【技术实现步骤摘要】
技术介绍
1、光动力疗法(pdt)已成为恶性肿瘤治疗的一种替代疗法，通过使用光敏剂(ps)来治疗恶性肿瘤，光敏剂在光辐射下产生细胞毒性活性氧(ros)。大多数ps是基于ii型机制，其中单线态氧(1o2)是通过ps与氧激发态之间的能量传递产生的。然而，随着氧气的消耗，ii型pdt的治疗效果将受到氧气水平不足的严重阻碍。幸运的是，i型pss可以减少对氧的依赖，克服肿瘤缺氧，近年来越来越受到关注。i型pdt依赖于超氧阴离子自由基(o2-·)，可以充分利用haber-weiss/fenton反应来补偿氧的消耗。因此，开发具有低氧依赖性的有效i型pss具有重要意义。
2、共轭聚合物具有高光集成度和快速能量传递的特性，在传感、成像和治疗等领域得到了积极的研究。在我们之前的研究中，聚苯乙烯(ppes)作为pdt的ii型pss被广泛研究。近年来，许多研究人员都在努力开发i型pss来诱导缺氧下的细胞凋亡。然而，基于共轭聚合物平台的i型ps很少被报道，因为i型ps的设计仍然是一个挑战。在i型过程中，ps首先在光照射下从附近底物中获得一个电子生成阴离子自由基(ps-·)，并将电子转移到分子氧中生成o2-·。因此，我们假设如果在现有的ppes中引入富电子基团，将有可能增加电子云密度，提高光敏剂的电子传递效率，从而将ii型ps转化为i型ps。
3、我们设计并合成了共轭聚合物ppe3-iii，然而，这种i型ps对肿瘤的选择性有限，在光照射下发挥光疗作用的同时，也对周围正常组织产生光毒性，严重限制了其临床应用。因此，我们期望开发一种
技术实现思路
1、本专利技术展示了一种新颖、简单、高效的联合治疗策略，即type-i型光敏剂与铂药直接结合。在type-i型光敏剂上引入具有化疗效果的铂药，光敏剂进入细胞核后，pt与dna结合并从共轭聚苯乙炔(ppes)光敏剂上解离，发挥化疗效果的同时，恢复光敏剂的光动力治疗活性。为实现上述目的，本专利技术经过简单的聚合反应得到一系列光敏剂。本专利技术的方法包括如下的具体步骤：
2、
3、合成路线如下：
4、(a)在脱气thf/三乙胺的混合物中溶解化合物1、2和3。在氩气气氛下，分别加入pd(pph3)2cl2和cui。37℃搅拌17h后，用dcm提取，分别用饱和nacl和nh4cl溶液洗涤。将有机相组合，用无水na2so4干燥，过滤，减压浓缩。将残渣溶解在少量的dcm中，缓慢加入过量的正己烷中，得到聚合物ppe3-ⅰ，为棕色固体。技术路线为：
5、
6、(b)ppe3-ⅰ溶于脱气thf/etoh中。缓慢加入三甲胺。37℃搅拌17h后，用dcm萃取，分别用饱和nacl和nh4cl溶液洗涤。将有机相组合，用无水na2so4干燥，过滤，减压浓缩。将残留物溶于水中，用去离子水透析3天。冷冻干燥后得到棕黄色固体ppe3-ⅱ。技术路线为：
7、
8、(c)将ppe3-ⅱ溶于脱气的thf/h2o中，加入naoh。37℃搅拌17h后，用dcm萃取，再用饱和nacl溶液洗涤。然后用去离子水透析3天。冷冻干燥后得到黄色固体ppe3-ⅲ。技术路线为：
9、
10、所述步骤(a)中采用的溶剂thf/三乙胺为vthf/v三乙胺＝2：1。
11、所述步骤(a)中化合物5、化合物2、化合物3、pd(pph3)2cl2、cui的物质的量比为0.2：0.8：1：0.6：1.6。
12、所述步骤(b)中采用的溶剂thf/etoh为vthf/vetoh＝2：1。
13、所述步骤(b)中ppe3-ⅰ、三甲胺的物质的量比为1：40。
14、所述步骤(c)中采用的溶剂thf/水为vthf/v水＝2：1。
15、所述步骤(c)中ppe3-ⅱ、naoh的物质的量比为1：15。
16、本专利技术的光敏剂活性氧测试方法如下所述。以9,10-蒽二基-双(亚甲基)二丙二酸(abda)为1o2探针进行测试，取20μl 1mm的光敏剂溶于2ml溶有1o2探针的溶液中，其中1o2探针的浓度为10μm，溶液由thf:h2o＝2:8组成。以2,7-二氯荧光素(dcfh)为活性氧探针进行测试，取20μl 1mm的光敏剂溶于2ml溶有活性氧探针的溶液中，其中活性氧探针的浓度为10μm，溶液由thf:h2o＝2:8组成。以二氢罗丹明123(dhr123)为o2-·和oh·探针进行测试，取20μl 1mm的光敏剂溶于2ml溶有dhr123探针的溶液中，其中o2-·探针的浓度为5μm，溶液由thf:h2o＝2:8组成。以二氢乙锭(dhe)为o2-·探针进行测试，取20μl 1mm的光敏剂溶于2ml溶有o2-·探针的溶液中，其中o2-·探针的浓度为5μm，溶液由thf:h2o＝2:8组成。
17、本专利技术的细胞内单线态氧实验方法如下所述。以指数生长速率的hela细胞在高糖dulbecco's modified eagle medium(dmem)中于37℃、5％ co2气氛下培养24h。在96孔板中，细胞接种12小时，然后用ppe3-ⅲ-pt(20.0μm)孵育12h。然后用pbs洗涤细胞，再用dcfh-da(10.0μm)和dhe(10.0μm)孵育30分钟。将细胞分为4组:1)ppe3-iii-pt+21％ o2+dcfh-da+l；2)ppe3-iii-pt+0.1％ o2+dcfh-da+l；3)ppe3-iii-pt+21％ o2+dhe+l；4)ppe3-iii-pt+0.1％o2+dhe+l；在不同氧浓度下，led光照射10min后，倒置荧光显微镜对各组进行成像。λex＝500nm，λem＝525nm(dcfh-da)；λex＝520nm，λem＝600nm(dhe)。
18、本专利技术的光敏剂细胞毒性测试方法如下所述。通过测定细胞活力来评估ppe3-iii-pt对hela细胞在光照和正常氧或缺氧条件下的毒性。将hela细胞按104/孔的密度接种于96孔板中，孵育24h，然后按不同处理分为5组本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种可用于光动力治疗和化疗联合治疗的DNA激活的I型光敏剂，其特征在于，其结构如下：
2.一种可用于光动力治疗和化疗联合治疗的DNA激活的I型光敏剂的合成方法，其特征在于包括如下步骤：
3.根据权利要求2所述的一种可用于光动力治疗和化疗联合治疗的DNA激活的I型光敏剂的合成方法，其特征在于，步骤a中采用的溶剂THF/三乙胺为VTHF/V三乙胺＝2：1。
4.根据权利要求2所述的一种可用于光动力治疗和化疗联合治疗的DNA激活的I型光敏剂的合成方法，其特征在于，步骤a中化合物5、化合物2、化合物3、Pd(PPh3)2Cl2、CuI的物质的量比为0.2：0.8：1：0.6：1.6。
5.根据权利要求2所述的一种可用于光动力治疗和化疗联合治疗的DNA激活的I型光敏剂的合成方法，其特征在于，步骤b中采用的溶剂THF/EtOH为VTHF/VEtOH＝2：1。
6.根据权利要求2所述的一种可用于光动力治疗和化疗联合治疗的DNA激活的I型光敏剂的合成方法，其特征在于，步骤b中PPE3-Ⅰ、三甲胺的物质的量比为1：40。
8.根据权利要求2所述的一种可用于光动力治疗和化疗联合治疗的DNA激活的I型光敏剂的合成方法，其特征在于，步骤c中PPE3-Ⅱ、NaOH的物质的量比为1：15。
...【技术特征摘要】
1.一种可用于光动力治疗和化疗联合治疗的dna激活的i型光敏剂，其特征在于，其结构如下：
2.一种可用于光动力治疗和化疗联合治疗的dna激活的i型光敏剂的合成方法，其特征在于包括如下步骤：
3.根据权利要求2所述的一种可用于光动力治疗和化疗联合治疗的dna激活的i型光敏剂的合成方法，其特征在于，步骤a中采用的溶剂thf/三乙胺为vthf/v三乙胺＝2：1。
4.根据权利要求2所述的一种可用于光动力治疗和化疗联合治疗的dna激活的i型光敏剂的合成方法，其特征在于，步骤a中化合物5、化合物2、化合物3、pd(pph3)2cl2、cui的物质的量比为0.2：0.8：1：0.6：1.6。
5.根据权利要求2所述的一种...
【专利技术属性】
技术研发人员：王本花，程文硕，程强，黎宇嫣，章晗坤，姚朝怡，刘清，宋相志，
申请(专利权)人：中南大学，
类型：发明
国别省市：
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