【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，具体涉及一种用于检测肠道出血性大肠埃希氏菌的引物组及方法。
技术介绍
1、肠道出血性大肠埃希氏菌(enterohemorrhagic escherichia coli，ehec)，革兰氏阴性菌，在一定条件下可能引起食物中毒，临床表现为出血性肠炎、血栓性血小板减少性紫癜、溶血性尿毒综合征等，是全球关注的公共卫生问题。
2、目前，大部分肠道出血性大肠埃希氏菌的检测方法仍然包括传统培养法、生化和血清鉴定法、免疫学法、分子生物学法等。这些检测方法中，传统培养法和生化或血清鉴定法的整体检测时间较长，而且容易受到杂菌菌落形态、数量以及变种菌落的影响，出现假阴性结果；免疫学法，如酶联免疫检测法，检测周期长、步骤繁琐，各种非相关抗原易引起交叉反应，食物加热过程中产生的肠毒素蛋白凝集等也会造成检测结果的假阳性或假阴性；分子生物学法，如多重pcr技术、实时荧光定量pcr法等，检测结果同样容易受到样品成分等各因素的影响。这些常用的ehec检测方法，或是需要长时间的处理、熟练的操作人员和昂贵的实验室设备，或具有不稳定、灵敏度低、准确性差等缺点。操作复杂、检测周期较长、准确性不高，这些不利因素导致在突发的公共卫生事件(如食物中毒)中，难以满足现场快速检测的需求；同时在家庭食品安全检测、食品加工生产抽样检查、冷链运输过程中食品安全监控等不适合进行实验室检测的应用场景中，急需一种新型的快速、精准、简便的检测方法对肠道出血性大肠埃希氏菌进行实时监测。
3、近年来，肠道出血性大肠埃希氏菌(ehec)的检测产品的研发发展
4、目前用于肠道出血性大肠埃希氏菌的检测方法都需要进行增菌的步骤，分离培养法需要经过数天多次增菌，无法用于需要即时检测的场景，如学校企业机关食堂、家庭检测、冷链运输抽检等。
技术实现思路
1、鉴于以上所述现有技术的缺点，本专利技术的目的是提供一种用于检测肠道出血性大肠埃希氏菌的引物组及方法，以解决现有技术中肠道出血性大肠埃希氏菌检测复杂、灵敏度不高、检测时间长的技术问题。
2、本专利技术一方面提供了一种用于检测肠道出血性大肠埃希氏菌的引物组，其特征在于，所述引物组包含引物的核苷酸序列如下所示：
3、seq id no.1：5’-ctctgcaataggtactccat-3’；
4、seq id no.2：5’-tgttaacaaatcctgtcacat-3’；
5、seq id no.3：
6、5’-ttatcccctgtgccactatcatttttacagactatttcatcaggagg-3’；
7、seq id no.4：
8、5’-ttgtttgcagttgatgtcagaggttttcgttcaacaataagccgtaga-3’；
9、seq id no.5：5’-agatccagaggaagggcggttt-3’。
10、其中，正向外引物f3，其核苷酸序列如seq id no.1所示；反向外引物b3，其核苷酸序列如seq id no.2所示；正向内引物fip，其核苷酸序列如seq id no.3所示；反向内引物bip，其核苷酸序列如seq id no.4所示，反向环引物lb，其核苷酸序列如seq id no.5所示。
11、具体的，本专利技术还提供上述引物组的应用，上述引物组可以应用于制备肠道出血性大肠埃希氏菌试剂盒中，或者，利用所述的引物组检测肠道出血性大肠埃希氏菌中的应用，利用上述引物组在检测肠道出血性大肠埃希氏菌的微流控芯片中的应用，尤其是利用环介导等温扩增-光谱传感器-人工智能技术平台检测肠道出血性大肠埃希氏菌。
12、又一方面，本专利技术还提供了一种肠道出血性大肠埃希氏菌的检测方法，包括：利用lamp检测技术结合如上所述的引物组对待测样本进行环介导等温扩增；对扩增产物进行分析。
13、进一步的，所述环介导等温扩增的反应温度为65℃，反应时间为25～30分钟。
14、进一步的，本检测方法在进行环介导等温扩增前，对所述待测样本经过或者不经过增菌。
15、进一步的，所述环介导等温扩增的反应在微流控芯片中进行。
16、进一步的，所述对扩增产物进行分析的方法包括对lamp反应结果进行光谱分析和/或显色分析。
17、本专利技术的有益效果是，本专利技术利用lamp技术结合本专利技术提供的用于检测肠道出血性大肠埃希氏菌的引物组检测肠道出血性大肠埃希氏菌，灵敏度高，特异性好，且可以在1小时内实现肠道出血性大肠埃希氏菌的简便初筛，无需增菌，以满足对肠道出血性大肠埃希氏菌的即时检测。
18、本专利技术的其他特征和优点将在随后的说明书中阐述，并且，部分地从说明书中变得显而易见，或者通过实施本专利技术而了解。本专利技术的目的和其他优点在说明书以及附图中所特别指出的结构来实现和获得。
19、为使本专利技术的上述目的、特征和优点能更明显易懂，下文特举较佳实施例，并配合所附附图，作详细说明如下。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种用于检测肠道出血性大肠埃希氏菌的引物组，其特征在于，所述引物组包含引物的核苷酸序列如下所示：
2.根据权利要求1所述的引物组在制备肠道出血性大肠埃希氏菌试剂盒中的应用。
3.根据权利要求1所述的引物组在检测肠道出血性大肠埃希氏菌中的应用。
4.根据权利要求1所述的引物组在检测肠道出血性大肠埃希氏菌的微流控芯片中的应用。
5.一种肠道出血性大肠埃希氏菌的检测方法，其特征在于，包括：
6.根据权利要求5所述的肠道出血性大肠埃希氏菌的检测方法，其特征在于，
7.根据权利要求5所述的肠道出血性大肠埃希氏菌的检测方法，其特征在于，
8.根据权利要求7所述的肠道出血性大肠埃希氏菌的检测方法，其特征在于，
9.根据权利要求5所述的肠道出血性大肠埃希氏菌的检测方法，其特征在于，
【技术特征摘要】
1.一种用于检测肠道出血性大肠埃希氏菌的引物组，其特征在于，所述引物组包含引物的核苷酸序列如下所示：
2.根据权利要求1所述的引物组在制备肠道出血性大肠埃希氏菌试剂盒中的应用。
3.根据权利要求1所述的引物组在检测肠道出血性大肠埃希氏菌中的应用。
4.根据权利要求1所述的引物组在检测肠道出血性大肠埃希氏菌的微流控芯片中的应用。
5.一种肠...
【专利技术属性】
技术研发人员：关国良，陈巧玲，吴婧，
申请(专利权)人：常州先趋医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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