萄酒酿造中的应用。
技术介绍
1、酵母菌是一类单细胞真核微生物，在食品、发酵、医药和生物化工等领域中广泛应用。酿酒酵母是人类历史上最早使用的主要微生物之一，因其生长快、易于筛选和培养，普遍应用于酒类的酿造，特别是葡萄酒与果酒的酿造。
2、冰葡萄酒是采用-7℃以下采摘的冰冻葡萄酿制的葡萄酒，原产于德国，酒体颜色金黄，酸甜适口，果香浓郁，素有“液体黄金”的美誉，是葡萄酒中的贵族。由于酿制冰葡萄酒所需的葡萄具有独特的生长环境，全球仅德国、奥地利、加拿大、法国和中国等少数几个国家生产。
3、冰葡萄酒的生产过程不添加糖，也不能使用人工色素或香料等其它成份调配酒体，因此冰葡萄酒的质量与酵母性能和发酵过程直接相关。不同的酵母菌株发酵条件不尽相同，为了保证冰葡萄酒品质，需要选择具有优良性状的酵母。优质冰葡萄酒发酵所使用的葡萄汁糖度一般在32°brix以上，在8-12℃的低温下完成发酵过程，发酵产物中酒精含量9-14％(v/v)。按照冰葡萄酒国际标准(王婷等，酿酒科技，2011，205(7)：79-82)，根据冰葡萄酒发酵特点，生产冰葡萄酒的酵母要具有耐高糖、耐低温、耐酒精的特性。
4、由于冰葡萄酒生产所需酵母条件严苛，目前我国使用的商业冰葡萄酒酵母大多从国外引进，我国具有自主知识产权的菌株并不多。专利cn105802865a和cn105820964a开发了两株能在16℃低温发酵且产香能力突出的酿酒酵母，其发酵周期40d；cn
5、酵母菌细胞极小，通常只有几微米，在发酵液中生长时一般均匀分散，使发酵液呈现混浊状态，在发酵结束后需要通过离心或过滤去除酵母，这个过程可能接触氧气引起冰葡萄酒品质下降；同时低温离心或过滤也带来成本增加。酵母从发酵液中通过自沉降分离既能保证冰葡萄酒质量又能节省成本。能通过自沉降从发酵液中分离的酵母在冰葡萄酒酿造中未见报道。
6、根据冰葡萄酒酿造工艺标准要求(王婷等，酿酒科技，2011，205(7)：79-82)，发酵温度控制在8-12℃冰葡萄酒品质更佳。在实际生产过程中为了提高酵母活性，一般采用20℃以上温度使酵母生长到一定生物量后启动发酵，待发酵开始后再降温到10-15℃左右完成发酵过程，启动发酵的时间一般维持在1-2天，这段高于12℃的发酵启动过程不可避免会影响冰葡萄酒品质。目前未发现冰葡萄酒酿造中全程采用10℃发酵的记载。开发一种具有我国特色的、能耐低温、耐高糖、耐酒精、可沉降分离且能全程维持低温发酵的酵母在我国冰葡萄酒行业具有很好的科研和商业价值。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种耐低温、耐高糖、耐酒精、可沉降分离的酿酒酵母s3菌株；具有耐低温、耐高糖、耐酒精、可沉降分离的特性，尤其适用于冰葡萄酒酿造工艺。
2、本专利技术另一个的目的是在于提供了一种耐低温、耐高糖、耐酒精、可沉降分离的酿酒酵母s3菌株的制备方法，包括分离、培养、纯化和鉴定方法，步骤易行操作简便。
3、本专利技术还有一个目的是在于提供了一种耐低温、耐高糖、耐酒精、可沉降分离的酿酒酵母s3菌株在冰葡萄酒酿造中的应用，降低冰葡萄酒发酵温度、提高发酵糖度与酒精含量，缩短发酵时间，节省发酵结束后的分离过程，旨在为中国冰葡萄酒发酵专用酵母提供更多的资源。
4、本专利技术的目的可通过以下技术方案实现：
5、一种耐低温、耐高糖、耐酒精，可沉降分离的酿酒酵母(saccharomycescerevisiae)s3菌株，该菌株genbank序列号为or268347.1，保藏于中国典型培养物保藏中心(武汉大学)，保藏号为cctcc m 20231997，保藏时间2023.10.23，地址为：湖北省武汉市武昌区八一路299号。
6、本专利技术所述酿酒酵母(saccharomyces cerevisiae)s3在固体ypd培养基上生长48h后形成的菌落为圆形、乳白色、有光泽，其边缘整齐，菌体粘稠，易挑起(如图1所示)；在液体ypd培养基上生长48h形成颗粒状，液体培养基静置后菌体从发酵液中析出(如图2所示)，颗粒在显微镜下为多细胞聚集形成的不规则形状(如图3所示)。
7、本专利技术所述的酿酒酵母从河北省沧州市制枣车间分离纯化获取，具有耐低温、耐高糖、耐酒精、生长快、可沉降分离的优良特性，其特性可用于冰葡萄酒生产，降低冰葡萄酒发酵温度、提高发酵糖度与酒精含量，缩短发酵时间，节省发酵结束后的分离过程，对提升冰葡萄酒质量与技术革新具有重要意义。
8、一种耐低温、耐高糖、耐酒精、可沉降分离的酿酒酵母s3菌株的制备方法(分离培养)及鉴定方法，包括以下步骤：
9、(1)从蜜枣制作车间采集泡枣水样品各200ml，3000rpm离心10min，沉淀用10mlypd液体培养基重悬浮，再各取1ml接种于ypd液体培养基中，置于摇床上富集培养，培养温度28℃，转速150rpm；
10、(2)取步骤(1)中的发酵液依次稀释并涂布于固体ypd平板培养基上进行培养，培养温度28℃；
11、(3)挑取步骤(2)中获取菌落进一步使用固体ypd平板培养基分离纯化，重复分离纯化过程，直到获得单菌落；
12、(4)取步骤(3)获取的单菌落分在4-10℃的固体ypd平板培养基上培养，根据菌落形态及生长状况判断菌株在低温下的生长状况，按照菌株的生长状况获取耐低温性状的优良菌株数株；
13、(5)取步骤(4)中获取的耐低温菌株接入葡萄糖百分含量为25-45％的高糖固体ypd平板培养基上28℃培养，根据菌落形态及生长状况判断菌株的耐高糖能力，获取耐低温、耐高糖性状的优良菌株数株；
14、(6)取步骤(5)中获取的耐低温耐高糖菌株接入酒精含量为8-16％(v/v)的酒精耐受固体ypd平板培养基上28℃培养，根据菌落形态及生长状况判断菌株的耐酒精能力，获取耐低温、耐高糖、耐酒精性状的优良菌株数株；
15、(7)挑选在(6)步骤中都具有优良性状的菌株测定26srdna d1/d2片段序列；扩增引物序列为：nl1(seq id no：1 5’-gcatatcaataagcggaggaaaag-3’)和nl4(seq id no：25’-ggtccgtgtttcaagacgg-3’)。
16、(8)对(7)中所获得本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种耐低温、耐高糖、耐酒精、可沉降分离的酿酒酵母菌株，其特征在于，所述菌株为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)S3，该菌株耐低温、耐高糖、耐酒精，生长快，菌体可沉降，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC M 20231997。
2.根据权利要求1所述的酿酒酵母菌株，其特征在于，该菌株的26S rDNA D1/D2区的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示。
3.一种耐低温、耐高糖、耐酒精、可沉降分离的酿酒酵母在冰葡萄酒酿造中的应用，其特征在于，包括如下步骤：
4.根据权利要求3所述的一种耐低温、耐高糖、耐酒精、可沉降分离的酿酒酵母在冰葡萄酒酿造中的应用，其特征在于：
5.根据权利要求3所述的一株耐低温、耐高糖、耐酒精、可沉降分离的酿酒酵母在冰葡萄酒酿造中的应用，其特征在于，步骤(2)中所述YPD液体培养基按质量百分比计，包括如下组分：葡萄糖2％，蛋白胨2％，酵母浸粉1％，其余为无菌水，培养基灭菌前使用0.1M的HCl调节pH至5-6.5，培养基灭菌条件：115℃，20min。
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7.权利要求1所述的一种耐低温、耐高糖、耐酒精、可沉降分离的酿酒酵母菌株的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
...【技术特征摘要】
1.一种耐低温、耐高糖、耐酒精、可沉降分离的酿酒酵母菌株，其特征在于，所述菌株为酿酒酵母(saccharomyces cerevisiae)s3，该菌株耐低温、耐高糖、耐酒精，生长快，菌体可沉降，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为cctcc m 20231997。
2.根据权利要求1所述的酿酒酵母菌株，其特征在于，该菌株的26s rdna d1/d2区的核苷酸序列如seq id no：3所示。
3.一种耐低温、耐高糖、耐酒精、可沉降分离的酿酒酵母在冰葡萄酒酿造中的应用，其特征在于，包括如下步骤：
4.根据权利要求3所述的一种耐低温、耐高糖、耐酒精、可沉降分离的酿酒酵母在冰葡萄酒酿造中的应用，其特征在于：
5.根据权利要求...
【专利技术属性】
技术研发人员：李小燕，王高鸿，刘永定，
申请(专利权)人：中国科学院水生生物研究所，
类型：发明
国别省市：
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