【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及抗体药物领域，尤其是涉及一种肿瘤微环境特异激活的her2-cd3双特异性抗体。
技术介绍
1、多特异抗体是指可以结合两个不同抗原或一个抗原不同表位的特殊抗体，现已成为抗体工程领域的研究热点，在肿瘤免疫治疗及自身免疫疾病等领域具有广阔的应用前景。
2、2014年，amgen公司研制的blinatumomab多特异抗体获得fda批准用于急性淋巴细胞白血病的治疗。2017年11月，罗氏制药公司研制的emicizumab被fda批准上市，用于a型血友病的治疗。随着多特异抗体的临床应用成功及批准上市，多特异抗体已成为药物研究中的一个新热点。但是，多特异抗体还是有一些亟待解决的问题，细胞因子风暴、神经毒性等不良反应以及生产工艺问题是多特异抗体的主要问题。
3、因此，本领域仍然需要提供安全性高、特异性强、抗肿瘤活性高的多特异性抗体。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种肿瘤微环境特异激活的her2-cd3双特异性抗体。
2、本专利技术的目的还在于提供一种可激活的多特异性抗体的构建方法及其用途。
3、在本专利技术的第一方面，提供了一种突变型的cd3抗体，所述突变型的cd3抗体相对于野生型的cd3抗体序列，在重链可变区和/或轻链可变区的互补决定区(cdr区)引入一个或多个突变，所述突变选自下组：
4、重链可变区的m34、s53、y61、d68、f104、w111或f112的位置；和/或轻链可变区的y34、n54、k5
5、其中，所述野生型的cd3抗体结合cd3的亲和力为e0，突变型的cd3抗体结合cd3的亲和力为e1，e1/e0≤5.5(较佳地e1/e0≤3，较佳地≤1.5，更佳地e1/e0≤1)；
6、其中，所述野生型的cd3抗体的重链可变区含有以下三个互补决定区cdr：
7、seq id no.1所示的vh-cdr1，
8、seq id no.2所示的vh-cdr2，和
9、seq id no.3所示的vh-cdr3；以及
10、轻链可变区含有以下三个互补决定区cdr：
11、seq id no.5所示的vl-cdr1，
12、seq id no.6所示的vl-cdr2，和
13、seq id no.7所示的vl-cdr3。
14、在另一优选例中，所述野生型cd3抗体包括：单链抗体、双链抗体、单克隆抗体、嵌合抗体(如人鼠嵌合抗体)、鼠源抗体、或人源化抗体。
15、在另一优选例中，所述结合cd3的亲和力为结合cd3的ec50值。
16、在另一优选例中，所述的突变型的cd3抗体与cd3结合的亲和力e1与相应野生型cd3抗体与cd3结合的亲和力e0之比(e1/e0)为0.4-5.5，较佳地为0.5-2，较佳地为0.7-1.5，和更佳地0.8-1.2。
17、在另一优选例中，所述野生型cd3抗体为cd3鼠源抗体或cd3人源化抗体。
18、在另一优选例中，所述野生型cd3抗体包含如seq id no.10所示的重链可变区，和如seq id no.11所示的轻链可变区。
19、在另一优选例中，所述cd3人源化抗体包含如seq id no.4所示的重链可变区，和如seq id no.8所示的轻链可变区。
20、在另一优选例中，所述突变型的cd3抗体相对于野生型cd3抗体的重链可变区和/或轻链可变区的互补决定区(cdr)包含一个或多个突变；较佳地为1个、2个、3个、4个或5个氨基酸的突变。
21、在另一优选例中，所述突变型的cd3抗体相对于野生型cd3抗体的重链可变区的互补决定区(cdr)包含一个或多个氨基酸替换为半胱氨酸(cys)的突变；和/或相对于野生型cd3抗体的轻链可变区的互补决定区(cdr)包含一个或多个氨基酸替换为半胱氨酸(cys)的突变。
22、在另一优选例中，所述突变型的cd3抗体在对应于野生型cd3抗体的重链可变区的互补决定区包含选自下组的突变：m34c、s53c、y61c、d68c、f104c、w111c、f112c、或其组合，优选包含y61c的突变；和/或
23、对应于野生型cd3抗体的轻链可变区的互补决定区包含选自下组的突变：y34c、n54c、k55c、r56c、w93c、y94c、n96c、或其组合，优选包含y34c的突变。
24、在另一优选例中，针对抗体的氨基酸残基提及的氨基酸的所有位置编号均基于kabat编号。
25、在另一优选例中，所述抗体的可变区的互补决定区(cdr)内不形成链间二硫键或链内二硫键。
26、在另一优选例中，所述突变型的cd3抗体的重链可变区含有以下三个互补决定区cdr：
27、seq id no.1所示的vh-cdr1，
28、seq id no.9所示的vh-cdr2，和
29、seq id no.3所示的vh-cdr3；以及
30、轻链可变区含有以下三个互补决定区cdr：
31、seq id no.5所示的vl-cdr1，
32、seq id no.6所示的vl-cdr2，和
33、seq id no.7所示的vl-cdr3。
34、在另一优选例中，所述突变型的cd3抗体包括：(i)fab片段；(ii)f(ab')2片段；(iii)fd片段；(iv)fv片段；(v)单链fv(scfv)分子；或(vi)dab片段。
35、在另一优选例中，所述突变型的cd3抗体为双特异性、三特异性抗体或多特异性抗体。
36、在另一优选例中，所述突变型的cd3抗体包括经修饰的突变型的cd3抗体。
37、在另一优选例中，所述经修饰的突变型的cd3抗体为肿瘤微环境特异激活的抗体(tmeabody)，即掩蔽型抗体。
38、在另一优选例中，所述经修饰的突变型的cd3抗体包括但不限于，将掩蔽体(blocker)通过可裂解的连接肽连接至突变型的cd3抗体的突变位点处的半胱氨酸，所述突变位点位于突变型的cd3抗体的重链可变区和/或轻链可变区的互补决定区(cdr区)。
39、在另一优选例中，所述突变型的cd3抗体包括经修饰的突变型的cd3抗体，其具有如下所示的结构：
40、ab-(p-r1)n
41、其中，
42、ab为突变型的cd3抗体；
43、r1各自独立地为掩蔽体(blocker)；
44、p为可裂解的连接肽；
45、n为1-5的正整数；
46、“-”为化学键或接头或连接子。
47、在另一优选例中，所述掩蔽体是指阻止ab与它的配体或受体结合的基团。<本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种突变型的CD3抗体，其特征在于，所述突变型的CD3抗体相对于野生型的CD3抗体序列，在重链可变区和/或轻链可变区的互补决定区(CDR区)引入一个或多个突变，所述突变选自下组：
2.如权利要求1所述的突变型的CD3抗体，其特征在于，所述突变型的CD3抗体包括经修饰的突变型的CD3抗体，其具有如下所示的结构：
3.一种多特异性抗体，其特征在于，所述多特异性抗体包括：如权利要求1所述的突变型的CD3抗体或如权利要求2所述的经修饰的突变型的CD3抗体。
4.一种重组蛋白，其特征在于，所述的重组蛋白包括：
5.一种分离的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸编码权利要求1所述的突变型的CD3抗体、如权利要求2所述的经修饰的突变型的CD3抗体、如权利要求3所述的多特异性抗体或如权利要求4所述的重组蛋白。
6.一种载体，其特征在于，所述载体含有权利要求5所述的多核苷酸。
7.一种遗传工程化的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞含有权利要求6所述的载体或基因组中整合有权利要求5所述的多核苷酸。
8.一种制备权利
9.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物含有：
10.一种免疫偶联物，其特征在于，所述免疫偶联物包括：
...【技术特征摘要】
1.一种突变型的cd3抗体，其特征在于，所述突变型的cd3抗体相对于野生型的cd3抗体序列，在重链可变区和/或轻链可变区的互补决定区(cdr区)引入一个或多个突变，所述突变选自下组：
2.如权利要求1所述的突变型的cd3抗体，其特征在于，所述突变型的cd3抗体包括经修饰的突变型的cd3抗体，其具有如下所示的结构：
3.一种多特异性抗体，其特征在于，所述多特异性抗体包括：如权利要求1所述的突变型的cd3抗体或如权利要求2所述的经修饰的突变型的cd3抗体。
4.一种重组蛋白，其特征在于，所述的重组蛋白包括：
5.一种分离的多核苷酸，其特征在于...
【专利技术属性】
技术研发人员：丁成立，刘源，刘辰，
申请(专利权)人：英脉德医疗科技广东有限公司，
类型：发明
国别省市：
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