【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及间充质干细胞外泌体的提取，特别涉及一种间充质干细胞外泌体的提取方法。
技术介绍
1、差速离心采用逐渐增加离心速度或低速和高速交替进行离心，使沉降速度不同的颗粒，在不同的离心速度及不同离心时间下分批分离的方法。一般，低离心速度使较大的颗粒沉降，小的颗粒仍然悬浮在上清液中，收集沉淀后，再以较高的离心速度离心悬浮液，将较小的颗粒沉降，达到分离不同大小颗粒的目的。
2、在外泌体分离中常采用常规三次差速离心法，不仅费时费力，而且不能达到良好的纯度，并且容易被其他脂蛋白等污染。
技术实现思路
1、本专利技术提供了一种间充质干细胞外泌体的提取方法，克服上述已有技术存在的缺陷。
2、具体技术方案是一种间充质干细胞外泌体的提取方法，步骤如下：
3、s1、收集培养间充质干细胞的培养上清液并进行前处理，
4、s2、配制溶质质量比例为30％的蔗糖水垫液，
5、s3、第一次超速离心：将步骤s2配制的蔗糖水垫液与步骤s1处理后的培养上清液按照1：7-10的比例添加至离心管中，进行第一次超速离心，
6、s4、第二次超速离心：第一次超速离心完成后，收集蔗糖水垫液与培养上清液中间浅白雾层到新离心管中，并补加磷酸缓冲液pbs定容满离心管，进行第二次超速离心，
7、s5、第二次超速离心完成后，去掉上清液，用一定量磷酸缓冲液pbs重悬底部沉淀的间充质干细胞外泌体，完成收集。
8、进一步，步骤s1中，是收集的利用不
9、进一步，对收集的间充质干细胞的培养上清液进行三次离心前处理。
10、进一步，离心前处理是对收集的培养上清液依次进行300g离心10分钟收集上清液、1000g离心10分钟收集上清液和10000g离心30分钟收集上清液。
11、进一步，第一次超速离心条件是在100.000g，4℃条件下离心90分钟。
12、进一步，第二次超速离心条件是在100.000g，4℃条件下离心90分钟。
13、进一步，蔗糖水垫液按照蔗糖：溶剂质量比例30％配制。
14、进一步，在步骤s3中，加入离心管中步骤s2配制的蔗糖水垫液与步骤s1处理后的培养上清液比例为1:10。
15、由于采用了以上技术方案，与现有技术相比，本专利技术有以下技术优点：
16、1、通过优化提取工艺，即采用蔗糖水垫液对间充质干细胞培养上清液进行双差速超速离心，提取的外泌体回收量增加，而且在提高回收效率的同时降低了原料的使用量，生产效率更高，整体提取成本降低，
17、2、本申请中提取方法进行两次差速超速离心，外泌体在提取过程中不易破坏、完整性好，降低了差速超速离心法回收外泌体造成的破坏性损失，
18、3、对收集的间充质干细胞的培养上清液进行三次离心前处理，去除残留细胞、死细胞和细胞碎片，利于提高外泌体的提取纯度，同时使提取过程更加直观，降低了操作失误导致回收量降低的风险，
19、4、收集的利用不含外泌体的间充质干细胞完全培养基培养的脐带/胎盘间充质干细胞的培养上清液，减少其他脂蛋白等的污染，提高外泌体的提取纯度。
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1.一种间充质干细胞外泌体的提取方法，其特征在于，步骤如下：
2.根据权利要求1所述的间充质干细胞外泌体的提取方法，其特征在于，步骤S1中，是收集的利用不含外泌体的间充质干细胞完全培养基培养的脐带/胎盘间充质干细胞的培养上清液。
3.根据权利要求2所述的间充质干细胞外泌体的提取方法，其特征在于，对收集的间充质干细胞的培养上清液进行三次离心前处理。
4.根据权利要求3所述的间充质干细胞外泌体的提取方法，其特征在于，离心前处理是对收集的培养上清液依次进行300g离心10分钟收集上清液、1000g离心10分钟收集上清液和10000g离心30分钟收集上清液。
5.根据权利要求1-4任一所述的间充质干细胞外泌体的提取方法，其特征在于，第一次超速离心条件是在100.000g，4℃条件下离心90分钟。
6.根据权利要求1-4任一所述的间充质干细胞外泌体的提取方法，其特征在于，第二次超速离心条件是在100.000g，4℃条件下离心90分钟。
7.根据权利要求1-4任一所述的间充质干细胞外泌体的提取方法，其特征在于，蔗糖水垫液
8.根据权利要求1-4任一所述的间充质干细胞外泌体的提取方法，其特征在于，在步骤S3中，加入离心管中步骤S2配制的蔗糖水垫液与步骤S1处理后的培养上清液比例为1:10。
...【技术特征摘要】
1.一种间充质干细胞外泌体的提取方法，其特征在于，步骤如下：
2.根据权利要求1所述的间充质干细胞外泌体的提取方法，其特征在于，步骤s1中，是收集的利用不含外泌体的间充质干细胞完全培养基培养的脐带/胎盘间充质干细胞的培养上清液。
3.根据权利要求2所述的间充质干细胞外泌体的提取方法，其特征在于，对收集的间充质干细胞的培养上清液进行三次离心前处理。
4.根据权利要求3所述的间充质干细胞外泌体的提取方法，其特征在于，离心前处理是对收集的培养上清液依次进行300g离心10分钟收集上清液、1000g离心10分钟收集上清液和10000g离心30分钟收集上清液。
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【专利技术属性】
技术研发人员：王艺霏，王丹，刘成龙，刘俊年，
申请(专利权)人：青岛中德华大细胞科技有限责任公司，
类型：发明
国别省市：
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